兩種不同方法檢測肺炎鏈球菌的結果對比分析

張亞維 河南省安陽市第二人民醫院檢驗科 455000

社區獲得性肺炎是在院外由細菌、病毒、衣原體和支原體等多種微生物所引起的，主要臨床癥狀是咳嗽、伴或不伴咳痰和胸疼［1］。其發病的幾率呈逐年上升趨勢，已成為研究的熱點。相關研究報道，主要是由革蘭陽性菌所致，其中以肺炎鏈球菌最為常見，其陽性率占已知病原的40%～60%。明確引起肺炎的致病菌并選擇較為敏感的抗生素，是該病的基本治療原則，常規的診斷方法包括痰培養、血培養及呼吸道分泌物檢測［2］，但隨著抗生素的濫用，這些方法都存在著一些缺陷，其對肺炎鏈球菌的檢出率較低，目前臨床上迫切尋求一種方法，代替或補充傳統痰培養對肺炎鏈球菌進行診斷。本文選擇熒光定量PCR對社區獲得性肺炎患者肺炎鏈球菌進行檢測，取得了不錯的效果，現報道如下。

1 資料與方法

1.1 一般資料 選擇我院檢驗科2010年9月－2014年9月社區獲得性肺炎患者86例，男49例，女37例，年齡12～78歲，平均年齡46歲，所有患者均為首次患病，且未使用抗生素進行治療。均符合中華醫學會呼吸病學分會2006年《社區獲得性肺炎診斷和治療指南》制定的診斷標準。

1.2 方法 分別于入院后12h內收集患者痰液，采集呼吸道分泌物標本前均用生理鹽水漱口3次，指導患者咳出深部痰液，置于無菌痰盒里。對無法自然咳痰患者，給予霧化吸入誘導咳痰。合格痰標本留取1ml于滅菌離心管中（熒光定量PCR用），－80℃冰箱保存待檢，其余送做痰培養。采用半定量方法對痰液進行培養，＋＋＋區域的菌落診斷為感染；采用熒光定量PCR提取細菌DNA，菌落計數≥104cfu／ml認為有感染意義，菌落計數＜104cfu／ml的認為污染。所用儀器及試劑均由北京鼎國生物科技有限公司提供，并按照說明書進行操作。

1.3 統計學方法 數據采用SPSS18.0統計軟件進行分析，采用Fisher精確概率法痰培養陽性結果與熒光定量PCR檢測陽性結果進行檢驗，P＜0.05為差異有統計學意義。檢驗水準α＝0.05。

2 結果

痰培養方法檢測到肺炎鏈球菌感染例數為4例，檢出率為4.7%：熒光定量PCR檢測肺炎鏈球菌感染例數為26例，檢出率為30.2%。熒光定量PCR對社區獲得性肺炎患者的檢出例數顯著高于傳統痰培養，且差異有統計學意義 （P＜0.05）。見表1。

表1 患者治療前各項指標比較

3 討論

雖然傳統的痰培養廣泛應用于肺炎鏈球菌的檢測，但其缺乏較高的敏感度及特異度，所以仍存在較大爭議［3］。相關研究已經報道，TaqMan熒光定量PCR方法能特異地檢測和鑒定流感嗜血桿菌和肺炎鏈球菌，具有靈敏度高和快速檢測的特點，其為熒光定量PCR應用于肺炎鏈球菌的檢測提供了理論基礎。

由于血培養及痰培養在對呼吸道病原體的檢出敏感度較低，所以缺乏一個合適的金標準作為定量，CR界定感染與污染的參考，因此關于界定定量PCR結果陽性值的問題在許多研究中都被提出［4］。本文中，用SP起始模板DNA含量≥104cfu／ml為熒光定量PCR的陽性標準，為了排除假陽性，筆者在初始就采用肺炎鏈球菌特異度的 引 物 及 探 針［5］。

熒光定量PCR不僅對肺炎鏈球菌的檢出率較高，且其方便快速，能短期為臨床治療提供依據［6］。熒光定量PCR對多種樣本都有效，如胸腔積液、唾液等，有待于臨床拓展應用。但由于痰培養分離出的致病菌仍是藥敏實驗的基礎，并且能夠一次培養分離出多種致病菌，且熒光定量PCR花費較高，因此痰培養在臨床中的地位仍然重要。若是能將熒光定量PCR作為痰培養的補充并與之聯合應用，將大大提高病原體的檢出率和臨床治療效果。

總之，熒光定量PCR將為肺炎鏈球菌的檢測提供一種新的方法，值得臨床推廣應用。

［1］中華醫學會呼吸病學分會慢性阻塞性肺疾病學組.慢性阻塞性肺疾病診治指南（2007年修訂版）〔J〕.中華結核和呼吸雜志，2007，30（1）：8－17.

［2］中華醫學會呼吸病學分會慢性阻塞性肺疾病學組.慢性阻塞性肺疾病診治指南（2013年修訂版）〔J〕.中華結核和呼吸雜志，2013，36（4）：255－264.

［3］WHO.Pneumococcal conjugate vaccine for childhood immunization－WHO position paper〔J〕.Wkly Epidemiol Rec，2007，82（12）：93－104.

［4］Rudan I，Boschi－Pinto C，Biloglav Z，et al.Pidemiology and etiology of childhood pneumonia〔J〕.Bull World Health Organ，2008，86（5）：408－416.

［5］張育才，陸權.嚴重肺部感染的呼吸支持療法〔J〕.實用兒科臨床雜志，2009，24（4）：250－252.

［6］Mushy TF，Brauer AL，Sethi S，et al.Haemophilus haemolytic－US：a human respiratory tract commensal to be distinguished from Haemophilus influenzae〔J〕.J Infect Dis，2007，195（1）：81－89.