HPLC法測定清熱潤燥口服液中苦杏仁苷的含量

李月亭陳凌云魏丹霞余曉玲▲.云南中醫(yī)學院，云南昆明650500；.昆明市中醫(yī)醫(yī)院，云南昆明6500

HPLC法測定清熱潤燥口服液中苦杏仁苷的含量

李月亭1△陳凌云1魏丹霞2余曉玲2▲
1.云南中醫(yī)學院，云南昆明650500；2.昆明市中醫(yī)醫(yī)院，云南昆明650011

[摘要]目的 采用HPLC法測定清熱潤燥口服液中苦杏仁苷含量。 方法 色譜柱DiKma C18-EP （4.6mm×250mm，5μm）；流動相為甲醇-0.1%磷酸水溶液（7:93）；檢測波長207nm，流速1.0mL/min，柱溫25℃。 結果 苦杏仁苷進樣量在0.215～4.300μg范圍內有良好的線性關系，r=0.9999?；厥章蕿?8.91%，RSD=1.73%（n=9）。結論 此法重現(xiàn)性好，準確，簡便，適用于清熱潤燥口服液含量測定及質量控制。

[關鍵詞]HPLC；清熱潤燥口服液；苦杏仁苷；含量測定

△云南中醫(yī)學院2013級碩士研究生

▲通訊作者

清熱潤燥口服液是由桑葉、蘆根、陳皮、苦杏仁、麥冬、沙參、茯苓等13味中藥組成的復方制劑。該處方經過了30余年的臨床應用，具有較好的清熱養(yǎng)陰、潤燥止咳的作用，臨床療效較好[1-3]。本文通過對方中苦杏仁中苦杏仁苷含量的測定以達到有效控制清熱潤燥口服液質量控制。

1 儀器與材料

AgiLent 1100高效液相色譜儀（自動進樣器、DAD檢測器、恒溫柱溫箱），色譜柱DiKma C18-EP （4.6mm×250mm，5μm），KS-300超聲儀（上海冠特超聲儀器有限公司），電熱恒溫水浴鍋（北京永光明醫(yī)療儀器廠），BP-211D型電子分析天平（德國Sartorius）。

清熱潤燥口服液（批號150616）由昆明市中醫(yī)醫(yī)院制劑室提供；苦杏仁苷對照品（編號為：110820-201506）購自中國藥品生物制品檢定所；甲醇為色譜純（Fisher Scientific）；水為高純水；其余均為分析純。

2 方法與結果

2.1色譜條件[4]

色譜柱：DiKma C18-EP（4.6mm×250mm，5μm）；流動相：甲醇-0.1%醋酸（7:93）；檢測波長為207nm。流速1.0mL/min，柱溫25℃；進樣量：10μL；理論板數(shù)按苦杏仁苷峰計算，應不低于4000。在以上色譜條件下，苦杏仁苷的保留時間約為36.02min（見圖1～3）。

2.2對照品溶液的制備

精密稱取經五氧化二磷減壓干燥24h的苦杏仁苷對照品適量，加甲醇制成每1mL含0.215mg的溶液，即得。

圖1　苦杏仁苷標準品（t/min）

圖2　清熱潤燥口服液供試品（t/min）

圖3　陰性對照品（t/min）

2.3供試品溶液的制備[5-11]

精密吸取清熱潤燥口服溶液10mL，置蒸發(fā)皿中，于水浴上加熱揮干，加80%甲醇溶解，轉移至25mL量瓶中，加80%甲醇至約20mL，超聲處理（頻率100kHz，輸出功率400W）15min，放冷后用80%甲醇稀釋至刻度，搖勻濾過，棄去初濾液，續(xù)濾液用0.45μm濾膜過濾置進樣瓶，即得。

2.4陰性對照品溶液的制備

照供試品溶液的制備方法，按處方比例制備不含苦杏仁的陰性對照品溶液。

2.5線性關系考察

取苦杏仁苷對照品溶液（0.215mg/mL）1、 2、5、10、15、20μL注入液相色譜儀，照上述色譜條件測定峰面積，結果見表。以峰面積（Y）為縱坐標，進樣量（μg）為橫坐標（X），繪制標準曲線，并計算回歸方程。結果苦杏仁苷對照品的回歸方程為Y=966.94X-0.1646（r=0.9999），苦杏仁苷在0.215～4.300μg范圍內，峰面積與進樣量有良好的線性關系。

2.6精密度試驗

精密取苦杏仁苷對照品溶液，重復測定6次，每次10μL，RSD=0.13%（n=6）。

2.7重復性試驗

取同一批清熱潤燥口服溶液6份，每份10mL，按供試品溶液制備方法制備供試液，進行含量測定，計算結果，苦杏仁苷含量的RSD=2.76%（n=6）。

2.8回收率試驗

取同一批已知含量的清熱潤燥口服溶液（苦杏仁苷0.230mg/mL）9份，每份10mL，置錐形瓶中，精密加入苦杏仁苷對照品溶液（苦杏仁苷0.215mg/mL）5、10、15mL，每份均精密補加甲醇至50mL，按2.3項下方法制備供試液，取10μL注入液相色譜儀測定含量，計算回收率。見表1。

表1　加樣回收率試驗結果（n=9）

2.9含量測定

依本法測定不同批次供試品3批。見表2。

表2　供試品中苦杏仁苷的含量測定結果

3 討論

試驗中也曾測過桑葉中蘆丁含量，可能由于中藥煎煮過程中蘆丁損失較大，經測含量低于萬分之一。而苦杏仁是清熱潤燥口服液方中主要藥味之一，其主要功效是降氣止咳平喘，潤腸通便之功效[12-16]。苦杏仁苷為苦杏仁含量指標成分[1，17]。通過此法對清熱潤燥口服液中苦杏仁苷含量的測定，可有效地控制本制劑的含量。

試驗中對比采用乙腈-0.1%醋酸（7∶93）為流動相發(fā)現(xiàn)苦杏仁苷峰有干擾，分離度未能達到要求，而按《中國藥典》2010年版（一部）苦杏仁中苦杏仁苷的測定方法測定甲醇-0.1%醋酸（8∶92），出峰時間為5min左右，且雜峰較多；將流動相調整為甲醇-0.1%醋酸（6∶94）時，出峰時間在60min之后，經反復摸索選擇甲醇-0.1%醋酸（7∶93）為流動相，拖尾因子及分離度均符合要求，且出峰時間適宜。

在供試品溶液制備中，分別選擇了100%、80%、60%甲醇進行供試品制備，經含量測定后，80%甲醇測得的苦杏仁苷峰面積最大，故最終優(yōu)選80%甲醇作為供試品溶液的制備。

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[中圖分類號]R286.0

[文獻標識碼]B

[文章編號]2095-0616（2015）23-69-03

[基金項目]云南省財政廳、云南省衛(wèi)生廳資助項目（云衛(wèi)發(fā)[2009]1134號）。

收稿日期：（2015-09-28）

Determination of amygdalin contents in heat-clearing drynessmoistening oral liquid by HPLC

LI Yueting1CHEN Lingyun1WEI Danxia2YU Xiaoling2
1.Yunnan University of Traditional Chinese medicine, Kunming 650500, China; 2.Kunming Hospital of Traditional Chinese medicine, Kunming 650011, China

[Abstract]Objective To determinate of amygdalin contents in heat-clearing dryness-moistening oral liquid by HPLC. Methods Column was DiKma C18-EP(4.6mm×250mm,5μm), mobile phase was methanol-0.1% phosphoric acid solution (7:93), detection wavelength was207nm, flow was 1.0mL/min and the column temperature was 25℃. Results Injection volume of amygdalin had good linear relationship at the range of 0.215 to 4.300μg, r=0.0009. The recycle rate was 98.91%, RSD=1.73% (n=9). Conclusion The method has good reproducibility and it is simple and accurate, suitable for determination contents and quality control of in heat-clearing dryness-moistening oral liquid.

[Key words]HPLC; Heat-clearing dryness-moistening oral liquid; Amygdalin; Contents determination