肺腺癌細(xì)胞中miR-125a-5p對(duì)吉非替尼耐藥影響

戴 璐 傅文凡 陳文彬

肺腺癌細(xì)胞中miR-125a-5p對(duì)吉非替尼耐藥影響

戴 璐 傅文凡 陳文彬

【摘要】目的 研究肺腺癌細(xì)胞中miRNA對(duì)吉非替尼耐藥的影響。方法 熒光定量PCR檢測(cè)miR-125a-5p在肺腺癌細(xì)胞PC9及吉非替尼耐藥細(xì)胞PC9/GR中的表達(dá)；改變miR-125a-5p在細(xì)胞株中的表達(dá)，觀察其對(duì)吉非替尼耐藥的影響。結(jié)果 miR-125a-5p在PC9細(xì)胞及PC9/GR細(xì)胞中表達(dá)有差異，增加miR-125a-5p在PC9中的表達(dá)，增加細(xì)胞對(duì)吉非替尼耐藥。結(jié)論 miR-125a-5p可促進(jìn)肺腺癌細(xì)胞對(duì)吉非替尼產(chǎn)生耐藥。

【關(guān)鍵詞】肺腺癌；miR-125a-5p；吉非替尼；耐藥

Objective To study the influence of miRNA to gefitinib resistance in Lung adenocarcinoma cells． Methods The miR-125a-5p expressions in PC9 and PC9/GR were analyzed by real-time PCR． Observed the influence of the Change of miR-125a-5p expression to gefitinib resistance ． Results The miR-125a-5p expression in PC9 and PC9/GR were significant differences，and increaseing the miR-125a-5p expression in PC9 obviously promote drug resistance to gefitinib． Conclusion The miR-125a-5p can promote drug resistance to gefitinib in Lung adenocarcinoma cells．

【Key words】 Lung adenocarcinoma，The miR-125a-5p，Gefitinib，Resistance

目前在全球范圍內(nèi)，肺癌在所有惡性腫瘤中死亡率位居第一，發(fā)病率第二，而且大多數(shù)肺癌患者確診時(shí)已發(fā)展至晚期［1］。吉非替尼作為不可手術(shù)的晚期肺腺癌患者的一線(xiàn)治療之一，具有有效率高、毒副作用小、服藥方便等優(yōu)勢(shì)，在臨床中廣泛應(yīng)用。然而用藥患者最終都將產(chǎn)生耐藥，吉非替尼耐藥的機(jī)制主要有T790M、cMET擴(kuò)增、kras突變等［2］。本文主要研究miR-125a-5p對(duì)吉非替尼耐藥的影響。

1 材料與方法

1.1 實(shí)驗(yàn)材料

PC9（肺腺癌細(xì)胞株），PC9/GR（耐藥細(xì)胞株），吉非替尼（AstraZeneca），細(xì)胞培養(yǎng)液及胎牛血清（Hyclone），CCK8 （Dojindo），miRNA mimics（ 銳 博 生 物 ），TurboFectTMsiRNA Transfection Reagent（Fermentas），PCR引物（銳博生物），SYBR Green Mix（TOYOBO），逆轉(zhuǎn)錄試劑盒（Takara）。

1.2熒光定量PCR檢測(cè)miR-125a-5p表達(dá)

PC9及PC9/GR細(xì)胞均在含10%胎牛血清培養(yǎng)液中，培養(yǎng)至對(duì)數(shù)生長(zhǎng)期后消化分離，提取其總RNA，質(zhì)檢合格后，應(yīng)用熒光定量PCR檢測(cè)PC9及PC9/GR細(xì)胞中miR-125a-5p的表達(dá)。

1.3 吉非替尼的敏感性檢測(cè)

待PC9細(xì)胞生長(zhǎng)至對(duì)數(shù)期，消化分離，接種于96孔板中（細(xì)胞濃度：2×104個(gè)/mL）。實(shí)驗(yàn)組轉(zhuǎn)染miR-125a-5p mimics 升高其表達(dá)，對(duì)照組不轉(zhuǎn)染。24 h后兩組都加入50 nmol/L吉非替尼，藥物作用72 h后，用CCK-8檢測(cè)細(xì)胞存活，計(jì)算出抑制率。

1.4 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法

應(yīng)用SPSS 13.0軟件進(jìn)行單因素方差分析或t檢驗(yàn)，檢驗(yàn)水準(zhǔn)P＜0.05。

2 結(jié)果

2.1 miR-125a-5p的表達(dá)

熒光定量PCR檢測(cè)miR-125a-5p在PC9/GR中表達(dá)值比PC9中表達(dá)值降低約2.5倍，且P＜0.05。

2.2 吉非替尼的敏感性

將miR-125a-5p mimics轉(zhuǎn)染至PC9，增高miR-125a-5p的表達(dá)，加入50 nmol/L吉非替尼。實(shí)驗(yàn)組抑制率（14.92%）比對(duì)照組抑制率（41.03%）降低了約26.11%，且P＜0.01。見(jiàn)表1。

表1 吉非替尼的敏感性比較

3 討論

吉非替尼是EGFR敏感突變的晚期肺腺癌患者的一線(xiàn)治療方案，具有毒副作用小、服用方便、患者易于接受等優(yōu)點(diǎn)，廣泛應(yīng)用于臨床，取得了良好的療效，但是絕大多數(shù)患者產(chǎn)生耐藥現(xiàn)象。其耐藥機(jī)制主要有T790M、cMET擴(kuò)增、kras突變等［2］，進(jìn)一步研究其耐藥機(jī)制及如何克服耐藥引起了廣大研究者的興趣。

本課題組前期已對(duì)PC9及PC9/GR進(jìn)行芯片檢測(cè)，篩選出多個(gè)差異表達(dá)miRNAs，其中包括miR-125a-5p在PC9/GR中明顯低表達(dá)［3］。有研究證明miR-125a-5p可通過(guò)上調(diào)Rock-1促進(jìn)肺癌細(xì)胞轉(zhuǎn)移［4］。但是有趣的是，另一個(gè)研究組證明miR-125a-5p通過(guò)EGFR信號(hào)通路抑制肺癌細(xì)胞的侵襲轉(zhuǎn)移［5］。

本實(shí)驗(yàn)證明增加miR-125a-5p在PC9中的表達(dá)，促進(jìn)其對(duì)吉非替尼產(chǎn)生耐藥，但miR-125a-5p的作用靶基因仍需進(jìn)一步研究。綜上所訴，本文為闡明吉非替尼耐藥機(jī)制增加依據(jù)，可為臨床上實(shí)現(xiàn)克服吉非替尼耐藥提供理論基礎(chǔ)。

參考文獻(xiàn)

［1］ Siegel RL，Miller KD，Jemal A ． Cancer statistics，2015［J］． CA Cancer J Clin，2015，65（1）：5-29．

［2］ Suda K，Onozato R，Yatabe Y，et al． EGFR T790M mutation：a double role in lung cancer cell survival？［J］． J Thorac Oncol，2009，4（1）：1-4．

［3］ 戴璐，趙健，張緒超 等． 非小細(xì)胞肺癌吉非替尼耐藥相關(guān)miRNAs的篩選鑒定［J］． 中國(guó)腫瘤臨床， 2012，39（3）：126-130．

［4］ Jiang L，Zhang Q，Chang H，et al． ［hsa-miR-125a-5p Enhances Invasion in Non-small Cell Lung Carcinoma Cell Lines by Upregulating Rock-1］［J］． Zhongguo Fei Ai Za Zhi，2009，12（10）：1069-1073．

［5］ Wang G，Mao W，Zheng S，et al． Epidermal growth factor receptor-regulated miR-125a-5p--a metastatic inhibitor of lung cancer［J］． FEBS J，2009，276（19）：5571-5578．

【中圖分類(lèi)號(hào)】R734．2

【文獻(xiàn)標(biāo)識(shí)碼】A

【文章編號(hào)】1674-9316（2015）21-0149-02

doi：10．3969/j．issn．1674-9316．2015．21．115

作者單位：510095 廣州醫(yī)科大學(xué)附屬腫瘤醫(yī)院肺腫瘤科

基金項(xiàng)目：2012年廣州醫(yī)學(xué)院青年基金項(xiàng)目（項(xiàng)目編號(hào)：2012A14）

Effect of the miR-125a-5p on Grug Resistance in Lung Adenocarcinoma Cells

DAI Lu FU Wenfan CHEN Wenbin Cancer Center of Guangzhou Medical University，Lung Tumor Department，Guangzhou 510095，China

【Abstract】