PiC在阿霉素所致SD大鼠心肌損傷中的表達情況及姜黃素的保護作用

盧均坤，王燕琴，初而復，李欣，張明亮，Sudeep，齊向前

(1.天津醫科大學，天津 300070；2.佳木斯大學附屬第一醫院 心內二科，黑龍江 佳木斯 154003；3.佳木斯大學校醫院 超聲科，黑龍江 佳木斯 154003；4.天津泰達國際心血管病醫院 內二科，天津 300457)

?

PiC在阿霉素所致SD大鼠心肌損傷中的表達情況及姜黃素的保護作用

盧均坤1,2，王燕琴3，初而復2，李欣2，張明亮2，Sudeep2，齊向前4Δ

(1.天津醫科大學，天津 300070；2.佳木斯大學附屬第一醫院 心內二科，黑龍江 佳木斯 154003；3.佳木斯大學校醫院 超聲科，黑龍江 佳木斯 154003；4.天津泰達國際心血管病醫院 內二科，天津 300457)

目的 探討線粒體磷酸載體(PiC)在阿霉素所致SD大鼠心肌損傷中的表達情況，及姜黃素對阿霉素所致SD大鼠心肌損傷的保護作用。方法 60只成年SD大鼠隨機分為3組：對照組、阿霉素組、姜黃素+阿霉素組。正常對照組：按2.5 mL/kg尾靜脈注射0.9%氯化鈉注射液，1周1次，連續注射6周；阿霉素組：按1.25 mg/kg鼠尾靜注射0.5 mg/mL阿霉素(0.9%氯化鈉注射液稀釋，約0.5 mL)，1周1次，共注射6周；阿霉素+姜黃素組：阿霉素使用同上，大鼠從每次注射完阿霉素，同時應用12 mg/mL姜黃素注射液，以30 mg/kg藥液(約0.5 mL)經尾靜脈緩慢注射，共注射6周。應用谷胱甘肽過氧化物酶檢測試劑盒(Gpx)、超氧化物歧化酶(SOD)檢測試劑盒、丙二醛(MDA)檢測試劑盒檢測心肌細胞內氧化應激水平，應用流式細胞儀檢測SD大鼠心肌細胞凋亡水平；應用Western blot技術和Real-time PCR技術檢測PiC的表達情況。結果 阿霉素組大鼠心肌細胞凋亡顯著增加(P<0.05)，而阿霉素+姜黃素組較阿霉素組大鼠心肌細胞凋亡顯著降低(P<0.05)；阿霉素+姜黃素組大鼠心肌細胞內Gpx活性、SOD活力均明顯高于阿霉素組(P<0.05)，而低于對照組(P<0.05)；阿霉素+姜黃素組大鼠Slc25a3基因表達量、MDA含量及PiC蛋白表達量均明顯高于對照組(P<0.05)，而低于阿霉素組(P<0.05)。結論 阿霉素可以使心肌線粒體中PiC的表達及氧化應激水平顯著升高，心肌細胞凋亡增加；而姜黃素可以有效拮抗阿霉素所引起的這種損傷作用。

阿霉素；姜黃素；線粒體磷酸載體；氧化應激；Slc25a3基因

惡性腫瘤患者化療后可引起一系列不良反應，包括心臟毒性、腎臟毒性、肝臟毒性、神經系統毒性、免疫功能低下等各系統損害，其中以心臟毒性對人體的危害最大[1-3]。阿霉素(doxorubicin，DOX)也稱為14-羥基柔紅霉素，是目前臨床應用中蒽環類藥物的代表藥物之一。線粒體是細胞物質與能量代謝的重要場所，它能通過電子傳遞鏈的氧化磷酸化反應為有機體提供90%的ATP能源，維持機體的各項生理機能[4]。線粒體通透性轉換孔(mitochondrial permeability transition pore，MPTP)大量開放是導致線粒體功能障礙的關鍵，與多種心臟疾病的發生發展關系密切[5]。研究發現[6]，蒽環類藥物可以導致MPTP開放，引起一系列心肌細胞凋亡、壞死。PiC是位于線粒體內膜上的一種重要的功能蛋白，其功能主要是使重要的代謝底物：無機磷酸(Pi)通過線粒體內膜，從細胞質轉移到線粒體基質。PiC可能是MPTP和細胞死亡潛在的始動監視者[7]。研究表明[8]，PiC可以在MPTP開放中發揮重要作用。PiC由多種編碼基因共同調控，其中Slc25a3基因是編碼PiC基因的重要組成部分，研究發現PiC的表達量與Slc25a3的表達情況密切相關[9]。但目前關于阿霉素對心肌細胞內PiC表達的影響及其分子機制，國內外尚未見報道。

姜黃素(curcumin，CUR)有廣泛的藥理活性，其發展前景日益引起人們的重視。目前的研究主要集中在抗炎、抗氧化、抗腫瘤、抗纖維化、抗艾滋病等[10-13]，但對姜黃素保護心肌細胞具體機制的研究相對較少，姜黃素保護心肌細胞的途徑和機制尚不明確。本實驗通過構建阿霉素所致心肌損傷的體內模型，并使用姜黃素對已發生心肌損傷的體內模型進行干預，進一步研究PiC在姜黃素干預阿霉素所致心肌損傷中的表達情況及深入探討姜黃素對阿霉素所致心肌損傷的保護作用的具體機制。

1 材料與方法

1.1 實驗動物及飼料 成年健康的SD大鼠，體質量在180～220 g之間，雄雌不限，共60只，購自北京維通利華實驗動物技術有限公司，合格證號為SCXK(京)2012-0001；正常飼養，購自哈爾濱醫科大學實驗動物中心。

1.2 實驗儀器及試劑 實驗儀器：高速低溫離心機(Sigma，美國)，FA2004電子分析天平(上海衡平電子儀器公司，中國)，全自動酶標儀(BioTek)，制冰機(ZIEGRA-EISMASCHINEN)，勻速搖床(北京六一儀器廠)，FACSCalibur 流式細胞儀(BD)，PCR反應擴增儀(ABI)；SW-CJ-1D潔凈工作臺(江蘇蘇潔凈化設備廠)；H6-1微型電泳槽(上海精益有機玻璃制品儀器廠)；DYY-8型穩壓穩流電泳儀(上海琪特分析儀器有限公司)；YXJ-2離心機(湘儀離心機儀器有限公司)；凝膠成像系統(上海復日科技有限公司)；TU-1901紫外分光光度計(北京普析通用儀器有限公司)；移液器(范圍100～1000μL，20～200μL，0.5～10μL)(BBI)；StepOne型熒光定量PCR儀(ABI)。

實驗試劑：谷胱甘肽過氧化物酶檢測試劑盒、超氧化物歧化酶檢測試劑盒、丙二醛檢測試劑盒、細胞蛋白裂解液(RIPA)、BCA蛋白定量試劑盒、Western blot化學發光試劑盒均為南京碧云天產品，Annexin V流式細胞試劑盒(BD)，Trizol(Invitrogen)，DEPC(SIGMA)，ABI SybrGreen PCR Master Mix(ABI)，引物(上海生工公司)，抗體(Santa)。

1.3 動物模型建立 所有實驗動物均在清潔級動物室中進行飼養。60只SD大鼠隨機分為3組：對照組(con)、阿霉素組(dox)、姜黃素+阿霉素組(cur)。正常對照組：0.9%氯化鈉注射液2.5 mL/kg，以尾靜脈注射的方式，每周1次注射到大鼠體內，連續注射6周；阿霉素組：將阿霉素用0.9%氯化鈉注射液稀釋為0.5 mg/mL，以1.25 mg/kg的劑量，以鼠尾靜脈緩慢靜推(約0.5 mL)入大鼠體內，每周1次，共注射6周；阿霉素+姜黃素組：阿霉素使用同上，大鼠從每次注射完阿霉素，同時應用12 mg/mL姜黃素注射液，以30 mg/kg藥液(約0.5 mL)經尾靜脈緩慢注射，共注射6周。11周后，全部大鼠采用脊髓離斷的方法處死，取心臟組織進行下一步實驗。本實驗嚴格遵循《實驗動物保護條例》。

1.4 心肌組織內氧化應激水平檢測 取0.5 g心肌冰組織在浴下用勻漿器勻漿，用生理鹽水制成10%的組織勻漿，4 ℃ 3000 r/min離心10 min，取上清液檢測。嚴格按照試劑盒說明，檢測心肌組織內Gpx活性、SOD活力及MDA含量。

1.5 應用Annexin V法檢測SD大鼠心肌細胞的凋亡情況 使用10%水合氯醛300 μg/kg麻醉大鼠，于劍突下作切口取出心臟，立即放入4 ℃灌流液中，于液面下行主動脈插管，采用Langendorff離體心臟灌流裝置，并在灌流液中加入膠原酶(濃度為0.2 g/L)，用剪刀取心室肌組織，浸入高鉀KB液中，輕輕吹打，過300 μm的不銹鋼篩網，室溫穩定1 h后，室溫放置6～7 h備用[14-16]。

1.6 應用Western blot檢測PiC蛋白的表達 取心肌組織0.5 g后剪切成細小的碎片，加入含有1%PMSF的RIPA裂解液1 mL，用勻漿器勻漿，至充分裂解后，4 ℃ 13 500 r/min離心15 min，取上清液。使用BCA試劑盒測量蛋白樣本濃度，分別為：對照組7.0145 μg/μL，阿霉素組13.57 μg/μL，姜黃素+阿霉素組12.83 μg/μL；蛋白上樣量分別為：對照組3.6 μL，阿霉素組1.9 μL，姜黃素+阿霉素組2.0 μL。以小鼠Slc25a3單克隆抗體作為一抗(1:1000)，4 ℃過夜，以HRP標記的羊抗鼠酶標抗體作為二抗(1:10000)進行Western blot檢測。

1.7 應用Real-time PCR檢測PiC基因的表達 心臟組織RNA提取采用Trizol試劑提取方法。采用AMV First Strand cDNA Synthesis Kit試劑盒于PCR反應擴增儀(ABI)上將提取的總RNA逆轉錄為cDNA。cDNA產物保存在-20 ℃。Real-time PCR采用ABI SybrGreen PCR試劑盒說明書在20 μL反應體系中進行PCR擴增。實驗體系：SYBR Green Taq Ready Mix 10 μL，正向和反向引物1.0 μL，水6.0 μL和cDNA2.0 μL(約100 ng)，上述實驗重復3次。每個樣本的溶解曲線只有1個溶解峰即表明產物是唯一的，沒有非特異擴增。采用Livak法即2-(ΔΔCt)法對PCR的數據進行分析。本實驗引物設計均采用Primer 6.0軟件，Slc25a3基因上游引物為5′-GTGGTTTGG-CTAAAGGATGG-3′，下游引物為5′-GGGCAATGTCAGCGAAGAA-3′，β-actin上游引物為5′-CGTAAAGACCTCTATGCCAACA-3′，下游引物為5′-AGCCACCAATCCACA-CAGAG-3′，本實驗中的引物序列均由上海生工生物工程有限公司合成。

2 結果

2.1 各組大鼠心肌組織內氧化應激水平檢測結果 結果顯示，阿霉素組SD大鼠體內谷胱甘肽過氧化物酶活性及SOD活力均明顯低于對照組及阿霉素+姜黃素組(P<0.05)，MDA含量明顯高于對照組及阿霉素+姜黃素組(P<0.05)；同時阿霉素+姜黃素組SD大鼠體內谷胱甘肽過氧化物酶活性及SOD活力均高于阿霉素組且低于對照組(P<0.05)，MDA含量低于阿霉素組且高于對照組(P<0.05)，見表1。表明姜黃素可以減低阿霉素所導致SD大鼠機體內的氧化應激水平，從而起到保護作用。

表1 各組SD大鼠心肌細胞內GSH活性、SOD活力及MDA含量Tab.1 GSH activity, SOD activity and MDA content in the cardiac muscle cells of SD ±s)

*P<0.05，與阿霉素組相比較，compared with doxorubicin group

2.2 Annexin V法檢測SD大鼠心肌細胞的凋亡情況 結果顯示，阿霉素組SD大鼠心肌細胞的凋亡率(23.55±1.47)%明顯高于對照組(8.43±1.97)%及阿霉素+姜黃素組(16.01±2.85)%，同時阿霉素+姜黃素組SD大鼠心肌細胞的凋亡率明顯高于對照組，但低于阿霉素組(P<0.05)，見圖1。這表明阿霉素可以引起SD大鼠心肌細胞發生凋亡，而姜黃素可以通過對抗阿霉素的作用，起到保護心肌細胞的作用。

圖1 動物模型心肌細胞凋亡情況Fig.1 Apoptosis of myocardial cells in animal models

2.3 Western blot技術檢測線粒體磷酸載體(PiC)蛋白的表達情況 結果顯示，阿霉素組的線粒體磷酸載體蛋白表達情況明顯高于對照組及阿霉素+姜黃素組，阿霉素+姜黃素組的PiC蛋白的表達情況低于阿霉素組，而高于對照組(P<0.05)，見圖2。這表明阿霉素可以明顯促進SD大鼠心肌細胞內PiC蛋白的表達，而姜黃素可以有效對抗阿霉素在心肌細胞內對PiC蛋白表達的促進作用。

圖2 PiC蛋白在阿霉素所致SD大鼠心肌細胞損傷中及姜黃素干預后的表達情況(n=20)*P<0.05，與對照組比較；△P<0.05，與阿霉素組比較Fig.2 Expression of PiC protein in SD rats with myocardial cell injury induced by doxorubicin and the effect of curcumin(n=20)*P<0.05, compared with control group;△P<0.05, compared with doxorubicin group

2.4 Real-time PCR技術檢測Slc25a3基因的表達情況 結果顯示，阿霉素組的Slc25a3基因的mRNA表達情況明顯高于對照組及姜黃素干預組，而姜黃素干預組的Slc25a3基因的mRNA表達高于對照組、低于阿霉素組(P<0.05)，見圖3。這表明阿霉素可以促進SD大鼠心肌細胞內Slc25a3基因的表達，而姜黃素可以明顯下調阿霉素對心肌細胞內Slc25a3基因的表達作用。

圖3 各組Slc25a3基因表達比較(n=20)*P<0.05，與對照組比較；△P<0.05，與阿霉素組比較Fig.3 Comparison of Slc25a3 mRNA expression in each group(n=20)*P<0.05, compared with control group；△P<0.05, compared with doxorubicin group

3 討論

阿霉素是一種抗腫瘤抗生素，可抑制細胞RNA和DNA的合成，對RNA的抑制作用最強，抗瘤譜較廣，對多種腫瘤均有作用，對各種生長周期的腫瘤細胞都有殺滅作用[17-18]。研究發現[19]，長期使用阿霉素的患者可出現可引起遲發性嚴重心力衰竭，有時可在停藥半年后發生。線粒體是細胞物質與能量代謝的重要場所，由于線粒體是外來化合物誘導細胞損傷的敏感細胞器，因此線粒體在細胞凋亡機制中越來越受到人們的重視。研究發現，阿霉素心肌損傷與線粒體在亞細胞水平廣泛性、進展性的損傷有關，線粒體作為心肌細胞的死亡與存活的門戶，在心肌缺血性疾病中尤為重要[20]。MPTP大量開放是導致線粒體功能障礙的關鍵，而PiC是構成MPTP的關鍵性線粒體內膜成分。研究表明[21]，SLc25的2個外顯子3A與3B，3A主要存在于肌肉、心臟、甲狀腺組織，而3B存在于肌體所有組織中。Slc25a3基因的純合子突變患者顯示運動不耐受，近端肌肉無力和心肌病等[22]。多個研究證實線粒體ATP合成下降與Slc25a3減少有關，凸顯出線粒體磷酸鹽轉運在能量產生中的重要作用，值得注意的是，患者線粒體PiC缺陷時在肌肉組織線粒體的ATP合成減少，與肥厚型心肌病和心輸出量減少相關[23]。在對1型糖尿病患者的研究中發現肌間纖維線粒體Slc25a3合成顯著減少，ATP合成也顯著減少，隨著線粒體蛋白組學異常，心臟功能失調[24]。在本研究中發現阿霉素組大鼠Slc25a3上調，可能引起線粒體大量增生，本課題組早期的研究證實，阿霉素引起大鼠心肌損傷后的早期，線粒體大量增生，排列紊亂、腫脹、畸形，峭減少[25]，線粒體增生可能為代償性，為保證心肌細胞提供ATP。姜黃素干預組大鼠Slc25a3下調，可能與線粒體功能部分恢復有關。

姜黃素(curcuma，CUR)為姜黃屬植物，具有保護缺血心肌，預防心肌梗死的作用。研究證實，姜黃素對大鼠腦缺血再灌注損傷具有保護作用，其作用與增加腦血流量，抗脂質過氧化和防止鈣超載有關[26]。同時，姜黃素對大鼠心肌的缺血性損傷具有保護作用，且這種保護作用呈現一定的劑量依賴關系，可能有隨著劑量的增大作用增強的趨勢。此外，姜黃素還可以拮抗多種理化因素對DNA的損傷增加體內SOD水平，清除超氧陰離子。研究表明活性氧(ROS)的產生與線粒體密切相關，產生氧化應激，參與細胞損傷與凋亡[27]。

本實驗通過使用流式細胞儀檢測心肌細胞凋亡情況，及GSH、SOD、MDA 3種試劑盒檢測心肌細胞內的氧化應激水平，鑒定動物模型建立情況。結果顯示，阿霉素損傷組心肌細胞凋亡率明顯高于對照組及姜黃素干預組，GSH活性及SOD活力均明顯低于對照組及姜黃素干預組，而MDA含量明顯高于對照組及姜黃素干預組(均P<0.05)。本實驗結果表明在體內模型中，阿霉素對心肌細胞所造成的損傷存在，并且這種損傷會隨作用時間的推移不斷增加。通過對動物模型心肌細胞內氧化應激水平的檢測，本研究發現GSH活性、SOD活力及MDA含量均隨阿霉素作用時間延長而發生相應改變，但當加入一定濃度的姜黃素后，會出現氧化應激水平下降的表現，這表明姜黃素對阿霉素所引起的心肌細胞損傷具有一定的保護作用。

本實驗還通過Western blot及Real-time PCR對阿霉素所致SD大鼠心肌損傷模型及姜黃素干預后的PiC表達情況進行檢測，結果顯示，阿霉素損傷后的SD大鼠心肌細胞內PiC表達明顯上調(P<0.05)，但使用姜黃素進行干預后，PiC表達情況明顯下降，但仍高于對照組(P<0.05)。這表明姜黃素在對抗阿霉素所引起的心肌損傷中，可以通過調節蛋白和基因的表達對心肌細胞起到一定的保護作用，同時也說明雖然姜黃素具有明確的保護作用，但其并不能將受損的心肌細胞完全恢復至正常，這可能也會受到姜黃素濃度及阿霉素作用時間的制約。

本實驗通過構建阿霉素所致心肌損傷的體內模型，并使用姜黃素對已發生心肌損傷的動物模型進行干預。結果表明姜黃素對阿霉素所引起的SD大鼠心肌細胞損傷具有一定的保護作用，這種保護作用是否是通過調節動物模型體內的氧化應激水平和PiC在蛋白和基因水平的表達情況來發揮作用還有待進一步研究。本實驗揭示了阿霉素在機體內對心肌細胞造成損傷的機制及姜黃素在體內對抗阿霉素所引起心肌細胞損傷的主要途徑，為進一步研究PiC在姜黃素干預阿霉素所致心肌損傷中的表達情況及深入探討姜黃素對阿霉素所致心肌損傷的保護作用的具體機制提供了新的科研思路，為今后的靶基因治療提供理論依據。

[1] Guenancia C,Li N,Hachet O,et al.Paradoxically,iron overload does not potentiate doxorubicin-induced cardiotoxicity in vitro in cardiomyocytes and in vivo in mice[J].Toxicol Appl Pharmacol,2015,284(2):152-162.

[2] Heeba GH,Mahmoud ME.Dual effects of quercetin in doxorubicin-induced nephrotoxicity in rats and its modulation of the cytotoxic activity of doxorubicin on human carcinoma cells[J].Environ Toxicol,2014.

[3] Nagai K,Oda A,Konishi H.Theanine prevents doxorubicin-induced acute hepatotoxicity by reducing intrinsic apoptotic response[J].Food Chem Toxicol,2015,11(78C):147-152.

[4] Wided K,Hassiba R,Mesbah L.Polyphenolic fraction of Algerian propolis reverses doxorubicin induced oxidative stress in liver cells and mitochondria[J].Pak J Pharm Sci,2014,27(6):1891-1897.

[5] Ascens?o A,Lumini-Oliveira J,Machado NG,et al.Acute exercise protects against calcium-induced cardiac mitochondrial permeability transition pore opening in doxorubicin-treated rats[J].Clin Sci (Lond),2011,120(1): 37-49.

[6] Raschi E, Vasina V, Ursino MG,et al.Anticancer drugs and cardiotoxicity: insights and perspectives in the era of targeted therapy [J].Pharmacology and Therapeutics,2010,125(2):196-218.

[7] Palmieri F.The mitochondrial transporter family (SLC25): physiological and pathological implications [J].Pflugers Arch,2004,447:689-709.

[8] Varanyuwatana P,Halestrap AP.The roles of phosphate and the phosphate carrier in the mitochondrial permeability transition pore[J].Mitochondrion,2012,12(1):120-125.

[9] Bhoj EJ,Li M,Ahrens-Nicklas R,et al. Pathologic Variants of the Mitochondrial Phosphate Carrier SLC25A3: Two New Patients and Expansion of the Cardiomyopathy/Skeletal Myopathy Phenotype With and Without Lactic Acidosis [J].JIMD Rep,2015,9:59-66.

[10] Dong J,Shao W,Yan P,et al.Curcumolide,a unique sesquiterpenoid with anti-inflammatory properties from Curcuma wenyujin [J].Bioorg Med Chem Lett,2015,25(2):198-202.

[11] 石瑤，孟浦，劉亞黎，等.姜黃素對H9c2心肌細胞氧化應激損傷的保護作用及其機制[J].實用兒科臨床雜志，2012，27(13)：983-986.

[12] Chen W,Lu Y,Gao M,et al.Anti-angiogenesis effect of essential oil from Curcuma zedoaria in vitro and in vivo [J].J Ethnopharmacol,2011,133(1):220-226.

[13] Singh V,Rana M,Jain M,et al.Curcuma oil attenuates accelerated atherosclerosis and macrophage foam-cell formation by modulating genes involved in plaque stability,lipid homeostasis and inflammation[J].Br J Nutr, 2014,13:1-14.

[14] 石曉路，柳絮，郭會彩，等.大鼠心肌細胞分離方法的改進[J].中國藥理學通報，2010，26(5):687-690.

[15] 戴小燕,方秋娟.Langendorff 體心臟灌注模型的制備及應用[J].醫學綜述，2012，1138(13)：2036-2039.

[16] 牛拴成，張軒萍，梁宏亮，等. 鼠心肌細胞急性分離方法[J].山西醫科大學學報，2002，33(2)：173-174.

[17] Desai VG,C Kwekel J,Vijay V,et al.Early biomarkers of doxorubicin-induced heart injury in a mouse model [J].Toxicol Appl Pharmacol,2014,281(2):221-229.

[18] Zimmermann M,Arachchige-Don AS,Donaldson MS,et al.Elevated cyclin G2 expression intersects with DNA damage checkpoint signaling and is required for a potent G2/M checkpoint arrest response to doxorubicin[J].J Biol Chem，2012,287(27):22838-22853.

[19] 張泉麗，陳乃耀.阿霉素對大鼠心肌損傷的實驗研究[J].中國醫藥指南，2012，10(34)：66-67.

[20] Halestrap AP.What is the mitochondrial permeability transition pore?[J].J Mol Cell Cardiol,2009,46: 821-831.

[21] Sonia H Shah,Jacqueline A Pallas.Identifying differential exon splicing using linear models and correlation coefficients [J]. BMC Bioinformatics,2009,10(26):1-26.

[22] Mayr JA,Zimmermann FA,Horváth R,et al.Deficiency of the mitochondrial phosphate carrier presenting as myopathy and cardiomyopathy in a family with three affected children[J].Neuromuscul Disord,2011,21(11):803-808.

[23] Mayr JA,Merkel O,Kohlwein SD,et al.Mitochondrial phosphate-carrier deficiency: a novel disorder of oxidative phosphorylation[J].Am J Hum Genet,2007,80(3):478-484.

[24] Baseler WA,Thapa D,Jagannathan R,et al.miR-141 as a regulator of the mitochondrial phosphate carrier (Slc25a3) in the type 1 diabetic heart[J].Am J Physiol Cell Physiol, 2012, 303(12):C1244-1251.

[25] 盧均坤，呂維娟，劉洋，等，姜黃素及谷胱甘肽對阿霉素所致大鼠急性心肌損傷的保護作用[J].中國老年學雜志，2015，35(3)：726-728.

[26] Yu CC,Hu H,Wang XD,et al.Effect of curcumin on the injury in hippocampal neurons and the expression of RANTES in hippocamp during cerebral ischemia/ reperfusion in spontaneously hypertensive rats SHR[J]. Zhongguo Yingyong Shenglixue Zazhi,2014,30(4):360-367.

[27] Fleury C,Mignotte B,Vayssière JL.Mitochondrial reactive oxygen species in cell death signaling[J].Biochimie,2002, 84(2-3):131-141.

(編校：吳茜)

Expression of PiC in SD rats with myocardial damage induced by adriamycin and protective effect of curcumin

LU Jun-kun1,2, WANG Yan-qin3, CHU Er-xia2, LI Xin2, ZHANG Ming-liang2, Sudeep2, QI Xiang-qian4Δ

(1. Medical University of Tianjin, Tianjin 300070, China; 2. Department of Cardiology Division II, 1stAffiliated Hospital of Jiamusi University, Jiamusi 154003, China; 3. Department of Ultrasonographt, Hospital of Jiamusi University, Jiamusi 154003, China; 4. Department of Internal Medicine II, TEDA International Cardiovascular Hospital, Tianjin 300457, China)

ObjectiveTo discuss the expression of mitochondrial phosphate carrier (PiC) in myocardial injury caused by doxorubicin, and the protective mechanism of curcumin in myocardial injury caused by doxorubicin.Methods60 adult SD rats were randomly divided into three groups: control group, doxorubicin group, curcumin+doxorubicin group. Control group was injected 0.9% sodium chloride injection (2.5 mL/kg) by rat tail vein injection, one times per week, 6 times in total.Doxorubicin group was injected with 0.5 mg/mL doxorubicin which diluted with 0.9% sodium chloride injection by rat tail vein injection, and the dosage was 1.25 mg/kg(about 0.5 mL). Curcumin+doxorubicin group was injected the same dose doxorubicin as doxorubicin group. After that, 12 mg/mL curcumin injection was added with 30mg/kg by rat tail vein injection. one times per week, 6 times in total. The glutathione peroxidase (Gpx) assay kit, superoxide dismutase (SOD) assay kit and malondialdehyde (MDA) detection kits were used to test the oxidative stress levels in myocardial cells of SD rats. Flow cytometry is used to test the SD rat cardiomyocytes transferred level. Application of Western blot and Real-time PCR technology were used to detect expression of PiC.ResultsThe Gpx activity and SOD vitality in myocardial cells of SD rats in curcumin with doxorubicin group all significantly increased compare with those of doxorubicin group, and all decreased compare with those of control group.But the rate of myocardial apoptosis, content of malondialdehyde and expression of Slc25a3 gene and PiC protein from myocardial cells of SD rats from curcumin with doxorubicin group all significantly increased compare with those of control group, and all decreased compare with those of doxorubicin group.ConclusionDoxorubicin could increase the expression of PiC in myocardial mitochondria, the levels of oxidative stress, and the apoptosis of myocardial cells, and the effect of curcumin could be effective against the injury induced by doxorubicin.

doxorubicin; curcumin; MPTP; oxidative stress; Slc25a3 gene

黑龍江省自然科學基金項目(H201365);佳木斯大學重點項目(Sz2013-004)

盧均坤，男，博士在讀，副主任醫師，研究方向：冠心病的介入治療，心血管疾病介入診治，E-mail：ralilve@163.com；齊向前，通訊作者，男，主任醫師、教授、博士生導師，研究方向： E-mail：ljkuuu@163.com。

R541.9, Q505

A

1005-1678(2015)08-0058-05