利巴韋林膠囊溶出曲線測定方法的建立及國產利巴韋林膠囊溶出行為的考察

楊洪淼，藺娟，閔祺，廖海明，范慧紅Δ

(1.中國食品藥品檢定研究院，北京 100050；2.新疆維吾爾自治區食品藥品檢驗所，新疆 烏魯木齊 830004；3.錦州市藥品檢驗所，遼寧 錦州 121001)

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利巴韋林膠囊溶出曲線測定方法的建立及國產利巴韋林膠囊溶出行為的考察

楊洪淼1，藺娟2，閔祺3，廖海明1，范慧紅1Δ

(1.中國食品藥品檢定研究院，北京 100050；2.新疆維吾爾自治區食品藥品檢驗所，新疆 烏魯木齊 830004；3.錦州市藥品檢驗所，遼寧 錦州 121001)

目的 建立利巴韋林膠囊溶出曲線測定方法，考察國內利巴韋林膠囊溶出行為，為該品種仿制藥質量一致性評價工作提供實驗依據。方法 采用《中國藥典》2010年版(二部)附錄Ⅹ C第一法(籃法)，轉速50 r/min，分別以pH 1.2鹽酸溶液、pH 4.5醋酸鹽緩沖液、pH 6.8磷酸鹽緩沖液、水為溶出介質，溶出介質體積900 mL，于不同時間點取樣測定并繪制4種溶出介質下的溶出曲線。采用高效液相色譜法進行溶出度測定。色譜柱為C18柱，流動相為4 g/L的磷酸二氫鈉溶液(用5%氫氧化鈉溶液調節pH至5.0±0.05)-乙腈(98︰2)，流速為1.0 mL/min，檢測波長為225 nm，進樣量為10 μL。結果 利巴韋林供試品溶液濃度在2.5～200 μg/mL范圍內與峰面積呈良好的線性關系(r=1)；精密度、穩定性試驗的RSD≤0.5%，4種溶出介質中平均回收率分別為101.3%、100.7%、100.2%和100.4%。pH4.5和pH6.8溶出介質中各企業膠囊溶出行為比較一致并可以迅速溶出，pH1.2和水溶出介質中溶出行為差異較大，且有部分企業不能達到15 min的平均溶出量大于85%。結論 建立的溶出曲線測定方法準確、可靠。國產利巴韋林膠囊之間溶出行為存在差異，其制劑工藝水平還有提升的空間。

利巴韋林膠囊；溶出曲線；仿制藥質量一致性評價

利巴韋林是一種廣譜的抗病毒藥物，利巴韋林膠囊的適應癥主要為呼吸道合胞病毒引起的病毒性肺炎與支氣管炎，以及皮膚皰疹病毒感染等，在臨床上應用廣泛[1-4]。該品種收載于《國家基本藥物目錄》(2012年版)，同時也是仿制藥質量一致性評價工作待完成的品種之一。本文建立利巴韋林膠囊在多種溶出介質中溶出曲線的測定方法，并對國內該品種制劑的溶出行為進行考察，以期為本品種的仿制藥質量一致性評價工作提供實驗依據。

日本橙皮書中未收載利巴韋林品種，而中國藥典中利巴韋林固體口服制劑項下也均未設有溶出度檢查項。所以本實驗中溶出曲線測定方法的建立將參考《美國藥典》36版中利巴韋林片劑溶出度檢查的方法和FDA溶出數據庫中提供的利巴韋林膠囊的溶出條件。

從國家食品藥品監督管理總局網站查到國內現有利巴韋林膠囊生產企業5家，批準文號6個。分別向各企業發函征集樣品，最終征集到4家企業的樣品，包含0.1g和0.15g 2種規格。

1 材料與方法

1.1 材料

1.1.1 藥品與試劑：利巴韋林膠囊(國內生產企業A與B，規格0.15 g；國內生產企業C與D，規格0.1 g)，利巴韋林對照品(中國藥品生物制品檢定所，批號：629-200202)；利巴韋林原料(新鄉制藥股份有限公司，批號：02110338)；鹽酸、冰醋酸(國藥集團化學試劑有限公司，優級純)；磷酸二氫鉀、醋酸鈉、氫氧化鈉、磷酸二氫鈉(國藥集團化學試劑有限公司，分析純)；乙腈(Fisher試劑公司，色譜純)。

1.1.2 實驗儀器：Agilent 1100高效液相色譜儀(美國安捷倫公司)，島津2010AT高效液相色譜儀(日本島津公司)；SOTAX AT7 Smart型自動取樣溶出儀(瑞士SOTAX公司)；Mettler XS205型電子天平(Mettler公司)；Mettler MP230型酸度計(Mettler公司)。

1.2 與溶出度相關的理化性質的測定

1.2.1 溶解度的測定：在37 ℃水浴條件下，配制利巴韋林在4種溶出介質中的飽和溶液，采用本文的液相方法測定飽和溶液濃度。

1.2.2 不同溶出介質中的穩定性：取利巴韋林原料適量，分別加4種溶出介質制成約0.1 mg/mL的溶液。室溫下放置并于0、2、4、6、12 h進行液相測定，計算峰面積RSD。

1.2.3 考察過濾膜對利巴韋林的吸附作用：將利巴韋林水溶液、使用針頭過濾器過濾1次的濾液和過濾2次的濾液進行液相測定。

1.3 溶出介質的選擇 根據文獻[5-7]，溶出介質應模擬人體胃腸道的pH值，由于利巴韋林為非pH依賴型藥物，所以選擇常規的pH1.2、pH4.5和pH6.8的緩沖溶液以及水作為溶出介質。配制方法為：pH1.2溶出介質：取鹽酸7.65 mL，加水稀釋至1000 mL，搖勻即得；pH4.5溶出介質：取2 mol/L醋酸溶液14.0 mL，與醋酸鈉2.99 g，加水溶解并稀釋至1000 mL，搖勻即得；pH6.8溶出介質：取0.2 mol/L磷酸二氫鉀溶液250 mL，與0.2 mol/L氫氧化鈉溶液112 mL混勻后，再加水稀釋至1000 mL，搖勻即得；水：純化水。

1.4 溶液制備 精密稱取利巴韋林對照品適量，加水溶解并稀釋制成約50 μg/mL的溶液，作為對照品溶液。溶出過程中在每個時間點分別取樣并濾過，取續濾液作為供試品溶液。

1.5 溶出方法及取樣時間點 取各企業膠囊12粒，按《中國藥典》2010年版(二部)附錄Ⅹ C第一法(籃法)操作，溶出介質體積900 ml，溶出溫度37 ℃，轉速50 r/min，測定藥品在pH1.2、pH4.5、pH6.8緩沖液和水4種溶出介質中的溶出曲線。取樣時間點為5、10、15、20、30、60 min。

1.6 色譜條件 參照USP36中利巴韋林片劑溶出度的測定方法，采用高效液相色譜法，按外標法以峰面積計算溶出量。色譜柱：C18柱，如Waters T3 C18色譜柱(4.6 mm×25 mm，5 μm)；流動相：4 g/L的磷酸二氫鈉溶液(用5%氫氧化鈉溶液調節pH至5.0±0.05)-乙腈(98︰2)；流速：1 mL/min；檢測波長：UV225 nm；進樣體積：10 μL。

1.7 液相色譜方法的方法學驗證

1.7.1 線性范圍考察：稱取利巴韋林對照品適量，加水制成400 μg/mL的對照品儲備溶液。精密量取對照品儲備液適量，加水稀釋制成200、100、50、25、12.5、5、2.5 μg/mL的線性考察對照溶液，按上述色譜條件進樣測定。

1.7.2 精密度實驗：取利巴韋林對照品溶液連續進樣6次，計算峰面積RSD 。

1.7.3 回收率實驗：精密量取已測定的溶出液(利巴韋林濃度約100 μg/mL)2 mL，分別加入利巴韋林對照品儲備溶液0.3、0.5、0.7 mL，再加入溶出介質定容至8 mL，每個濃度配3份。作為供試品溶液進樣測定。

2 結果

2.1 與溶出度相關的理化性質的測定

2.1.1 溶解度的測定：利巴韋林在4種溶出介質中的溶解度均大于200 mg/mL，由此可知，利巴韋林易溶解且溶解度非pH依賴。

2.1.2 不同溶出介質中的穩定性：4種溶液的RSD值(n=5)均小于0.5%，可得利巴韋林在4種溶出介質中12 h內均穩定。

2.1.3 考察過濾膜對利巴韋林的吸附作用：3種溶液的峰面積無明顯變化，也無下降趨勢，可認為過濾膜對利巴韋林無吸附作用。

2.2 液相色譜方法的方法學驗證

2.2.1 線性范圍考察：以濃度為橫坐標，以峰面積為縱坐標，繪制標準曲線，見圖1。

圖1 利巴韋林含量測定方法的標準曲線Fig.1 The standard curve in assay of Ribavirin

求得回歸方程為：Y=14107X+4027，r=1。由此可知，本方法中利巴韋林進樣濃度在2.5～200 μg/mL范圍內線性良好。

2.2.2 精密度實驗：峰面積RSD為0.04%，表明儀器精密度良好。

2.2.3 回收率實驗：4種溶出介質得到的回收率結果見表1。

表1 4種溶出介質的回收率測定結果Tab.1 Recovery results of four kinds of dissolution mediums

2.3 溶出曲線測定結果 各企業產品在不同溶出介質中的溶出曲線見圖1，15 min時的平均溶出量結果表2。由結果可知，A企業與D企業的膠囊可以在4種溶出介質中15 min時的平均溶出量達到85%以上，而B企業膠囊在pH1.2鹽酸溶液中不能達到此標準，C企業膠囊在pH1.2鹽酸溶液和水中不能達到此標準。不同溶出介質中，pH4.5及pH6.8緩沖液中各企業溶出行為較一致，而在pH1.2和水的溶出介質中，各企業溶出行為差異較大。

圖1 利巴韋林膠囊在不同溶出介質中的溶出曲線A：pH1.2溶出介質；B： pH4.5溶出介質；C：水；D：pH6.8溶出介質Fig.1 Dissolution curves of Ribavirin capsules in different mediumsA:pH1.2 medium；B: pH4.5 medium；C:水；D:pH6.8 medium

不同介質平均溶出度企業A企業B企業C企業DpH1.2溶出介質100%71%74%102%pH4.5溶出介質98%95%96%99%水98%86%76%99%pH6.8溶出介質98%99%92%96%

3 討論

常規的膠囊溶出裝置為轉籃，FDA溶出數據庫中推薦的利巴韋林膠囊的溶出條件也為轉籃法。所以本實驗中首選籃法，實驗過程中各企業的膠囊均可以迅速破裂，并且由于工藝中采用了制粒的步驟，膠囊內容物會逐漸從轉籃中析出，這樣就不會出現由于轉籃無法更有效的帶動積于杯底的粉末而造成溶出滯后的現象。由實驗現象可得籃法適合利巴韋林膠囊。

根據建立溶出曲線測定方法的指導性建議[8-9]，一般從低轉速開始實驗。采用籃法中較低轉速50 r/min的實驗結果中，如果以15 min平均溶出量大于85%為限度，有3條曲線未達到要求，具體為B企業的pH1.2的溶出介質和C企業pH1.2和水的溶出介質。鑒于FDA溶出數據庫中提供的參考方法中轉速為100 r/min，所以將這3條溶出曲線在100 r/min的條件下再次測定，實驗結果為這3條溶出曲線15 min時的溶出量均比50 r/min下提高了約10%，所以它們在100 r/min的條件下均可達到15 min溶出大于85%的要求或處于達標邊緣。如果從50 r/min時溶出的差別并不能代表體內溶出過程的差別的角度，可以選擇100 r/min。但本文從建立具有一定區分力的溶出方法的角度選擇了50 r/min的轉速條件，因為有區分力的方法可以更好的為提高質量服務。

溶出試驗初期進行了5、10、15、20、25、30、40、60 min這8個時間點的取樣。經過測定利巴韋林膠囊溶出迅速，20 min和30 min溶出量的差值小于10%，而30 min時大部分的樣品已達到溶出的飽和狀態，所以取消了25 min和40 min的時間點。

溶出試驗中發現即使同廠家同批次的各粒膠囊之間溶出行為的差異也比較大，如50 r/min的條件下C廠家15 min時12粒膠囊的平均溶出量為74%，而12粒膠囊的實際溶出量為62%～95%，RSD=16%(n=12)。此外利巴韋林膠囊為速釋制劑，在胃中的溶出對吸收影響較大，但部分企業產品在pH1.2的溶出介質中溶出較慢。溶出曲線測定中反映的問題說明國產利巴韋林膠囊的制劑工藝水平還有提升的空間。

多種pH溶出介質中的溶出曲線是評價口服固體制劑內在質量的一種重要手段，也是仿制藥質量一致性評價的重要手段。利巴韋林膠囊的原研產品為Merck制藥廠生產的Rebetol[10]，但該產品從未在國內進口，在原研產品不易獲得的情況下，對國內制劑產品的溶出行為的考察就尤為重要。本工作也為利巴韋林膠囊仿制藥質量一致性評價工作的進一步開展提供了實驗基礎。

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[10] U.S.Department of health and human services.FDA Orange Book[S].2015,35th

(編校：王冬梅)

Establishment of dissolution curves test method of Ribavirin capsules and investigation with domestic ribavirin capsules of dissolution behavior

YANG Hong-miao1, LIN Juan2, MIN Qi3, LIAO Hai-ming1, FAN Hui-hong1Δ

(1.National Institutes for Food and Drug Control, Beijing 100050, China; 2.Xinjiang Uygur Autonomous Region institute For Food and Drug Control, Wulumuqi 830004, China; 3.Jinzhou Institute for Drug control, Jinzhou 121001, China)

ObjectiveTo establish the dissolution curves test method of Ribavirin capsules, and investigate dissolution behavior of domestic Ribavirin capsules.To provide experimental basis for generic drugs quality consistency evaluation.MethodsAccording to the first dissolution method(basket method)stated in appendix Ⅹof Chinese Pharmacopeia(2010 edition)，the rotation speed was 50 r/min with dissolution medium volume of 900 mL. The dissolution profiles of Ribavirin capsules in four different mediums(pH 1.2 hydrochloric acid solution，pH 4.5 acetic buffer，pH 6.8 phosphate buffer and water)were determined by HPLC.The determination was performed on C18column with mobile phase consisted of 4 g/L sodium dihydrogen phosphate solution(pH adjusted to 5.0±0.05 using 5% sodium hydroxide solution)-acetonitrile(98:2)at the flow rate of 1.0 mL/min.The detection wavelength was 225 nm，and sample size was 10 μL.ResultsThe linear range of ribavirin was 2.5-200 μg/mL(r=1).RSD of precision and stability tests were lower than 0.5%.The average recoveries were 101.3%, 100.7%, 100.2%, 100.4% in four mediums.Dissolution behavior of capsules can be more consistent and rapid dissolution in pH4.5 and pH6.8 mediums.But they were quite different in pH1.2 and water mediums, and some of their average dissolution at 15 min could not reach 85%.ConclusionThis method is accurate and reliable.There is a difference between domestic Ribavirin capsules dissolution behavior, and the formulation processes have room for improvement.

Ribavirin capsules；dissolution curves；generic drugs quality consistency evaluation

楊洪淼，女，碩士，助理研究員，研究方向：生化藥品的質量分析和質量標準的研究，E-mail：yanghongmiao@163.com；范慧紅，通訊作者，女，博士，研究員，研究方向：生化藥品的質量分析和質量標準的研究，E-mail：shenghuayaoshi@126.com。

R917

A

1005-1678(2015)09-0155-03