微柱凝膠法測ABO血型正反定型不符原因分析

沈江濤 陳黎

微柱凝膠法測ABO血型正反定型不符原因分析

沈江濤 陳黎

目的 探討微柱凝膠法測ABO血型正反定型不符原因及處理措施。方法 通過對住院與門診患者3000例進行ABO血型血清學檢測，發生正反定型不符標本18例患者的臨床資料進行回顧性分析。結果 正反定型不符標本18例，其中自身因素占27.78%，治療因素所占比例為22.22%，疾病因素占44.44%。結論 微柱凝膠法為血型檢測的重要方法，鹽水凝集試管法為傳統的血型檢測方法，兩種方法聯合使用可提高疑難血型鑒別的準確性。

微柱凝膠法；ABO血型；正反定型不符；分析

ABO血型同臨床輸血密不可分，準確鑒定血型是保證輸血安全的關鍵，選擇一種準確度高、靈敏度高和操作簡便的方法檢測血型具有重要的臨床意義。微柱凝膠法為傳統血型血清基礎發展的免疫學檢測技術，通過特異免疫反應、分子篩技術及離心技術，將血型同血清與微柱凝膠有機結合，可檢測出微弱血型抗原抗體，但某些特殊情況可出現正反定型不一致情況[1]。應用微柱凝膠法在ABO血型鑒定過程中，會出現抗原減弱、個體疾病、ABO亞型等影響，引發血型正反定型不符情況，若血型定型失誤，可能引發溶血性輸血反應，嚴重甚至威脅患者生命安全[2]。本文通過對住院與門診患者3000例標本進行ABO血型血清學檢測，討論微柱凝膠法測ABO血型正反定型不符原因及應對措施，現分析報道如下。

1 資料與方法

1.1 一般資料 泰州市第二人民醫院2013年1月～2014年10月住院與門診患者3000例標本進行ABO血型血清學檢測，發現正反定型不符標本18例，男11例，女7例，年齡1～73歲，平均年齡（36.74±4.65）歲。

1.2 試劑與儀器 抗A、抗B標準血清(上海血液生物醫藥有限公司)；反定型紅細胞，抗A 1、A 1紅細胞，A 2紅細胞，譜細胞(上海血液生物醫藥有限公司)；ABO、RhD血型定型檢測卡(長春博訊生物技術有限公司)；抗人球蛋白檢測卡(長春博訊生物技術有限公司)。孵育器和專用離心機為長春博研科學儀器有限責任公司產品。

1.3 方法 配血試驗、抗體鑒定和正反定型參照臨床檢驗操作規程，血型檢測標準方法：應用微柱凝膠法進行正反定型鑒定，若正常可發血型報告，若出現正反定型不符、凝集減弱情況時，應用10%紅細胞懸液、增加受檢者血清和血漿進行鹽水凝集試管法，結合顯微鏡觀察結果，若不能得出結論，應將標本、試劑混合置于37℃水浴箱中孵育30 min，離心觀察。通過生理鹽水洗滌標本3次后排除自身抗體影響。疑難血型鑒定后，同型獻血人員標本應采用交叉配血試驗，若無主次側無溶血及凝集，可發血型報告。

2 結果

應用微柱凝膠法檢測，出現ABO正反定型不一致結果共18例。見表1。

3 討論

ABO血型正反定型不符原因包括技術、管理問題，主要包括:標本，試劑錯誤，試劑污染，器材不清潔，離心不足或離心過量，漏加試劑，陽性反應出現溶血現象，結果記錄錯誤，標本紅細胞血清本身問題，發生ABO血型正反定型不符，不可按照ABO血型正定型或者反定型確定血型結果，可導致ABO血型判斷錯誤，應通過復查，檢查ABO血型正反定型不一致原因，保證ABO血型定型準確[3]。紅細胞A、紅細胞B抗原弱化為ABO血型正反定型不一致的常見因素，抗原弱化可以為遺傳因素引發的弱表現型，同時可也以是獲得性，例如白血病患者N-乙酰半乳糖轉移酶或半乳糖酶受抑制可引發紅細胞A抗原、紅細胞B抗原發生弱化，通過結合臨床和血清學特點，準確判定引發抗原弱化因素，正定型中升高1倍以上懸浮紅細胞，同時可通過吸收放散試驗的方式進行檢測[4]。

表1 18例ABO血型正反定型不符原因[n(%)]

ABO血型正反不符因素包括很多方面：（1）自身因素：①亞型：因紅細胞ABO抗原位點少，細胞正定型出現干擾引發定型困難，可選擇受檢者唾液檢測；②冷凝集素：自身冷抗體是影響ABO血型正反定型不符的常見原因。冷凝集素屬于IgM抗體，其多存在于自身及供者紅細胞中，發生全凝集情況。（2）治療因素：①造血干細胞移植：造血干細胞移植導致正反定型不符是因ABO異基因造血干細胞移植，鑒定發生混合凝集，臨床應進行追蹤；②消化道大出血：治療消化道大出血過程中應用甘露醇、羥乙基淀粉等血漿擴容基，導致紅細胞出現為串錢狀，影響結果。（3）疾病因素：①腸道G菌：腸道G菌感染可引起獲得性B抗原，應用吸收試驗檢測檢測抗B，并進行臨床追蹤；②急性白血病：急性白血病患者對半乳糖轉移酶產生影響，使A抗原和B抗原弱化，在檢測過程中可增加紅細胞數量；③自身免疫溶血性貧血：發生自身免疫溶血性貧血，通過抗人球蛋白試驗，自身抗體試驗為陽性，間抗試驗陽性；④多發性骨髓瘤：多發性骨髓瘤易引發非特異性凝集，影響判定結果。（4）人為因素：采錯患者血樣導致標本混淆或標本離心不充分等。

微柱凝膠免疫檢測是指通過微柱腔凝膠介質將紅細胞抗原抗體發生凝聚反應，應用分子篩技術、特異性免疫技術、離心技術原理，將血型血清和凝膠分子篩技術結合，其具有操作簡便、準確度高、靈敏度高等特點，在臨床得到較為廣泛的應用。微柱凝膠法具有較多優點，但其本質是由于克隆抗體同紅細胞凝集進行檢測，抗原和抗體強弱變化、血液異常血清蛋白、自身冷抗體、新生兒未形成抗體、異基因造血干細胞移植均可對微柱凝膠法的測定血型結果產生影響，導致正反定型不一致，最終導致血型判定結果[5]。微柱凝膠卡若保存不當，可導致管內液體降低，患者血清抗體和紅細胞抗原均顯著下降，抗原和抗體搭橋不及時，引發假陽性。鹽水凝集試管可調節血清、血漿使用量和紅細胞濃度，此方法有效彌補微柱凝膠法的缺陷[6]。微柱凝膠法經初次檢測發生正反定型不一致情況，通過提高受檢者紅細胞濃度或增加受檢者血清、血漿兩，改善抗原和抗體比例，調整至最合適比例，應用鹽水凝集試管法，確定正確的血型，由此證明血型抗原、抗體僅為降低，并不是完全缺失。抗原、抗體減弱在影響微柱凝膠法對血型正確鑒定外，高冷凝集素也是影響血型鑒定的重要因素，高效價冷凝集速為患者體內產生的抗自身紅細胞嗜異性冷抗體，此抗體屬于IgM類抗體，體外一定條件下或在室溫條件下其可同ABO系統紅細胞或自身紅細胞發生非特異性凝集反應，在交叉配血、正反定型時出現全凝集現象，導致血型判斷錯誤[7-8]。應用37℃水浴箱和生理鹽水洗滌，將微柱凝膠法同鹽水凝集法結合，保證判斷的準確性。

本研究顯示，應用微柱凝膠法檢測ABO血型，出現配血不合共18例，其中正反定型不符標本18例，其中自身因素占27.78%，治療因素所占比例為22.22%，疾病因素占44.44%,人為因素占5.56%。綜上所述，微柱凝膠法為血型檢測的重要方法，具有優點和不可取代性，鹽水凝集試管法為傳統的血型檢測方法，兩者聯合使用取長補短，提高疑難血型鑒別的準確性，在臨床檢查過程中，遇到正反定型不符合情況應查明原因做出正確的分析。

[1] 張海宇，張珂.微柱凝膠法ABO血型鑒定正反定型不相符的統計及原因探討[J].檢驗醫學與臨床,2012,9(11):1295-1296.

[2] 楊世明，張勇萍，田榆，等.ABO血型正反定型不符與交叉配血不合的原因及其處理方法[J].細胞與分析免疫學雜志,2011,27(7):812-813.

[3] 謝霞，安寧，王文婷，等.輸血前免疫血液學相容性檢查的重要性及其注意事項[J].細胞與分析免疫學雜志,2012,28(12):1338-1339.

[4] 趙勝昔，閆雪霞.孕婦ABO血型鑒定正反定型不符41例原因分析[J].臨床誤診誤治,2013,26(4):96-97.

[5] 李萌，馮麗，王曉衛，等.新生兒血型抗體產生情況分析及微柱凝膠法與鹽水試管法的結合醫院[J].南京醫科大學學報（自然科學版）,2012,32(8):1174-1176.

[6] 趙子賢，李娟紅，李健茹.微柱凝膠法和改良凝聚胺法在免疫性溶血性貧血患者交叉配血中的應用[J].中國醫藥科學,2013,3(15):116-117.

[7] 劉明霞.微柱凝膠免疫檢測ABO血型的局限性及其與鹽水試管法判定血型的結合應用[J].中國誤診學雜志,2010,10(7):1595-1596.

[8] 許琴,李娟,許亞莉.微柱凝膠技術在自身免疫性溶血性貧血實驗診斷中的應用[J].臨床醫學,2011，31（10）：97-98.

10.3969/j.issn.1009-4393.2015.36.030

江蘇 225500 泰州市第二人民醫院輸血科 （沈江濤 陳黎）