高效液相色譜法測定厄貝沙坦的含量

魏獻波，王美艷Δ，路婷婷

(1.揚子江藥業集團北京海燕藥業有限公司 質管部，北京 100026；2.揚子江藥業集團北京海燕藥業有限公司 化學藥物研究所，北京 100026)

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高效液相色譜法測定厄貝沙坦的含量

魏獻波1，王美艷1Δ，路婷婷2

(1.揚子江藥業集團北京海燕藥業有限公司 質管部，北京 100026；2.揚子江藥業集團北京海燕藥業有限公司 化學藥物研究所，北京 100026)

目的 建立測定藥物中厄貝沙坦含量的高效液相色譜法。方法 采用Diamonsil C18柱(150 mm×4.6 mm，5 μm)，以磷酸溶液(以三乙胺調節pH至3.2)-乙腈(62:38)為流動相，在柱溫35 ℃，流速約1.0 mL/min，檢測波長245 nm的條件下進行檢測。結果 厄貝沙坦的質量濃度在0.04～0.40 mg/mL范圍內與峰面積線性關系良好(r=0.99999)，平均加樣回收率為98.37%，RSD為0.7%(n=9)。結論 該方法操作簡便、定量準確、線性響應范圍寬，重復性好，可作為藥物中厄貝沙坦含量測定的方法。

厄貝沙坦； 含量測定； 高效液相色譜法

高血壓是一種臨床綜合征，以體循環動脈壓增高為主要表現，其本身可引起一系列的癥狀，長期高血壓更可以影響重要臟器尤其是心、腦、腎的功能，最終導致臟器功能衰竭。高血壓可分為原發性高血壓(即高血壓病)和繼發性高血壓(即癥狀性高血壓)兩大類。

近年來，我國高血壓患病人數每年在以驚人的速度上升，高血壓已成為中國迫切需要解決的重大公共衛生問題。厄貝沙坦片為血管緊張素Ⅱ受體抑制劑，能夠抑制血管緊張素Ⅰ轉化為血管緊張素Ⅱ，特異性地拮抗AT1受體，通過選擇性地阻斷血管緊張素Ⅱ與AT1受體的結合，抑制血管收縮和醛固酮的釋放，產生降壓作用，是治療原發性高血壓的一種常用藥物。張海波等[1]采用Meta分析系統評價厄貝沙坦與其它降壓藥物治療輕、中度高血壓的臨床療效和安全性差異，結果表明厄貝沙坦治療輕、中度高血壓在療效上與其它降壓藥物比較差異無統計學意義，但在安全性方面優于其它降壓藥物。此外，臨床研究表明厄貝沙坦降壓穩定，副作用小[2-3]。厄貝沙坦口服后能迅速吸收[4-5]，生物利用度在60%～80%之間，在體內的分布容積廣，半衰期長達11～15 h。在藥代動力學研究中，藥效和劑量在10～600 mg范圍內顯示出明顯線性相關性，降壓作用平穩而持久，并可通過有效降低夜間血壓來恢復正常的血壓晝夜節律。厄貝沙坦可單獨使用，也可與其它抗高血壓藥物合用[6-8]。

本文建立了一種高效液相色譜法測定藥物中厄貝沙坦的含量，此法操作簡便、定量準確、線性響應范圍較相關文獻[9-12]更寬，重復性好，藥品中的其他輔料不干擾測定。

1 材料與方法

1.1 材料

1.1.1 儀器與試藥：Agilent 1100高效液相色譜儀；Seven Easy型pH計；XS 205型分析天平。厄貝沙坦對照品(中國食品藥品檢定研究院，批號為100607-201202)，雜質I對照品(USP，批號為1347711)；科蘇(厄貝沙坦片)(揚子江藥業集團北京海燕藥業有限公司，規格為每片75 mg，批號為14012511)；磷酸(GR，國藥集團化學試劑有限公司)、甲醇、乙腈(色譜級，賽默飛世爾科技(中國)有限公司)、三乙胺(AR，國藥集團化學試劑有限公司)，水為超純水。

1.1.2 溶液的配制：精密稱取厄貝沙坦對照品與雜質I對照品各約10 mg，置100 mL量瓶中，加甲醇溶解并稀釋至刻度，作為系統適用性溶液。

分別取厄貝沙坦對照品約10 mg、10 mg、20 mg，精密稱定，置50 mL容量瓶中，加甲醇溶解并稀釋至刻度，搖勻，制得對照品溶液1、對照品溶液2以及對照品溶液3。

取本品20片，精密稱定，研細，精密稱取適量(約相當于厄貝沙坦10 mg)，置50 mL容量瓶中，加甲醇適量，振搖使厄貝沙坦溶解并稀釋至刻度，搖勻，濾過，取續濾液作為供試品溶液。

按處方組成，制備不含厄貝沙坦原料的陰性模擬制劑，照上述供試品溶液的制備方法制備作為陰性空白溶液。

1.1.3 色譜條件：色譜柱：Diamonsil C18柱(150 mm×4.6 mm，5 μm)；柱溫：35 ℃；流速：1.0 mL/min；進樣體積：10 μL；檢測波長：245 nm；流動相：磷酸溶液(取85%磷酸5.5 mL，加水至950 mL，以三乙胺調節pH至3.2)-乙腈(62:38)，使用前需超聲脫氣。

1.2 實驗方法

1.2.1 系統適用性試驗：取系統適用性溶液按1.1.3項下色譜條件進樣10 μL，觀察出峰順序并計算分離度；理論板數按厄貝沙坦峰計算應不低于2 000。

1.2.2 專屬性試驗：取供陰性空白溶液、對照品溶液1和供試品溶液，在1.1.3所述色譜條件下分別進樣10 μL，觀察供試品溶液主峰的保留時間與對照品溶液主峰保留時間是否一致，陰性空白溶液在厄貝沙坦位置有無干擾。

1.2.3 線性關系考察：精密量取對照品溶液3 1.0、4.0、5.0、6.0、10.0 mL，置10 mL的容量瓶中，加甲醇稀釋至刻度，搖勻，得線性系列溶液。將上述溶液按1.1.3項下色譜條件分別進樣10 μL，測定峰面積。

1.2.4 檢測限和定量限試驗：取厄貝沙坦對照品溶液1不斷稀釋，當厄貝沙坦峰高與基線噪音高度之比為10:1時，得本方法的定量限濃度，取定量限濃度下的溶液連續進樣6次，記錄峰面積與保留時間；當厄貝沙坦峰高與基線噪音高度之比為3:1時，得本方法的檢測限濃度，取檢測限濃度下的溶液連續進樣3次，記錄峰面積與保留時間。

1.2.5 精密度試驗：取1.1.2項下的供試品溶液6份，每次進樣10 μL，測定厄貝沙坦峰面積。

1.2.6 穩定性試驗：將1.1.2項下的對照品溶液1放置0、4、8、12、28、24和36 h后，精密量取10 μL，注入液相色譜儀，測定峰面積。

1.2.7 加樣回收試驗：按處方組成，制備不含厄貝沙坦原料的陰性模擬制劑，稱取陰性模擬制劑約20 mg共9份，分別加入厄貝沙坦原料16 mg、20 mg、24 mg各3份，分別置100 mL容量瓶中，加甲醇溶解并稀釋至刻度，搖勻，制得濃度分別為80%、100%和120%的回收率溶液。精密量取空白溶劑、對照品溶液(雙樣雙針)及回收率溶液(進2針)各10 μL，按1.1.3項下色譜條件進行測定。

1.2.8 樣品含量測定：按1.1.2項下方法平行制備3批樣品的供試品溶液，在1.1.3項下色譜條件進行測定，按外標法以峰面積計算樣品含量。

2 結果

2.1 系統適用性試驗 在高效液相色譜法中，理論塔板數是柱效的具體體現，它與分離度、重復性和拖尾因子一齊構成高效液相色譜法系統適用性實驗的指標，直接對實驗結果產生不可忽視的影響[13]，本實驗以厄貝沙坦峰與雜質I峰的分離度以及厄貝沙坦峰的理論板數為指標，考察了系統的適用性情況。由色譜圖1可知，出峰順序依次為雜質I峰與厄貝沙坦峰，分離度大于2.0，理論板數按厄貝沙坦峰計算不低于2 000，符合品種分離項下要求。

圖1 系統適用性色譜圖Fig.1 Chromatogram of System Suitability

2.2 專屬性試驗：專屬性體現了在其他成分可能存在的條件下，所用方法能夠正確檢測出被測物質的特性，本實驗以出峰時間為指標，考察了陰性模擬制劑是否對測定產生影響。由色譜圖2可知，供試品溶液主峰的保留時間與對照品溶液主峰保留時間一致，陰性空白溶液在厄貝沙坦位置無干擾。

圖2 專屬性色譜圖Fig.2 Chromatograms of System Specificity

2.3 線性關系考察：以對照品濃度(mg/mL)為橫坐標，峰面積為縱坐標進行線性回歸，回歸方程為Y=22 779.397 65X，r=0.999 99(n=5)。

2.4 檢測限和定量限試驗：本方法的定量限濃度為126.5 ng/mL，符合清潔限度要求；取定量限濃度下的溶液連續進樣6次，溶液峰保留時間的相對標準差0.1%，峰面積的相對標準差為4.5%。檢測限濃度為37.9 ng/mL；取檢測限濃度下的溶液連續進樣3次，溶液峰保留時間的相對標準為0.2%，峰面積的相對標準差為4.7%，符合驗證標準。

2.5 精密度試驗：實驗通過對同一批次樣品的連續測定，考察了儀器的精密度。計算得厄貝沙坦峰面積的相對標準偏差為0.5%(n=6)，表明儀器精密度良好。

2.6 穩定性試驗：計算得各時間點色譜峰的峰面積RSD為0.8%(n=7)，表明所測溶液在36小時內穩定。

2.7 加樣回收試驗：按外標法以峰面積測定樣品含量并計算回收率，結果見表1。

表1 厄貝沙坦加樣回收試驗結果

2.8 樣品含量測定 3批樣品中厄貝沙坦含量分別為標示量的96.80%，97.50%，97.83%，平均含量為97.38%。

3 討論

高效液相色譜法具有分離效能高、選擇性好、靈敏度高、分析速度快、適用范圍廣(樣品不需氣化，只需制成溶液即可)、色譜柱可反復使用等優點，在《中國藥典》中有多種中成藥的定量分析采用該法，已成為中藥制劑含量測定最常用的分析方法。

本文采用高效液相色譜法對科蘇(厄貝沙坦片)中厄貝沙坦的含量進行了分析測定，方法的系統適用性符合要求；專屬性試驗確認陰性空白溶液在厄貝沙坦位置無干燥峰；檢測限37.9 ng/mL，定量限為126.5 ng/mL；重復性良好，線性范圍為0.04～0.40 mg/mL(r=0.999 99)；回收率為98.37%，溶液穩定性良好，能夠用于藥品中厄貝沙坦含量的測定。

對于加樣回收試驗中，本文采用“等量的陰性模擬制劑中加入不同質量的厄貝沙坦原料”的方法，通過測定回收率溶液中厄貝沙坦的百分含量來確定回收率。在后續試驗中，可以考慮測定加標回收率，即于樣品中加入厄貝沙坦對照品，采用探究出的標準曲線，以峰面積為準計算其中厄貝沙坦含量以及回收率。

對于本實驗“線性關系考察”中，后續可以進行厄貝沙坦在低濃度范圍內與峰面積是否呈線性相關的實驗，以增加實驗的適用性；對于“穩定性試驗”中，應繼續考察更長時間范圍內對照溶液的穩定情況，以說明對照溶液的有效適用時間。

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(編校：譚玲)

Content determination of irbesartan in drugs by HPLC

WEI Xian-bo1, WANG Mei-yan1Δ, LU Ting-ting2

(1.Department of Quality Control, Yangtze River Pharmaceutical Group Beijing Haiyan Pharmaceutical Co., Ltd, Beijing 100026, China; 2.Chemical Research Institute, Yangtze River Pharmaceutical Group Beijing Haiyan Pharmaceutical Co., Ltd, Beijing 100026, China)

ObjectiveTo establish a HPLC method for the content determination of irbesartan in drugs.MethodsThe diamonsil C18column (150 mm×4.6 mm，5 μm) was used, with the mobile phase of phosphoric acid solution-acetonitrile(adjusted to pH 3.2 with triethylamine)(62:38).The column temperature was 35 ℃, with the UV detection wavelength of 245 nm and a flow rate of 1.0 mL/min.ResultsIrbesartan exhibited a good linear relationship with the peak area in the concentration range of 0.04-0.40 mg/mL with the correlation coefficient of 0.999 99．The average recovery was 98.37% with RSD of 0.7%(n=9).ConclusionThis method is simple and accurate with wide linear range and good reproducibility，and can be used to determine the content of irbesartan in drugs.

irbesartan; content determination; HPLC

魏獻波，女，學士，質量控制主管，研究方向：藥物分析檢測，E-mail:80641626@qq.com；王美艷，通信作者，女，碩士，質量控制檢測員，研究方向：藥物分析檢測，E-mail:1045773477@qq.com。

R927.2

A

1005-1678(2015)10-0141-03