氣相色譜法測定鹽酸美金剛緩釋膠囊的含量

鐘春華 陳剛勝 姜 濤 李孝壁江蘇豪森藥業股份有限公司，江蘇連云港 222069

氣相色譜法測定鹽酸美金剛緩釋膠囊的含量

鐘春華 陳剛勝 姜 濤 李孝壁
江蘇豪森藥業股份有限公司，江蘇連云港 222069

[摘要]目的 建立氣相色譜法測定鹽酸美金剛緩釋膠囊含量的分析方法。 方法 采用氣相色譜法，DB-1石英毛細管柱（30m×0.53mm，1.0μm），進樣口溫度為210℃；氫火焰離子化（FID）檢測器，載氣為氮氣，檢測器溫度為300℃，柱初溫70℃，以5℃/min升溫速率升至170℃；以鹽酸金剛烷胺為內標物測定鹽酸美金剛緩釋膠囊的含量。 結果 鹽酸美金剛在28.4～568μg/mL范圍線性關系良好，相關系數大于r=0.9990 （n=6），精密度試驗的RSD為小于0.49%（n=6）。 結論 所建立的方法準確、回收率較為理想，能滿足鹽酸美金剛緩釋膠囊的含量測定。

[關鍵詞]氣相色譜法；鹽酸美金剛緩釋膠囊；內標物；含量

阿爾茨海默病（Alzheimer disease，簡稱AD）是一種中樞神經系統退行性疾病，是老年人最常見的神經變性疾病[1-6]。AD的起病隱襲，病程呈慢性進行性，臨床上以記憶障礙、失語、失用、失認、視空間技能損害、執行功能障礙以及人格和行為改變等全面性癡呆表現為特征。由于AD患者伴有不同程度的記憶缺失、認知障礙，生活不能自理，不但嚴重影響患者本身的生活質量，還給家庭和社會帶來沉重的負擔。因此AD是當今公認的醫學和社會學難題，已引起各國政府和許多研究人員的廣泛重視。

目前，國內外用于治療AD的藥物主要包括膽堿酯酶抑制劑和NMDA受體拮抗劑。雖然目前已有多種膽堿酯酶抑制劑應用于市場，但是僅用于治療輕度至中度AD患者。鹽酸美金剛為一種NMDA受體拮抗劑，是第一個用于治療中度至重度阿爾茨海默型癡呆的藥物，也是目前唯一一個用于治療阿爾茨海默型癡呆的NMDA受體拮抗劑[7-8]。

鹽酸美金剛最初由Merz & Co（麥氏）開發并上市，1982年首次在德國上市，并于2002年5月獲得EMEA批準上市。2003年10月16日，美國FDA批準鹽酸美金剛片（商品名：NAMENDA）上市。2005年4月18日，美國FDA批準Forest公司的鹽酸美金剛口服溶液（商品名：NAMENDA）上市。2010年6月21日，美國FDA又批準了Forest 和Merz兩制藥公司聯合開發的鹽酸美金剛緩釋膠囊（商品名：NAMENDA XR）上市，用于治療阿爾茨海默型癡呆。

在研究鹽酸美金剛緩釋膠囊含量時發現美金剛沒有發色基團，而且美金剛含有非常少的官能團，為形成包含適宜發色團或熒光團的化合物的衍生物非常困難。為此，我們查閱了已經上市的產品鹽酸金剛烷胺的相關檢測方法，有采用非水滴定法，但制劑輔料多會干擾，專屬性不好，也有采用高效液相色譜法，使用用蒸發光檢測器進行檢測，但該方法的重現性較差[9-12]。經過文獻分析和實際試驗結果，本文采用氫氧化鈉將美金剛釋放在正己烷的溶液中，采用毛細管柱氣相色譜法[13-15]，直接進樣，選用鹽酸金剛烷胺為內標物來測定鹽酸美金剛緩釋膠囊的含量。

1 實驗器材

電子分析天平，梅特勒XS105；Agilent 7890 GC氣相色譜儀，安捷倫色譜工作站；色譜柱：DB-1 （30m×0.53mm×1.0μm）。

試劑：氯化鈉、氫氧化鈉（AR，為國藥集團化學試劑股份有限公司）；正己烷、甲醇（HPLC，為MERCK公司；純化水為本公司自制。

2 方法與結果

2.1色譜條件

采用DB-1（30m×0.53mm×1.0μm）毛細管色譜柱，安捷倫色譜工作站；進樣口溫度為210℃；氫火焰離子化（FID）檢測器，載氣為氮氣，檢測器溫度為300℃，柱初溫70℃，以5℃/min升溫速率升至170℃。

2.2系統適用性

本實驗選擇鹽酸金剛烷胺作為內標，其與美金剛的結構類似，極性差異不大，且在所確定的色譜條件下有很好的分離。二者分離良好，說明該方法的系統適用性很好。見表1、圖1。

表1　系統適用性實驗

圖1　系統適用性

2.3線性關系試驗

取鹽酸美金剛對照品（批號：RS20140102）56mg，精密稱定，置100mL量瓶中，以水溶解并稀釋至刻度，搖勻備用；精密量取此溶液0.5mL、1.0mL、2.5mL、4.0mL、5.0mL、10.0mL置10mL量瓶中，用水定量稀釋制成每1mL中分別含鹽酸美金剛為28μg、56μg、140μg、224μg、280μg、560μg的溶液，精密量取上述溶液各2mL，加入2mL正己烷、5mol/L氫氧化鈉溶液1mL、2g NaCl，振搖后取正己烷層分別注入氣相色譜儀，記錄色譜圖，量取峰面積。以濃度為橫坐標，峰面積為縱坐標進行線性回歸，線性回歸方程為：A=3.4465×C-34.9314，相關系數r=0.9996，說明本品在28～560μg/mL范圍內線性良好。見表2。

表2　線性關系

2.4精密度

精密稱取本品內容物適量[批號：20140101 （28mg）]，置100mL量瓶中，加10mL甲醇超聲5min，再加入水適量超聲30min，超聲完畢待冷卻至室溫，用水稀釋至刻度，搖勻，過濾，取續濾液，作為供試品儲備溶液，平行六份；精密稱取鹽酸金剛烷胺對照品28mg，置100mL量瓶中，加水溶解并用稀釋至刻度，作為內標溶液；另取鹽酸美金剛對照品適量，精密稱定，用水溶解并定量稀釋制成每1mL中約280μg的溶液，作為對照品儲備溶液。

精密量取對照品儲備溶液和供試品儲備溶液各2mL，加入2mL內標溶液、5mol/L氫氧化鈉溶液1mL、2mL正己烷、2g氯化鈉，振搖5min，靜置分層，取正己烷層分別注入氣相色譜儀，記錄色譜圖，量取峰面積。按內標法以峰面積計算樣品的含量，同時計算含量的相對標準偏差RSD，考察該方法測定含量的精密度，見表3。

由表3可知含量平均值為97.3%，RSD=0.45% （n=6）；表明該測定含量的方法在本色譜條件下精密度很好。

2.5溶液穩定性

取“精密度”項下的第一份正己烷溶液進行溶液穩定性試驗，分別測定放置0、2、6、8、12、24h后的含量。測定結果見表4。

表3　含量測定精密度

表4　溶液穩定性

本品溶液穩定性試驗中含量的平均值為99.4%，RSD=0.11%（n=6），表明溶液在16h內穩定。

2.6回收率

分別按鹽酸美金剛緩釋膠囊規格的處方，精密稱取鹽酸美金剛對照品（批號：RS20140102，含量：99.9%，水分：0.26%）22mg、28mg、34mg和空白全輔料適量（28mg規格稱取輔料約180mg），置50mL量瓶中，先加10mL甲醇超聲溶解5min，再迅速加入適量水超聲30min，冷卻至室溫，用水稀釋至刻度，搖勻，濾過，精密量取續濾液10mL至20mL量瓶中，用水稀釋至刻度，搖勻，以含量測定濃度為基準，分別配制成含鹽酸美金剛80%，100%，120%的溶液各3份，作為供試品儲備溶液。精密量取上述溶液各2mL，加入2mL內標溶液（精密稱取鹽酸金剛烷胺對照品適量，加水溶解并定量稀釋制成每1mL中含鹽酸金剛烷胺約280μg的溶液），再加入2mL正己烷、5mol/L氫氧化鈉溶液1mL、2g氯化鈉，振搖5min，取正己烷層，作為供試品溶液。另精密稱取鹽酸美金剛對照品適量，加水溶解并定量稀釋制成每1mL中含鹽酸美金剛約280μg的溶液，作為對照品儲備液。

按以上方法配制成對照品溶液。精密量取對照品與供試品溶液1μL分別注入氣相色譜儀，記錄色譜圖，量取峰面積，計算回收量和回收率。見表5。

平均回收率為99.5%，RSD為0.23%，這個規格回收率良好，說明本方法測定含量結果準確、可靠。

3 討論

查閱了大量文獻，經過分析測定鹽酸美金剛的方法有非水滴定法、氣相法、液相法等，但比較完后發現滴定法對測定膠囊含量的專屬性差，而液相法檢測只能選用蒸發光檢測器進行檢測，其穩定性差，且線性范圍太窄，定量準確度差，綜合比較采用氣相法有較好的分離和響應。

由于氣相的進樣誤差大，故此采用內標法來消除進樣的誤差，因此根據內標物選擇的依據，選擇與美金剛具有類似結構、極性相近、且不與待測組分發生化學反應的鹽酸金剛烷胺作為內標物質；而且在樣品制備過程中金剛烷胺以及其鹽的行為方式類似美金剛及其鹽，且回收比率一致，采用金剛烷胺做內標的方法，能夠有效避免樣品前處理及進樣體積誤差對含量測定結果的影響。

由于本品為鹽酸鹽，所以采用酸堿中和后，再加入正己烷萃取，萃取過程中發現分層不是很明顯，故此加入一定量的氯化鈉，可以有效增大萃取率，而且使分層更加明顯，通過實驗最終獲得了很好的萃取效果，達到了樣品處理的問題。

在方法驗證過程中，通過對鹽酸美金剛的線性和范圍、膠囊含量測定精密度、回收率及溶液穩定性等項目的研究，說明最終所建立的氣相色譜方法能有效、準確的測定可鹽酸美金剛緩釋膠囊的含量，且沒有任何干擾，也有著非常好的重現性。

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[中圖分類號]R927.2

[文獻標識碼]B

[文章編號]2095-0616（2015）23-85-04

收稿日期：（2015-08-25）

Determination the content of memantine hydrochloride sustained release capsules by gas chromatography

ZHONG Chunhua CHEN Gangsheng JIANG Tao LI Xiaobi
Jiangsu Hansoh Pharmaceutical Co.,Ltd.，Lianyungang 222069，China

[Abstract]Objective To establish a method for Determination the content of Memantine Hydrochloride Sustained Release Capsules by Gas chromatography. Methods The content of Memantine Hydrochloride Sustained Release Capsules was determined by Gas chromatography with DB-1 capillary column(30m×0.53mm,1μm) with FID detector and nitrogen as the carries gas.The injector temperature was 210℃,the detector temperature was 300℃,the column temperature rosed by program,the initial temperature was 40℃，rosed to 170℃ with a rate of 5℃/min；The content of memantine hydrochloride by internal standard method，with the internal standard substance of Amantadine Hydrochloride. Results The Memantine Hydrochloride was a good linearity over the range of 28.4μg/mL to 568μg/ mL with a the correlation coefficient r higher than 0.9990(n=6),The RSD for repeatition was 0.49%(n=6). Conclusion The method was accurate and the recovery rate of memantine Hydrochloride is ideal，and can meet the requirement for the content of Memantine Hydrochloride Sustained Release Capsules.

[Key words]Gas chromatography;Memantine hydrochloride sustained release capsules;The internal standard substance;Content