HPLC法同時(shí)測定三七花盤中人參皂苷Rb1和人參皂苷Rb3的含量

赫玉芳趙昱瑋司學(xué)玲劉 暢南敏倫▲焦連慶

1.吉林省中醫(yī)藥科學(xué)院，吉林長春 130012；2.修正藥業(yè)長春高新制藥有限公司，吉林長春 130012

HPLC法同時(shí)測定三七花盤中人參皂苷Rb1和人參皂苷Rb3的含量

赫玉芳1趙昱瑋1司學(xué)玲2劉 暢2南敏倫1▲焦連慶1

1.吉林省中醫(yī)藥科學(xué)院，吉林長春 130012；2.修正藥業(yè)長春高新制藥有限公司，吉林長春 130012

目的建立HPLC法同時(shí)測定三七花盤中人參皂苷Rb1和人參皂苷Rb3的含量。方法采用ACE 5 C18（250mm×4.6mm，5μm）色譜柱；流動(dòng)相：乙腈-0.05%磷酸溶液（32∶68）；流速：1.0mL/min；檢測波長：203nm；柱溫：25℃。結(jié)果人參皂苷Rb1和人參皂苷Rb3分別在10.25～143.50mg/L（r=0.9993，n=7）和10.94～153.16mg/L（r=0.9997，n=7）范圍內(nèi)呈良好線性關(guān)系；平均回收率（n=6）分別為98.78%和98.17%。結(jié)論本測定方法簡便、快速、準(zhǔn)確，為三七花盤的綜合開發(fā)利用提供了參考，有利于控制三七花盤的質(zhì)量。

三七花盤；人參皂苷Rb1；人參皂苷Rb3；高效液相色譜法

三七花盤為五加科植物三七[Panax notoginseng（Burk.）F.H.Chen]果實(shí)成熟摘除后的花盤干燥品，又稱三七花梗。主產(chǎn)于云南，民間將其用作茶和食品，對(duì)治病和養(yǎng)生均有好處。目前為止，對(duì)三七根、莖葉、剪口、花研究較多，但是對(duì)三七花盤還沒有將其充分開發(fā)，對(duì)其化學(xué)成分及藥理作用的研究較少，是三七行業(yè)利用較薄弱的資源[1-3]。本研究首次利用高效液相色譜法確定三七主要皂苷類成分為人參皂苷Rb1和人參皂苷Rb3，二者的含量最高，同時(shí)確定了最佳的含量測定方法，為三七花盤作為新資源的開發(fā)利用提供理論依據(jù)及思路。同時(shí)為三七花盤的深加工，提高三七下游產(chǎn)業(yè)附加值具有重要意義，并且對(duì)三七產(chǎn)業(yè)持續(xù)發(fā)展有顯而易見的作用。

1 儀器與試劑

LC-10A高效液相色譜儀（日本島津）；Mettler-Toledo天平AB204-N（梅特勒-托利多儀器上海有限公司）；人參皂苷Rb1和人參皂苷Rb3均購自中國食品藥品檢定研究院（批號(hào)分別為：110704-200718、111686-200801）；三七花盤采于云南文山、廣西德保、山東煙臺(tái)、貴州貴陽、山西咸陽，經(jīng)吉林省中醫(yī)藥科學(xué)院趙全成教授鑒定為三七[Panax notoginseng（Burk.）F.H.Chen]的花盤；甲醇、乙腈磷酸均為色譜純，水為娃哈哈純凈水（20130817）。

2 試驗(yàn)方法與結(jié)果

2.1 色譜條件與系統(tǒng)適用性試驗(yàn)

色譜柱：ACE 5 C18（250mm×4.6mm，5μm）流動(dòng)相：乙腈-0.05%磷酸溶液（32∶68）；流速1.0mL/min；檢測波長：203nm；柱溫：25℃；進(jìn)樣量10μL。理論塔板數(shù)按人參皂苷Rb3計(jì)算應(yīng)不低于5000。分離度達(dá)到要求（圖1）。

圖1 對(duì)照品溶液（a）與樣品溶液（b）高效液相色譜圖

2.2 溶液制備

取精密稱取人參皂苷Rb1對(duì)照品10.25mg、人參皂苷Rb3，對(duì)照品10.94mg，精密稱定，置同一5mL量瓶中，加甲醇溶解并稀釋至刻度，搖勻，作為混合對(duì)照品貯備液。精密吸取混合對(duì)照品貯備液2mL，置10mL容量瓶中，加甲醇使溶解并稀釋至刻度，搖勻，即得混合對(duì)照品溶液。取三七花盤樣品粉末（通過直徑為0.300mm篩），約1.0g，精密稱定，置具塞錐形瓶中，精密加入甲醇50mL，稱定重量，加熱回流提取2h，放冷，稱定重量，用甲醇補(bǔ)足減失的重量，搖勻，過濾得供試品溶液[4-8]。

2.3 方法學(xué)考察

專屬性試驗(yàn)：分別精密吸取2.2項(xiàng)下對(duì)照品溶液及供試品溶液，按上述色譜條件測定，在人參皂苷Rb1及人參皂苷Rb3色譜峰處，供試品溶液色譜具有相同保留時(shí)間的色譜峰。結(jié)果見色譜圖1。

線性關(guān)系考察：分別精密量取混合對(duì)照品貯備液，用甲醇將人參皂苷Rb1配制成質(zhì)量濃度分別為10.25，20.50，41.00，61.50，82.00，102.50，143.50mg/L，將人參皂苷Rb3配制成質(zhì)量濃度分別為10.94，21.88，43.76，65.64，87.52，109.40，153.16mg/L的系列對(duì)照品混合溶液，按上述條件進(jìn)行測定。分別以人參皂苷Rb1、人參皂苷Rb3質(zhì)量濃度為橫坐標(biāo)，以峰面積為縱坐標(biāo)繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線。人參皂苷Rb1、人參皂苷Rb3的回歸方程分別為：y=1.11×104x-4.19×103（r=0.9993）；y=2.62×104x+1.25×103（r=0.9997）；人參皂苷Rb1、人參皂苷Rb3的線性范圍分別為10.25～143.50mg/L和10.94～153.16mg/L。曲線線性良好。

精密度試驗(yàn)：精密吸取對(duì)照品混合溶液，連續(xù)6次進(jìn)樣，測定峰面積。人參皂苷Rb1、人參皂苷Rb3的RSD分別為0.78%、0.99%（n=6），表明儀器精密度良好。

重復(fù)性試驗(yàn)：取同一產(chǎn)地藥材6份，按照供試品溶液制備方法進(jìn)行制備，進(jìn)樣分析，結(jié)果人參皂苷Rb1、人參皂苷Rb3含量的RSD分別為1.2%、1.4%（n=6），表明本實(shí)驗(yàn)方法重復(fù)性良好。

穩(wěn)定性試驗(yàn)：取同一供試品溶液，分別于0、2、4、6、10h，進(jìn)行測定峰面積，人參皂苷Rb1、人參皂苷Rb3的峰面積的RSD分別為1.3%、1.2%（n=5），說明了該溶液在8h內(nèi)穩(wěn)定性良好。

加樣回收試驗(yàn)：精密稱取三七花盤（云南文山）6份各約0.5g，置于50mL錐形瓶中，分別精密加入濃度為8.342mg/mL人參皂苷Rb1對(duì)照品溶液1.0mL和濃度為11.230mg/mL人參皂苷Rb3對(duì)照品溶液1.0mL。制備供試品溶液，按上述色譜條件測定。實(shí)驗(yàn)結(jié)果見表1。

2.4 樣品分析

將不同產(chǎn)地三七花盤樣品粉碎（通過直徑為0.300mm篩），按照供試品溶液制備方法制備，測定人參皂苷Rb1、人參皂苷Rb3的峰面積并計(jì)算含量。結(jié)果見表2。

表2 不同產(chǎn)地人參皂苷Rb1和人參皂苷Rb3含量測定結(jié)果

3 討論

本研究曾以三七中指標(biāo)性成分三七皂苷R1、人參皂苷Rg1和人參皂苷Rb1為指標(biāo)性成分建立含量測定，但在實(shí)驗(yàn)中發(fā)現(xiàn)，三七花盤中幾乎不含三七中的指標(biāo)性成分三七皂苷R1及人參皂苷Rg1，人參皂苷Rb1和人參皂苷Rb3是三七花盤中含量較高兩種人參皂苷，可能也是主要的活性成分，與文獻(xiàn)報(bào)道三七花盤中主要含有人參皂苷Rb1、Rb3、Rc、Re，基本一致[9-10]，由于三七每年要留紅籽，而廢棄的花盤中皂苷含量較高，約為4%～5%，如果能加以利用，開發(fā)新的活性，具有一定的經(jīng)濟(jì)效益和社會(huì)效益[11-14]。為了能更好的控制三七花盤的質(zhì)量，本研究首次采用HPLC法對(duì)三七花盤中人參皂苷Rb1和人參皂苷Rb3進(jìn)行含量測定，為三七花盤質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)的建立打下堅(jiān)實(shí)的基礎(chǔ)。將需要進(jìn)一步對(duì)三七花盤藥理活性進(jìn)行研究，明確其應(yīng)用價(jià)值，填補(bǔ)本資源利用空白。

表1 回收率實(shí)驗(yàn)結(jié)果

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Content determination of ginsenoside Rb1 and ginsenoside Rb3 in flower disc of Panax notoginseng by HPLC

HE Yufang1ZHAO Yuwei1SI Xueling2LIU Chang2NAN Minlun1JIAO Lianqing1

1.Academy of Chinese Medical Sciences of Jilin Province,Changchun 130012,China;2.Xiuzheng Pharmaceutical Group Changchun High Tech Pharmaceutical Co.Ltd.,Changchun 130012,China

ObjectiveTo establish a high performance liquid chromatographic(HPLC)method for simultaneous detection of ginsenoside Rb1 and ginsenoside Rb3 in flower disc of Panax notoginseng.MethodsACE5 C18column (250mm×4.6mm,5μm)was used with a mixture of acetonitrile-0.05% phosphoric acid(32∶68,V:V)as the mobile phase.The flow rate was 1.0mL/min,the detection wavelength of 203nm,the column temperature of 25℃.ResultsThe linear range of ginsenoside Rb1 and ginsenoside Rb3 were 10.25～143.50mg/L(r=0.9993,n=7)and 10.94～153.16 mg/L (r=0.9997,n=7)respectively.The average recovery rates were 98.78% and 98.17%,respectively.ConclusionThe method is simple,accurate and sensitive with good reproducibility.It can provide references for resources development and be used for quality controlling of flower disc of Panax notoginseng.

Flower disc of Panax notoginseng;Ginsenoside Rb1;Ginsenoside Rb3;HPLC

R284

B

2095-0616（2015）05-42-03

2014-12-29）

吉林省科技發(fā)展計(jì)劃重大項(xiàng)目（20086042）。

▲通訊作者