組織內(nèi)及外周血細(xì)胞間粘附分子-1與血管細(xì)胞間粘附分子-1在胰腺癌患者中的變化研究

錢劍，陳瑤，齊樂龍

(浙江省常山縣人民醫(yī)院 消化內(nèi)科，浙江 常山 324000)

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組織內(nèi)及外周血細(xì)胞間粘附分子-1與血管細(xì)胞間粘附分子-1在胰腺癌患者中的變化研究

錢劍，陳瑤，齊樂龍

(浙江省常山縣人民醫(yī)院 消化內(nèi)科，浙江 常山 324000)

目的 探討胰腺癌患者瘤體及外周血細(xì)胞間粘附分子-l(intercellular adhesion molecular-l，ICAM-l)和血管細(xì)胞間粘附分子-l(vaseular cell adhesion molecular-l，VCAM-l)水平的變化。方法 選取本院2013年8月～2014年10月確診為胰腺癌的患者28例為實(shí)驗(yàn)組，急性胰腺炎需切除胰腺組織28例為對(duì)照組，選取28例體檢健康者為正常組，測(cè)定各組胰腺組織中ICAM-1、VCAM-1水平；檢測(cè)血清中可溶性細(xì)胞間粘附分子(soluble intercellular adhesion molecule-1，sICAM-1)、可溶性血管細(xì)胞粘附分子(soluble vascular cell adhesion molecule-1，sVCAM-1)水平。結(jié)果 實(shí)驗(yàn)組組織中ICAM-1、VCAM-1水平顯著高于對(duì)照組(P<0.05)；實(shí)驗(yàn)組血清中sICAM-1、sVCAM-1濃度水平顯著高于對(duì)照組和正常組(P<0.05)；實(shí)驗(yàn)組血清sICAM-1、sVCAM-1水平與癌胚抗原(carcino-embryonic antigen,CEA)水平無相關(guān)關(guān)系(r=0.116，P>0.05；r=0.093，P>0.05)，與CA19-9水平呈正相關(guān)(r=0.573，P<0.01；r=0.435，P<0.05)；實(shí)驗(yàn)組手術(shù)后血清中sICAM-1、sVCAM-1濃度水平顯著低于手術(shù)前(P<0.05)。結(jié)論 胰腺癌患者瘤體及血清中ICAM-1和VCAM-1顯著高于急性胰腺炎患者及正常健康人，ICAM-1和VCAM-1的表達(dá)可能與胰腺癌的發(fā)生有相關(guān)性，對(duì)胰腺癌的早期診療具有重要的意義。

胰腺癌；ICAM-1；VCAM-1；sICAM-1；sVCAM-1

胰腺癌多發(fā)于45～65歲的中老年，男性多于女性，其臨床主要表現(xiàn)為腹痛、食欲不振、消瘦和黃疸等。2003～2007年中國胰腺癌世界人口標(biāo)化發(fā)病率4.62/10萬，占全部惡性腫瘤新發(fā)病例的2.56%，惡性腫瘤中排位第7位[1]。腫瘤細(xì)胞強(qiáng)大的侵襲性和轉(zhuǎn)移的快速性是胰腺癌患者預(yù)后差的主要原因，也是其早期診斷和治療的難點(diǎn)之一[2]。探索胰腺癌的侵潤、轉(zhuǎn)移機(jī)制對(duì)其臨床診治具有重要的意義。有研究證實(shí)[3]，腫瘤細(xì)胞間的粘附作用低于正常細(xì)胞，故腫瘤細(xì)胞可從原發(fā)部位脫離細(xì)胞間的粘附作用，游向周圍的組織器官，血管內(nèi)同質(zhì)或異質(zhì)瘤栓形成，從而游出血管，轉(zhuǎn)移至其他組織器官。粘附因子的表達(dá)水平與腫瘤的侵潤、轉(zhuǎn)移密切相關(guān)。細(xì)胞間粘附分子-l(intercellular adhesion molecular-l，ICAM-l)和血管細(xì)胞間粘附分子-l(vaseular cell adhesion molecular-l，VCAM-l)均屬于粘附因子。目前關(guān)于胰腺癌患者瘤體及外周血ICAM-1、VCAM-1水平的研究較少。本實(shí)驗(yàn)通過測(cè)定胰腺癌患者瘤體組織中ICAM-1、VCAM-1的表達(dá)水平及其在血清中的含量，探究胰腺癌侵潤、轉(zhuǎn)移的機(jī)制，以期為胰腺癌患者的早期診治提供依據(jù)。

1 資料與方法

1.1 一般資料 收集浙江省常山縣人民醫(yī)院于2013年8月～2014年10月確診為胰腺癌并進(jìn)行手術(shù)治療的患者28例為實(shí)驗(yàn)組，年齡在40～70歲，平均年齡(52.23±6.03)歲，男性17例，女性11例；急性胰腺炎需胰腺切除患者28例為對(duì)照組，年齡在40～70歲，平均年齡(52.69±6.46)歲，男性16例，女性12例；隨機(jī)選取在浙江省常山縣人民醫(yī)院體檢中心體檢正常的健康者28例為正常組，年齡均在40～70歲，平均年齡(50.92±6.43)歲，男性18例，女性10例。患者一般資料相比較，差異不具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

1.1.1 納入標(biāo)準(zhǔn)：①胰腺癌患者符合《現(xiàn)代腹部急癥外科學(xué)》[4]關(guān)于胰腺癌的診斷標(biāo)準(zhǔn)，且均經(jīng)術(shù)后病理證實(shí)；②急性胰腺炎患者符合《現(xiàn)代腹部急癥外科學(xué)》[4]關(guān)于急性胰腺炎的診斷標(biāo)準(zhǔn)，且均經(jīng)術(shù)后病理證實(shí)；③年齡在40～70歲；④患者及家屬自愿參與本實(shí)驗(yàn)，并簽署知情同意書。

1.1.2 排除標(biāo)準(zhǔn)：①伴有嚴(yán)重的肝功能、腎功能不全；②患者或家屬拒絕參與本實(shí)驗(yàn)；③伴有精神疾病不能合作者；④伴有心衰、、嚴(yán)重高血壓、呼吸衰竭及血液系統(tǒng)疾病等嚴(yán)重的原發(fā)疾病；⑤年齡小于40歲或大于70歲；⑥術(shù)前進(jìn)行放療或化療。

1.2 研究方法 分別從實(shí)驗(yàn)組與對(duì)照組手術(shù)過程中切取部分組織，組織取自胰腺的典型部位，用ELISA 方法測(cè)定胰腺組織中ICAM-1、VCAM-1蛋白水平。實(shí)驗(yàn)組與對(duì)照組患者于手術(shù)前1天空腹抽取4 mL靜脈血，正常健康者同期空腹抽取4 mL靜脈血，實(shí)驗(yàn)組與對(duì)照組患者于術(shù)后10 d再次空腹抽取4 mL靜脈血，裝入預(yù)先裝有EDTA的抗凝采血管中。將采血管按3000 r/min離心10 min，待離心結(jié)束后將上層血清裝入EP管中，放入-80 ℃冰箱中保存?zhèn)溆茫肊LISA法檢測(cè)各組組織及血清中ICAM-1、VCAM-1濃度水平。

1.3 觀察指標(biāo)及檢測(cè)方法

1.3.1 血清中sICAM-1、sVCAM-1濃度的測(cè)定：采用ELISA檢測(cè)所有研究對(duì)象血清中sICAM-1、sVCAM-1的濃度水平試劑盒由武漢博士的生物技術(shù)有限公司提供，操作步驟如下：首先用人相應(yīng)抗體免疫實(shí)驗(yàn)微孔板，再分別向微孔中加入sICAM-1、sVCAM-1，與 HRP 標(biāo)記的抗體結(jié)合，形成抗體-抗原-酶標(biāo)抗體復(fù)合物，最后加底物 TMB 顯色。顯色后，TMB在HRP酶的催化下發(fā)生連續(xù)的顏色轉(zhuǎn)化，最后變?yōu)辄S色。根據(jù)顏色深淺程度與標(biāo)本血清中的sICAM-1、sVCAM-1濃度呈正比例關(guān)系，用全自動(dòng)酶標(biāo)儀測(cè)定標(biāo)本的吸光度值，最終通過繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線可精確計(jì)算標(biāo)品中sICAM-1、sVCAM-1的濃度。

1.3.2 胰腺組織中ICAM-1、VCAM-1水平：采用ELISA方法測(cè)定胰腺組織中ICAM-1、VCAM-1蛋白的表達(dá)水平采用BM-MNC采集、分離胰腺組織，研磨，離心后吸取上清液。ICAM-1、VCAM-1試劑盒由武漢博士的生物技術(shù)有限公司提供，嚴(yán)格按著說明書操作，詳細(xì)步驟同“1.3.1”項(xiàng)，檢測(cè)組織中ICAM-1、VCAM-1水平。

2 結(jié)果

2.1 胰腺組織中ICAM-1、VCAM-1蛋白水平比較 實(shí)驗(yàn)組患者瘤體組織ICAM-1、VCAM-1蛋白水平顯著高于對(duì)照組(P<0.05)。見表1。

表1 胰腺組織中ICAM-1、VCAM-1水平的比較Tab.1 Comparison of ICAM-1,VCAM-1 levels in pancreatic ±s)

*P<0.05，與對(duì)照組比較，compared with control group

2.2 各組血清中sICAM-1、sVCAM-1濃度水平的比較 實(shí)驗(yàn)組和對(duì)照組血清sICAM-1、sVCAM-1濃度顯著高于正常組(P<0.05);實(shí)驗(yàn)組sICAM-1、sVCAM-1濃度水平顯著高于對(duì)照組(P<0.05)。見表2。

表2 血清中sICAM-1、sVCAM-1水平的比較Tab.2 Comparison of sICAM-1,sVCAM-1 levels in ±s)

#P<0.05，與正常組比較，compared with normal group；*P<0.05，與對(duì)照組比較，compared with control group

2.3 實(shí)驗(yàn)組血清sICAM-l水平與CEA、CA19-9水平的相關(guān)性分析 實(shí)驗(yàn)組血清中sICAM-1(0.652±0.092) ng/mL水平與CEA水平(5.34±0.79)U/mL無相關(guān)關(guān)系(r=0.116，P>0.05)，與CA19-9水平(456.25±62.83)U/mL呈正相關(guān)關(guān)系(r=0.573，P<0.01)。

2.4 實(shí)驗(yàn)組血清sVCAM-l水平與CEA、CA19-9水平的相關(guān)性分析 實(shí)驗(yàn)組血清中sVCAM-1(0.702±0.107)ng/mL水平與CEA水平(5.34±0.79)U/mL無相關(guān)關(guān)系(r=0.093，P>0.05)，與CA19-9水平(456.25±62.83)U/mL呈正相關(guān)關(guān)系(r=0.435，P<0.05)。

2.5 實(shí)驗(yàn)組手術(shù)前后血清sICAM-1、sVCAM-1濃度水平的比較 手術(shù)治療后，實(shí)驗(yàn)組血清中sICAM-1、sVCAM-1濃度水平顯著低于治療前(P<0.05)。見表3。

表3 實(shí)驗(yàn)組手術(shù)前后血清sICAM-1、sVCAM-1濃度水平的比較Tab.3 Comparison of sICAM-1，sVCAM-1 levels pre-operation of experiment ±s)

△P<0.05，與手術(shù)前比較，compared with pre-operation

3 討論

胰腺癌是一種惡性程度極高的腫瘤，近年來，其發(fā)病率和死亡率呈逐年上升的趨勢(shì)。胰腺癌的發(fā)病原因及發(fā)病機(jī)制尚不明確，其臨床表現(xiàn)以腹痛、嘔吐、食欲低下或黃疸為主要特征，多發(fā)于中老年，男性與女性之比大約為1.89:1[5]。有流行病學(xué)研究顯示[6]，胰腺癌患者的5年生存率僅為8.5%，其病情變化較快、預(yù)后較差。在西方國家，胰腺癌是最常見的10種實(shí)體性惡性腫瘤之一。在過去10年中，英國胰腺癌的發(fā)病率增多了3倍，確診后僅有不到10%的患者生存率超過1年，不到1%的患者生存率超過5年，在近百種惡性腫瘤中預(yù)后最差[7]。在我國，每年因患胰腺癌的死亡人數(shù)約19.6萬人[8]。胰腺位于腹膜后位，位置較為隱蔽，許多重要組織器官位居其周圍，門靜脈等大血管被胰腺所包繞。胰腺癌一旦發(fā)生，便較易侵襲周圍的腹主動(dòng)脈、門靜脈等大血管。另外，胰腺癌還可高度侵襲膽總管胰腺段，即使早期胰腺癌與其相隔，也可出現(xiàn)“圍管浸潤”的侵襲[9]。淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移是胰腺癌最主要的轉(zhuǎn)移方式，早期即可出現(xiàn)[10]。由于其侵襲性、轉(zhuǎn)移性極強(qiáng)，臨床上無法實(shí)現(xiàn)對(duì)胰腺癌的早期診療，故其預(yù)后差、死亡率高。

本研究結(jié)果發(fā)現(xiàn)，實(shí)驗(yàn)組組織和血清中ICAM-1、VCAM-1的表達(dá)顯著高于對(duì)照組和正常組(P<0.05)，提示ICAM-1、VCAM-1可能與胰腺癌的侵潤和轉(zhuǎn)移有關(guān)。粘附因子ICAM-1參與各種細(xì)胞間的粘附作用，還表達(dá)于多種腫瘤細(xì)胞表面，尤其是細(xì)胞表面的活動(dòng)期[11]。ICAM-1的適量表達(dá)可促進(jìn)機(jī)體免疫系統(tǒng)清除外源抗原和腫瘤細(xì)胞等，但I(xiàn)CAM-1長時(shí)間的高表達(dá)可能會(huì)抑制機(jī)體的免疫系統(tǒng)，抑制機(jī)體對(duì)外源抗原、腫瘤細(xì)胞等的清除，有害于機(jī)體[12]。白細(xì)胞、內(nèi)皮細(xì)胞處于靜息狀態(tài)時(shí)，ICAM-1表達(dá)呈低水平。但是，在各種炎癥細(xì)胞因子的作用下，ICAM-1的表達(dá)可快速上調(diào)，如白細(xì)胞、內(nèi)皮細(xì)胞和腫瘤細(xì)胞等[13]。由此可見，ICAM-1在靜息狀態(tài)下呈低水平表達(dá)，但在適當(dāng)因素的誘導(dǎo)下可快速表達(dá)上調(diào)[14]。有研究表明[15]，大腸癌細(xì)胞、乳腺癌細(xì)胞等腫瘤細(xì)胞在炎癥反應(yīng)的刺激下，ICAM-1基因的表達(dá)呈上調(diào)趨勢(shì)，研究認(rèn)為ICAM-1通過炎癥反應(yīng)參與的腫瘤的侵潤和轉(zhuǎn)移。VCAM-l主要表達(dá)于內(nèi)皮細(xì)胞、巨噬細(xì)胞、上皮細(xì)胞、樹突狀細(xì)胞等細(xì)胞表面[16]。標(biāo)準(zhǔn)的免疫組化方法難于檢測(cè)正常血管上VCAM-l的表達(dá)，其是否真正表達(dá)無法確定。因此，本實(shí)驗(yàn)采用ELISA方法定量檢測(cè)胰腺組織中VCAM-l蛋白水平。在多種炎癥性細(xì)胞因子的刺激作用下，VCAM-l在細(xì)胞表面上的表達(dá)可快速上調(diào)。細(xì)胞與細(xì)胞間的粘附作用可阻止癌細(xì)胞侵潤周圍組織，粘附作用的破壞可減少腫瘤細(xì)胞運(yùn)動(dòng)的阻力，促進(jìn)其離開原發(fā)部位，侵潤周圍正常組織，進(jìn)而向遠(yuǎn)處器官轉(zhuǎn)移。

本研究表明，血清sICAM-1、sVCAM-1水平與CA19-9水平呈相關(guān)關(guān)系(r=0.573，P<0.01；r=0.435，P<0.05)。有研究表明[17]，胰腺癌的早期診斷仍缺乏特異性較高的敏感指標(biāo)。B超定位下進(jìn)行經(jīng)皮或經(jīng)內(nèi)窺鏡穿刺取組織的細(xì)胞學(xué)檢測(cè)特異性較高，但敏感性較低，因此結(jié)果陰性的患者難以排除惡性病變。若腫瘤小并能夠進(jìn)行手術(shù)切除的病變，其敏感性必然會(huì)下降。CA19-9是一種腫瘤相關(guān)抗原，可被單克隆抗體所識(shí)別，與胃腸道腫瘤標(biāo)志物有關(guān)，在消化道內(nèi)含量最高[18]。有研究表明[19]，CA19-9作為胰腺癌檢查的首選腫瘤標(biāo)志物，其診斷敏感性可達(dá)65.0%～92.5%，胰腺癌患者血清中CA19-9常有所升高。盡管CA19-9升高對(duì)于診斷胰腺癌特異性較高，但往往表現(xiàn)于進(jìn)展期患者。本研究中，ICAM-1、VCAM-1在瘤體組織及血清中表達(dá)均升高，且與CA19-9表達(dá)水平具有相關(guān)性。由此可見，聯(lián)合檢測(cè)ICAM-1、VCAM-1和腫瘤標(biāo)記物如CA19-9可能對(duì)胰腺癌早期診斷和治療具有一定的應(yīng)用價(jià)值。

本研究通過對(duì)胰腺癌患者瘤體及血清中ICAM-1、VCAM-1表達(dá)進(jìn)行檢測(cè)并比較分析，證實(shí)了ICAM-1、VCAM-1在瘤體組織及血清中表達(dá)均升高，且與CA19-9表達(dá)水平具有相關(guān)性。因此，聯(lián)合檢測(cè)ICAM-1、VCAM-1和腫瘤標(biāo)記物(如CA19-9)可能對(duì)胰腺癌早期診斷和治療具有一定的應(yīng)用價(jià)值。后續(xù)實(shí)驗(yàn)將尋找新的信號(hào)分子和目的基因，為本研究所反映的現(xiàn)象作出進(jìn)一步論證和分析。

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(編校：王冬梅)

Changes of intercellular adhesion molecular-l and vaseular cell adhesion molecular-l in patients with pancreatic cancer

QIAN Jian, CHEN Yao, QI Le-long

(Department of Gastroenterology, People’s Hospital of Changshan, Zhejiang Province, Changshan 324000, China)

ObjectiveTo investigate the changes of VCAM-1 and ICAM-1 levels in tumor and peripheral blood in pancreatic cancer patients.Methods28 cases with pancreatic cancer were selected from August 2013 to Octorber 2014 as experiment group,28 cases with acute pancreatitis who needed removal of pancreas as control group,28 healthy people as normal group.ICAM-1 and VCAM-1 in tissue were compared and sVCAM-1 and sICAM-1 in serum were compared.ResultsICAM-1 and VCAM-1 in tissue of experiment group were significantly higher than normal group(P<0.05),sICAM-1,sVCAM-1 in serum of experiment group were higher than control group and normal group(P<0.05),there were no correlation between CEA and sICAM-1,sVCAM-1 in serum of experiment group(r=0.116，P>0.05；r=0.093，P>0.05),there were positive correlation between CA19-9 and sICAM-1,sVCAM-1 in serum of experiment group(r=0.573,P<0.01；r=0.435,P<0.05).Compared with pre-operation, the serum concentrations of sVCAM-1 and sICAM-1 were lower(P<0.05).ConclusionICAM-1 and VCAM-1in pancreatic cancer patients are significantly higher than that in acute pancreatitis patients and healthy people, the correlation of ICAM-1 and VCAM-1 expression in pancreatic cancer, early diagnosis and treatment of pancreatic cancer has important significance.

pancreatic cancer; ICAM-1; VCAM-1; sICAM-1; sVCAM-1

錢劍，男，本科，主治醫(yī)生，研究方向：消化內(nèi)科疾病研究，E-mail：cshanqj@126.com。

R735.9

A

1005-1678(2015)06-0080-03