子宮內膜異位病灶中NF—κBp65的表達及意義

朱虹　高軍

[摘要] 目的 探討核轉錄因子kappaB p65（NF-κB p65）在不同部位子宮內膜異位病灶中的表達及意義。 方法 收集我院住院手術的子宮內膜異位癥手術組織標本48例（包括盆腔外特殊部位的子宮內膜異位癥16例，卵巢子宮內膜異位癥32例），同期在位內膜22例，正常子宮內膜20例作為對照，采用免疫組化法檢測NF-κB p65在上述各組內膜中的表達情況及與臨床分期的關系。 結果 各組內膜均存在NF-κB p65的陽性表達，NF-κB p65蛋白表達于腺上皮細胞的胞核和胞漿，在盆腔外子宮內膜異位癥異位病灶、卵巢子宮內膜異位癥的異位內膜、在位內膜、正常子宮內膜中表達依次減少，差異有統計學意義（P<0.05），增生期與分泌期的子宮內膜相比，差異無統計學意義（P>0.05）。卵巢內異癥異位內膜中NF-κB p65的表達與臨床分期無明顯相關性。 結論 盆腔外子宮內膜異位癥異位病灶、卵巢子宮內膜異位癥的異位內膜中均存在NF-κB p65的高表達，提示其可能參與了子宮內膜異位癥的發生發展過程。

[關鍵詞] 子宮內膜異位癥；核轉錄因子kappaB p65；免疫組織化學

[中圖分類號] R737.31；R711.71 [文獻標識碼] A [文章編號] 1673-9701（2015）11-0019-03

[Abstract] Objective To explore the expressions and significance of NF-κB p65 in different place endometriosis.Methods A total of 48 specimans with endometriosis （16 cases of extrapelvic endometriosis，32 cases of ovarian endometriosis and meanwhile 22 cases of eutopic endometrium） were enrolled in the study，20 cases of normal endometrium were involed as control group. Immunoh istochemistry was used to detect the expressions of NF-κB p65 in above groups. Results The expressions of NF-κB p65 were found in the glandular epithelial cells in all groups. The extrapelvic endometriosis cases showed the highest expression，followed by ectopic endometrium， eutopic endometrium，and showing the lowest in normal endometrium，the difference among those groups was significant （P<0.05）. However， the difference between prolificative phase and secretory phase was not significant （P>0.05）. Furthermore， there was no correlation with clinical stages in ovarian endometriosis. Conclusion NF-κB p65 proteins are highly expressed in extrapelvic and ectopic endometrium，which suggests that they may participate in the development and progression of endometriosis.

[Key words] Endometriosis；Nuclear factor-κB p65； Immunohistochemistry

子宮內膜異位癥（endometriosis，EMs）簡稱內異癥，是指具有生長功能的子宮內膜腺體和間質種植在子宮腔被覆黏膜以外的其他部位引起的疾病，可導致痛經、不孕、盆腔痛及月經改變等癥狀，內異癥具有類似惡性腫瘤發生侵襲、轉移的特性，復發率高，治療效果不理想，嚴重影響婦女的生活質量。NF-κB作為一種關鍵性的轉錄因子，已證實可通過調節細胞增殖、凋亡、遷移等相關因子的轉錄，參與腫瘤的生長和侵襲轉移。本研究中，我們采用免疫組化法檢測NF-κB p65蛋白在盆腔外內異癥、卵巢內異癥的異位內膜、在位內膜及正常子宮內膜中的表達，了解NF-κB p65在上述各組內膜的表達差異及與臨床分期的相關性，探討NF-κB p65在內異癥發生發展中的作用，為內異癥的診斷和治療提供新的實驗依據。

1 資料與方法

1.1 一般資料

本研究共收集組織標本90例，均來自于江西省人民醫院婦科的住院患者，均經病理證實；其中卵巢異位內膜組織32例（巧克力囊腫），內異癥在位內膜22 例，正常子宮內膜20 例，盆腔外內異癥病灶16例；盆腔外內異癥組標本采集于2006年1月～2014 年8 月，異位部位包括直腸2 例，膀胱1 例，宮頸2 例，后穹隆1 例，腹壁10例；32例卵巢異位內膜組標本采集于2013年8月～2014 年8 月收治的卵巢巧克力囊腫患者，年齡19～45 歲，平均34.6 歲，按照1985 年美國生育協會修改的rAFS 分期法，Ⅰ期7例，Ⅱ期10例，Ⅲ期8 例，Ⅳ期7例；22 例卵巢內異癥患者在位內膜取自上述因內異癥而行子宮切除的子宮在位內膜，或診刮所得的子宮內膜，其中增生期12例，分泌期10 例；正常對照組20例為同期因輸卵管性不孕癥、子宮畸形住院手術診刮所得的子宮內膜，其中增生期10 例，分泌期10 例，均排除其他子宮內膜病變。所有患者術前6個月未用過內分泌藥物，6個月內無妊娠和哺乳史，月經規則。

1.2 主要試劑

兔抗人NF-κB p65多克隆抗體即用型工作液購自武漢博士德生物公司。

1.3 實驗方法

離體標本取材后置于4%多聚甲醛中固定，脫水，石蠟包埋，每份標本切片3 張，厚度為4 μm，部分盆腔外內異癥病例少見，收集既往病例蠟塊重新切片。分別進行NF-κB p65的免疫組化染色和HE 染色。

1.4 免疫組化結果判定

細胞漿內棕黃色顆粒狀著色即為陽性。按FDA 推薦的染色強度分級：①陰性（-）：細胞無著色或陽性細胞數< 5%；②弱陽性（+）：細胞輕度著色呈淡黃色，陽性細胞數5%～25%；③陽性（++）：細胞著色呈深黃色，陽性細胞數25%～50%；④強陽性（+++）：細胞明顯著色，呈棕黃色，陽性細胞數>50%。結果判斷在雙盲下進行，每張切片由兩名經驗豐富的病理科醫生分別計數。

1.5 統計學處理

應用SPSS17.0 統計學軟件進行分析，多組間比較采用χ2檢驗的Fisher確切概率法，兩兩比較采用Pearson卡方檢驗，P<0.05 為差異有統計學意義。

2 結果

2.1 NF-κB p65在各組中的表達情況

NF-κB p65陽性表達主要見于子宮內膜腺上皮細胞的胞漿，在異位內膜的間質中亦有表達，見封三圖2～5。

2.2 NF-κB p65在各組子宮內膜中的表達情況

NF-κB p65在盆腔外子宮內膜異位癥異位病灶、卵巢子宮內膜異位癥的異位內膜、在位內膜、正常子宮內膜中的表達依次減少，差異有統計學意義（P<0.005）；兩兩相比，差異均有統計學意義（P<0.05）；在位內膜和正常內膜中增生期與分泌期NF-κB p65表達差異無統計學意義（P>0.05）。見表1。

2.3 卵巢內異癥異位內膜中NF-κB p65與臨床分期的相關性

卵巢內異癥異位內膜NF-κB p65在子宮內膜異位癥rAFS臨床各期的表達率差異無統計學意義（P>0.05），提示與rAFS臨床分期無明顯相關性。見表2。

3 討論

內異癥的發病率呈逐年增長的趨勢，約占生育年齡婦女的15%。因其具有侵襲、浸潤、轉移等惡性腫瘤生物學行為，可在盆腔內形成嚴重而廣泛的粘連，造成痛經、慢性盆腔痛、性交痛及月經改變等癥狀。近年來隨著剖宮產率增高，盆腔外的內異癥如腹壁切口內異癥的報道逐年增高[1，2]，嚴重影響患者健康與生活質量。內異癥治療方法采用外科手術和激素治療，但除根治性手術外，其余治療效果均不理想，復發率高，是當前婦科領域研究亟待解決的問題之一。探討內異癥的發病機制成為了內異癥研究的難點和熱點。

核轉錄因子NF-κB是1986年由Bltimore和Rwiansen 在漿細胞和成熟B細胞中發現的，主要存在形式是p50 和RelA（p65）組成的異源二聚體。NF-κB作為多條信號轉錄途徑的交匯點，活化后可促進白介素（IL）、巨噬細胞移動抑制因子（MIF）、血管內皮生長因子（VEGF）、腫瘤壞死因子-α（TNF-α）、基質金屬蛋白酶（MMPs）、黏附分子（ICAM）、凋亡相關因子（caspase-8）等表達[3-6]，參與機體免疫、炎癥、應激等反應的生理病理過程[7]。內異癥相關的大多數細胞因子基因的啟動子都有功能性的NF-κB p65結合位點，NF-κB 的激活后可導致上述細胞因子過度表達，導致子宮內膜異位癥的種植、侵襲和轉移。

已有研究顯示，NF-κB p65在內異癥患者的在位及異位內膜中均有表達，且表達異常增高，而在正常子宮內膜組織表達微弱，提示NF-κB p65在內異癥發病機制中有重要作用[8-12]。NF-κB在月經周期中增生期和分泌期的表達是否存在差異，眾多研究結論不一。本研究結果顯示，卵巢異位內膜NF-κB p65表達高于同期在位內膜（P<0.05），且明顯高于正常內膜（P<0.05）；在位內膜與正常子宮內膜NF-κB p65表達相比，差異有統計學意義（P<0.05）。與多數國內外學者報道一致，提示的過度激活參與了內異癥的發生發病過程。但NF-κB p65的表達在正常人群及內異癥人群的增生期、分泌期表達無顯著性差異，與Gonzalez-Ramos R等的研究結果相似[10，13]。

本研究初步探討了盆腔外內異癥的發病機制，盆腔外內異癥可發生于膀胱、輸尿管、腸管、闌尾、手術瘢痕、疝囊、肺、腎、膈和肢體等盆腔外特殊部位。其中以剖宮產術后腹壁切口子宮內膜異位癥最為常見，目前認為，腹壁切口子宮內膜異位癥的發病機制是手術時子宮內膜帶至切口直接種植所致，屬醫源性種植。本研究結果顯示，盆腔外異位病灶中NF-κB p65表達明顯高于卵巢異位內膜、同期在位內膜，且明顯高于正常內膜（P<0.05）。再次證實了NF-κB p65的高表達，通過調節各種細胞因子的活性，利于內膜的種植和生長。

卵巢內異癥病例中，臨床各期的的表達率差異無統計學意義（P>0.05），提示與rAFS臨床分期無明顯相關性。我們發現，I～II期患者的病灶中亦可存在NF-κB p65的高表達，其原因可能與現行的rAFS 臨床分期僅考慮病灶的大小、深淺，而未考慮到病變的性質有關。在內異癥發病初期，主要為紅色病變，位置表淺，但血管生成旺盛，而且其腺體和間質細胞結構功能完整，具有很強的侵襲能力，本研究中1例Ⅱ期患者NF-κB p65表達呈強陽性，該患者術中卵巢囊腫與盆底輕度粘連，但盆腔內可見散在紅色病灶，提示病灶處于生長活躍期，因此NF-κB p65的表達明顯增高。Ramos等[14]研究也表明，腹膜內異癥病灶中NF-κB 被活化，其中紅色內異癥病灶中NF-κB 的活性明顯高于黑色病灶，表明NF-κB活化與內異癥發病有關。

綜上所述，NF-κB p65參與調控了子宮內膜的異位種植，異常活化的NF-κB p65 在EMs發生發展過程中起著重要作用，我們設想通過調控NF-κB p65有可能調控內異癥的發生發展。進一步探討其在內異癥中侵襲轉移的調控機制，將有助于為內異癥患者的治療提供新的靶點。

[參考文獻]

[1] Ecker AM，Donnellan NM，Shepherd JP，et al. Abdominal wall endometriosis：12 years of experience at a large academic institution[J]. Am J Obstet Gynecol，2014，211（4）：363-365.

[2] Khamechian T，Alizargar J，Mazoochi T. 5-Year data analysis of patients following abdominal wall endometrioma surgery[J]. BMC Womens Health，2014，14（1）：151

[3] 陶姝含，陳雋. 核轉錄因子-κB、巨噬細胞遷移抑制因子與子宮內膜異位癥的臨床相關性研究[J]. 中國婦幼保健，2014，29（16）：2605-2608.

[4] 王芳，何援利，趙汝珠，等. 核轉錄因子-κB和血管內皮生長因子在子宮內膜異位癥中的表達及其相關性[J]. 第四軍醫大學學報，2007，28（2）：153-156.

[5] 王芳，李妍芹，張斌. NF- κB和MMP-1在子宮內膜異位癥中的表達及其相關性研究[J]. 西北國防醫學雜志，2009，30（1）：27-29.

[6] 孔祥，王志堅，盧丹. NF- κB、MIF在子宮內膜異位癥的表達及其相關性研究[J]. 揚州大學學報（農業與生命科學版），2012，33（1）：14-17.

[7] Defrere S，Gonzalez-Ramos R，Lousse JC，et al. Insights intoiron and nuclear factor-kappa B（NF-kappaB）involvementin chronic inflammatory processes in peritoneal endometriosis[J]. Histol Histopathol，2011，26（8）：1083.

[8] Kim SH，Ihm HJ，Oh YS，et al. Increased nuclear expression of nuclear factor kappa-B p65 subunit in the eutopic endometrium and ovarian endometrioma of women with advanced stage endometriosis[J]. Am J Reprod Immunol，2013，70（6）：497-508.

[9] Bianco B，Lerner TG，Trevisan CM，et al. The nuclear factor-kB functional promoter polymorphism is associated with endometriosis and infertility[J]. Hum Immunol，2012， 73（11）：1190-1193.

[10] 蔡亞蘭. NF-κB和MIF的表達與子宮內膜異位癥的臨床相關性研究[J]. 中國婦幼保健，2013，28（7）：1170-1173.

[11] González-Ramos R，Van Langendonckt A，Defrère S. Involvement of the nuclear factor-κB pathway in the pathogenesis of endometriosis[J]. Fertil Steril，2010，94（6）：1985-1994.

[12] 夏偉蘭. NF-κB和PTEN在子宮內膜異位癥中的表達及其意義[D]. 南方醫科大學，2013.

[13] Gonzalez-Ramos R，Rocco J，Rojas C，et al. Physiologic activation of nuclear factor kappa B in the endometrium during the menstrual cycle is altered in endometriosis patients[J]. Fertil Steril，2012，97（3）：645.

[14] Gonzlez-Ramos R，Donnez J，Defrebre S，et al. Nuclear factor-kappa B is constirutively activated in peritoneal endometriosis[J]. Mol Hum Reprod，2007，13（7）：503-509.

（收稿日期：2015-02-13）