蒙藥沙棘中沙棘黃酮對(duì)于放射性造血損傷防護(hù)作用的研究△

劉 偉 衛(wèi)守喆 劉佳佳

(內(nèi)蒙古自治區(qū)人民醫(yī)院，內(nèi)蒙古 呼和浩特 010170)

由于傳染性疾病的逐漸控制，人類平均壽命不斷延長(zhǎng)，惡性腫瘤對(duì)人類的威脅日益顯著。隨著疾病譜的變化，惡性腫瘤已經(jīng)成為目前死亡的常見原因之一，是男性的第二位，女性的第三位死因。據(jù)世界衛(wèi)生組織數(shù)據(jù)表明，到2013年為止，全球每年新增腫瘤患者有1400 多萬例，死亡人數(shù)820 萬人。我國(guó)每年新增腫瘤人數(shù)約200 萬，死亡約140 萬。據(jù)Tubiana1999年報(bào)道，45% 的惡性腫瘤可以治愈。其中手術(shù)治愈22%，放射治療18%，化學(xué)藥物治療5%。同時(shí)，對(duì)于我國(guó)腫瘤患者情況的統(tǒng)計(jì)發(fā)現(xiàn)，其中65 ～75%的患者在治療的過程中接受過放射治療［1］。

但是，放射治療在有效殺滅腫瘤細(xì)胞，控制腫瘤進(jìn)一步增值和擴(kuò)散的同時(shí)也會(huì)對(duì)正常機(jī)體組織表現(xiàn)出一定的損傷作用：如骨髓抑制、造血系統(tǒng)破壞、皮膚黏膜破潰、多臟器系統(tǒng)損傷等。造血組織對(duì)電離輻射極為敏感，有研究表明0.5Gy 放射線全身照射后就會(huì)引起血液學(xué)改變(放療患者隨腫瘤性質(zhì)不同而接受的單次劑量總量也不同，一般為2.0～3.0Gy)。當(dāng)全身或大部分機(jī)體受到較大劑量射線照射后，造血組織的損傷是機(jī)體最早出現(xiàn)的基本損傷之一。放射性造血損傷主要表現(xiàn)為造血功能障礙，由此誘發(fā)機(jī)體感染、出血、免疫功能抑制、死亡等。因此，全身照射后造血系統(tǒng)損傷的輕重和恢復(fù)的快慢在很大程度上影響放療患者的生活質(zhì)量［2］。

因此輻射防護(hù)劑的研發(fā)已成為一個(gè)國(guó)內(nèi)外的熱點(diǎn)課題。無毒或是低毒性的生物制品的研究是現(xiàn)今的趨勢(shì)，而民族醫(yī)藥的獨(dú)特作用已經(jīng)愈發(fā)的引起科研工作者的重視［3，4］。在已有研究的基礎(chǔ)上，發(fā)揮民族醫(yī)藥成分豐富、毒性低等優(yōu)點(diǎn)，重視篩選和系統(tǒng)研究，開發(fā)出適合廣大群眾使用的抗輻射藥品或保健品是現(xiàn)今國(guó)內(nèi)對(duì)于防輻射保護(hù)制劑的研究方向［5］。我區(qū)具有豐富的沙棘資源，是國(guó)內(nèi)出產(chǎn)沙棘的主要省份，沙棘作為傳統(tǒng)的蒙藥有著悠久的藥用歷史，1977年被收入中國(guó)藥典，功能主治止咳祛痰、消食化滯、活血散瘀等，原多用于咳嗽痰多、消化不良、食積腹痛、跌撲瘀腫、瘀血經(jīng)閉等癥狀，現(xiàn)今研究發(fā)現(xiàn)其含有多種維生素、微量元素、氨基酸和其他活性成分，對(duì)于抗氧化、提高機(jī)體免疫力方面均表現(xiàn)出較明確的效果［6］，故而其在保護(hù)輻射損傷，尤其是對(duì)于放射性造血損傷的保護(hù)作用方面有著巨大的潛在研究?jī)r(jià)值［7］。但現(xiàn)今關(guān)于沙棘主要集中于其對(duì)于人體保健效果的研究，而缺乏對(duì)于其藥用價(jià)值的探討。本研究擬通過動(dòng)物實(shí)驗(yàn)和臨床病例觀察，探討沙棘黃酮對(duì)放射性造血損傷防護(hù)作用。

1 實(shí)驗(yàn)材料

1.1 藥品與試劑：沙棘黃酮膠囊(宇航人集團(tuán)、內(nèi)蒙古)、瑞氏染料(三明市貝真生物科技有限公司、福州)、磷酸二氫鉀(國(guó)華化學(xué)試劑廠，北京)、磷酸氫二鈉(國(guó)華化學(xué)試劑廠，北京)、新潔而滅溶液(華星化工、安徽)、血球計(jì)數(shù)儀(XS800I Sysmex 公司日本)、光學(xué)顯微鏡(萊卡、德國(guó))、微量加樣器(Gilson、法國(guó))、電子天平(Sartorius 德國(guó))

1.2 動(dòng)物及分組：清潔級(jí)昆明小鼠，15 ～20g，購自內(nèi)蒙古大學(xué)實(shí)驗(yàn)動(dòng)物中心。取小鼠45 只，雌雄不論(16.3 ±1.4)，隨機(jī)分為3 組，即正常對(duì)照組、低劑量治療組、高劑量治療組，每組15 只，適應(yīng)性飼養(yǎng)1 周。

2 方 法

2.1 實(shí)驗(yàn)?zāi)Ｐ椭苽洌好恐恍∈笥枰?0Coγ4Gy 一次性全身照射，照射距離30cm。并于照射當(dāng)日起連續(xù)7d，低劑量治療組每只小鼠予以10ml/kg 沙棘黃酮灌服;高劑量治療組每只小鼠予以20ml/kg 沙棘黃酮灌服，對(duì)照組予以20ml/kg食用油灌服。連續(xù)7d。

2.2 標(biāo)本采集及處理：實(shí)驗(yàn)7d 后行眼球摘除收取外周血通過血球計(jì)數(shù)儀進(jìn)行血細(xì)胞計(jì)數(shù)。脫頸處死小鼠，無菌條件下剝離股骨，分別剪斷股骨頭及股骨遠(yuǎn)端，暴露骨髓腔。抽取骨髓，用1ml 無菌注射器，吸取0.2ml 無菌生理鹽水，輕輕插入骨髓腔，沖出骨髓，推片，行瑞氏染色。

2.3 指標(biāo)觀察：同時(shí)觀察各組照射7d 內(nèi)的體重、進(jìn)食、精神、活動(dòng)等日常指標(biāo)。通過血球計(jì)數(shù)儀進(jìn)行血細(xì)胞計(jì)數(shù)。觀察骨髓涂片的細(xì)胞增殖情況。

2.4 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法：結(jié)果通過SPSS11.0 統(tǒng)計(jì)分析，采用率及x(_)±S 的形式表示，采用檢驗(yàn)和t 檢驗(yàn)進(jìn)行，P＜0.05 具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

3 結(jié) 果

3.1 白細(xì)胞變化情況：取外周血行血細(xì)胞計(jì)數(shù)儀檢測(cè)白細(xì)胞數(shù)量。結(jié)果顯示高劑量(沙棘黃酮20ml/kg 灌服)組白細(xì)胞數(shù)量為1.799 ±0.228 ×109優(yōu)于低劑量(沙棘黃酮10ml/kg 灌服)組1.447 ±0.304 ×109(P＜0.05)及空白對(duì)照組對(duì)照組1.414 ±0.212 ×109(P＜0.05)，表示沙棘黃酮對(duì)于放射性造血系統(tǒng)的損傷具有防護(hù)作用。(圖1)

圖1 各組間白細(xì)胞變化情況(10⌒9 個(gè)/L)

3.2 骨髓涂片結(jié)果分析：如下圖所示，對(duì)照組中骨髓有核細(xì)胞數(shù)量減少，高劑量灌服組(圖2 -C)及低劑量灌服組(圖2 -B)較空白對(duì)照組(圖2 -A)骨髓細(xì)胞增殖明顯。提示沙棘黃酮灌服后對(duì)于小鼠自身造血系統(tǒng)的動(dòng)員具有促進(jìn)意義，使其可以較為有效的拮抗放射線對(duì)于小鼠造血系統(tǒng)所造成的損傷。

圖2 實(shí)驗(yàn)7d 各組間骨髓涂片結(jié)果(100 ×)

3.3日常指標(biāo)觀測(cè)：實(shí)驗(yàn)組與對(duì)照組相比較，小鼠進(jìn)食有所恢復(fù)、精神狀態(tài)略有改觀、日常活動(dòng)尚可。就體重增加指標(biāo)而言(圖3)，對(duì)照組7d 體重累計(jì)增加0.71 ±1.23，低劑量實(shí)驗(yàn)組7d 體重累計(jì)增加1.13 ±0.68，高劑量實(shí)驗(yàn)組7d體重累計(jì)增加1.38 ±0.72，組間比較均有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(P＜0.05)，且各組未見死亡樣本。

圖3 7 天各組間體重增加情況(g/只)

4 討 論

就本實(shí)驗(yàn)的結(jié)果而言，我們可以清晰的觀察到在對(duì)于放射線損傷的小鼠進(jìn)行一定量的沙棘黃酮灌服后，對(duì)于造血功能的恢復(fù)具有一定的促進(jìn)作用。通過對(duì)于外周血象白細(xì)胞數(shù)值的指標(biāo)觀察，我們發(fā)現(xiàn)，沙棘黃酮灌服較未行治療的對(duì)照組，白細(xì)胞明顯升高。同時(shí)具有一定的量效關(guān)系，較低劑量的沙棘黃酮灌服(10ml/kg)這一上升現(xiàn)象不明顯，而隨著劑量的進(jìn)一步增加(20ml/kg)，白細(xì)胞的取得了明顯的上升。但我們也應(yīng)當(dāng)清晰的認(rèn)識(shí)到，雖然實(shí)驗(yàn)組較對(duì)照組白細(xì)胞的數(shù)值增加，但是這一增加的數(shù)值并未使得實(shí)驗(yàn)組小鼠的白細(xì)胞數(shù)值升為正常水平。但是這畢竟具備了上升的趨勢(shì)，也為我們進(jìn)一步實(shí)驗(yàn)提供了理論依據(jù)和可能。同時(shí)我們實(shí)驗(yàn)選取的作用時(shí)間間隔較短，這也限制了我們的數(shù)據(jù)未能有較為突出的變化的可能。我們有理由相信如果進(jìn)一步延長(zhǎng)作用時(shí)間，后續(xù)會(huì)取得更為理想的效果。

對(duì)于骨髓涂片的結(jié)果觀察，我們發(fā)現(xiàn)，對(duì)照組的骨髓有核細(xì)胞數(shù)目較正常明顯減少，顯示其處于一種骨髓抑制的狀態(tài)，這與放射線照射后骨髓細(xì)胞活性抑制，各系細(xì)胞數(shù)目減少這一現(xiàn)象相吻合。而治療組(低、高劑量組)相對(duì)于對(duì)照組而言，骨髓細(xì)胞增殖明顯增加，且高劑量組更為明顯，骨髓增殖活性增加。提示造血系統(tǒng)予以動(dòng)員，這也為治療組白細(xì)胞數(shù)量有增加的趨勢(shì)這一現(xiàn)象提供了理論依據(jù)。說明沙棘黃酮對(duì)于機(jī)體造血系統(tǒng)具有保護(hù)作用，其可以較為有效的拮抗放射線對(duì)于造血系統(tǒng)的損傷。

生命體征指標(biāo)的觀察中，我們也可以看到實(shí)驗(yàn)組與對(duì)照組相比較，小鼠進(jìn)食有所恢復(fù)、精神狀態(tài)略有改觀、日常活動(dòng)尚可。就體重增加指標(biāo)而言，治療組(低、高劑量組)相對(duì)于對(duì)照組體重有所增加。

4 結(jié) 論

4.1 沙棘黃酮可以較為有效的拮抗放射線對(duì)于小鼠造血系統(tǒng)的損傷，對(duì)機(jī)體具有較為明顯的抗輻射作用。

4.2 沙棘黃酮的抗輻射作用具有一定的量效關(guān)系。

［1］陳孝平，汪建平.外科學(xué)［M］.第8 版.北京：人民衛(wèi)生出版社，2013：201.

［2］殷蔚伯主編.腫瘤放射治療學(xué)［M］.第4 版.北京：中國(guó)協(xié)和醫(yī)科大學(xué)出版社，2008：231 -261.

［3］王曉波，侯新然，襲榮剛，等.中藥防輻射作用研究進(jìn)展［J］.人民軍醫(yī)，2012，55(3)：262 -265.

［4］石童，王陳，蔣輝，等.抗輻射生物藥物的研究進(jìn)展［J］.國(guó)際藥學(xué)研究雜志，2014，41(6)：54 -58.

［5］趙紅，黃黎明.抗輻射中藥的研究現(xiàn)狀及進(jìn)展［J］.實(shí)用藥物與臨床，2008，11(4)：238 -240.

［6］吳斯琴，畢力格，包勒朝魯，等.沙棘藥理作用研究進(jìn)展［J］.中國(guó)藥業(yè)，2015，24 (1)：101 -102.

［7］賽喜雅，拉圖，那音珠日噶.蒙藥材沙棘的研究現(xiàn)狀［J］.北方醫(yī)藥，2014，11(3)：70 -71.