GC法測(cè)定丹皮酚軟膏中丁香酚和丹皮酚的含量

程慶兵　徐小梅

GC法測(cè)定丹皮酚軟膏中丁香酚和丹皮酚的含量

程慶兵1徐小梅2

【摘要】目的：目的：為丹皮酚軟膏建立含量測(cè)定方法。方法：采用GC法，DB-WAX色譜柱，長(zhǎng)30m，內(nèi)徑0.32mm，涂布厚度5μm，N2為載氣。結(jié)果：丹皮酚A=5.9078C-79.452，相關(guān)系數(shù)r=0.995；丁香酚A=6.2926C-1.3176，相關(guān)系數(shù)r=0.998，平均回收率為98.2%和98.5%（RSD=0.29%和0.28%，n=9）。結(jié)論：該方法準(zhǔn)確可靠，重現(xiàn)性好。可作為該制劑質(zhì)量控制的方法。

【關(guān)鍵詞】丁香酚丹皮酚氣相色譜法含量測(cè)定

丹皮酚軟膏由丹皮酚和丁香油兩種原料加入適宜的基質(zhì)制備而成的中藥外用制劑，具有消炎止癢作用，主要用于濕疹、皮炎、皮膚瘙癢、蚊臭蟲叮咬、紅腫等皮膚疾患，對(duì)過敏性鼻炎和防治感冒也有一定效果。本品質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)現(xiàn)收載于《衛(wèi)生部藥品標(biāo)準(zhǔn)》中藥成方制劑第十冊(cè)［1］，在上述標(biāo)準(zhǔn)中缺少對(duì)主成分的含量測(cè)定方法，不利于制劑的質(zhì)量控制。本文建立氣相色譜（GC）法測(cè)定制劑中丹皮酚的含量，該方法操作簡(jiǎn)便、準(zhǔn)確可靠，可用于控制該制劑質(zhì)量。

1　儀器與試藥

1.1儀器AgiLent 7890A氣相色譜儀FID檢測(cè)器；xp-205電子分析天平。

1.2試藥及試劑丹皮酚對(duì)照品（中國(guó)藥品生物制品檢定所；批號(hào)：100708-200506；含量為99.9%：）；丁香酚對(duì)照品（中國(guó)藥品生物制品檢定所；批號(hào)：110725-201112；含量為99.2%：）；丹皮酚軟膏（批號(hào)：20140506、20140602、20140604，合肥立方制藥有限公司）；甲醇為色譜純，其余試劑均為分析純。

2　方法

2.1色譜條件［2～4］色譜柱DB-WAX（30m×0.32mm× 0.50μm），柱溫：175℃，進(jìn)樣口溫度：200℃，檢測(cè)其溫度250℃，載氣為氮?dú)猓M(jìn)樣量為1μl，分流比2∶1；檢測(cè)器：氫火焰離子化檢測(cè)器；理論板數(shù)不低于10000。見圖1。高效液相色譜圖見圖2。

圖1

圖2　高效液相色譜圖

2.2樣品溶液的制備

2.2.1對(duì)照品溶液的制備精密稱取丹皮酚對(duì)照品（中檢院，含量為99.9%）25.09mg置10ml量瓶中，加甲醇溶解并稀釋至刻度，搖勻，作為丹皮酚對(duì)照品儲(chǔ)備液（2506μg/ml）；丁香酚對(duì)照品（中檢院，含量為99.2%）0.4298g置50ml量瓶中，加甲醇溶解并稀釋至刻度，搖勻，再精密量取2.5ml置100ml量瓶中，加甲醇溶解并稀釋至刻度，搖勻，作為丁香酚對(duì)照品儲(chǔ)備液（213.18μg/ml）。分別精密量取兩種儲(chǔ)備液各10ml置50ml量瓶中，加甲醇溶解并稀釋至刻度，搖勻，作為對(duì)照品使用液（501.2μg/ml、42.635μg/ml）。

2.2.2供試品溶液的制備取本品內(nèi)容物，精密稱取0.25g置燒杯中，加甲醇溶解轉(zhuǎn)移至50ml量瓶中，加甲醇稀釋至刻度，搖勻，濾過。取續(xù)濾液作為供試品溶液。

2.3線性關(guān)系考察取對(duì)照品使用液，精密量取1ml置10ml量瓶中，加甲醇稀釋至刻度，分別吸取1μl、2μl、4μl、5μl、6μl、7μl注入氣相色譜儀，進(jìn)行檢測(cè)，以濃度為橫坐標(biāo)，峰面積為縱坐標(biāo)繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線。并求得線形回歸方程：丹皮酚A=5.9078C -79.452，相關(guān)系數(shù)r=0.995；丁香酚A=6.2926C-1.3176，相關(guān)系數(shù)r=0.998。結(jié)果表明丹皮酚濃度在50.12～350.84μg/ml與峰面積積分值呈良好線性關(guān)系；丁香酚濃度在4.2635～29.845μg/ml范圍內(nèi)與峰面積積分值呈良好線性關(guān)系。見表1。

2.4重復(fù)性試驗(yàn)取兩種對(duì)照品貯備液，分別精密量取4ml置50ml量瓶中，加甲醇稀釋至刻度，按2.1色譜條件連續(xù)進(jìn)樣6次，測(cè)定丹皮酚和丁香酚峰面積A。重復(fù)性試驗(yàn)結(jié)果見表2。表明重復(fù)性良好。

2.5精密度試驗(yàn)取批號(hào)20140506的樣品，精密稱取0.25g，分別置6個(gè)置燒杯中，加甲醇溶解并轉(zhuǎn)移至50ml量瓶中，加甲醇稀釋至刻度，搖勻，濾過，取續(xù)濾液作為供試品溶液。按樣品測(cè)定項(xiàng)下方法測(cè)定，結(jié)果：丹皮酚的RSD值為0.10%，丁香酚的RSD值為0.26%，表明精密度良好，見表3。

表1　線性關(guān)系考察結(jié)果

表2　重復(fù)性試驗(yàn)結(jié)果

表3　精密度試驗(yàn)結(jié)果

2.6穩(wěn)定性試驗(yàn)取混合對(duì)照品使用液，于室溫下放置0、1、2、4、8小時(shí)后進(jìn)樣測(cè)定，按2.1色譜條件測(cè)定丹皮酚和丁香酚峰面積A，結(jié)果表明丹皮酚和丁香酚對(duì)照品溶液在8小時(shí)內(nèi)較穩(wěn)定。

2.7加樣回收率試驗(yàn)取批號(hào)20140506的樣品，研細(xì)，稱取9份，分別置9個(gè)燒杯中，加甲醇溶解并轉(zhuǎn)移至50ml量瓶中，加甲醇稀釋至刻度，搖勻，濾過，取續(xù)濾液作為供試品溶液。照含量測(cè)定項(xiàng)下方法測(cè)定上述9份供試品溶液的丹皮酚和丁香酚含量，考察加樣的回收率。結(jié)果：丹皮酚平均回收率為98.2%，RSD為0.29%（n=9），丁香酚平均回收率為98.5%，RSD為0.28%（n=9），表明本法測(cè)定丹皮酚和丁香酚的含量準(zhǔn)確性較高，結(jié)果見表4、5。

表4　回收率試驗(yàn)結(jié)果（丹皮酚）

表5　回收率試驗(yàn)結(jié)果（丁香酚）

2.8樣品中丹皮酚和丁香酚的含量測(cè)定取本品內(nèi)容物，精密稱取0.25g置燒杯中，加甲醇溶解并轉(zhuǎn)移至50ml量瓶中，加甲醇稀釋至刻度，搖勻，濾過，取續(xù)濾液作為供試品溶液。按2.1色譜條件測(cè)定丹皮酚和丁香酚的峰面積A，計(jì)算樣品中丹皮酚和丁香酚的含量，結(jié)果見表6。

表6　樣品含量測(cè)定結(jié)果

3　討論

通過試驗(yàn)，確定了丹皮酚軟膏的含量測(cè)定方法，測(cè)定結(jié)果可靠，方法簡(jiǎn)便，為丹皮酚軟膏的質(zhì)量控制提供了依據(jù)。比較了甲醇、乙醇、正己烷溶解的效果，結(jié)果乙醇溶解較差，正己烷提取不充分，選擇甲醇作為溶劑。采用GC法測(cè)定丹皮酚軟膏的含量與UV標(biāo)準(zhǔn)曲線法比較，操作方法簡(jiǎn)便、準(zhǔn)確、重現(xiàn)性好［5］。不同批號(hào)的丹皮酚軟膏的含量測(cè)定結(jié)果表明，丹皮酚和丁香酚的含量，精密度、穩(wěn)定性、重現(xiàn)性、加樣回收率都較好，所以，GC法可作為藥品質(zhì)量分析檢驗(yàn)方法用來有效控制丹皮酚軟膏的質(zhì)量。

本研究建立了GC法測(cè)定丹皮酚軟膏含量的方法，通過大量試驗(yàn)得出最優(yōu)的色譜條件。本法具有樣品處理簡(jiǎn)單、分析周期短、重現(xiàn)性好等優(yōu)點(diǎn)。可作為該制劑質(zhì)量控制的方法之一。

參考文獻(xiàn)

1衛(wèi)生部藥品標(biāo)準(zhǔn)中藥成方制劑第十冊(cè) ［S］.Z10～30.

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（/編審：劉文華）

2015-03-21收稿，2015-05-26修回

【中圖分類號(hào)】R286

【文獻(xiàn)標(biāo)識(shí)碼】A

【文章編號(hào)】1671-8054（2015）03-0073-03

作者單位：1.合肥市食品藥品檢驗(yàn)中心合肥238000 2.安徽中醫(yī)藥大學(xué)第一附屬醫(yī)院合肥230031

Content determination of Ozagrel Sodium for injection by HPLC method

1.Hefei food and Drug Inspection Center，Hefei 238000，Anhui 2.Anhui Provincial Hospital of traditional Chinese Medicine，Hefei 230031，Anhui
CHENG Qing-bing1，XU Xiao-mei2

Abstract：Objective：To establish a method for content determination of paeonol ointment.Methods：Using the method of GC，DB-idea for chromatographic column，30 m long，the inner diameter of 0.32 mm，the thickness of the coating 5 microns，N2 as carrier gas.Results：A=5.9078 C were-79.452，correlation coefficient r=0.995；Eugenol A=6.2926-1.3176 C，correlation coefficient r=0.998.the average recovery rate was 98.2%and 98.5%（RSD=0.29% and 0.28%，n=9）.Conclusion：the method is accurate and reliable，reproducible，which can be used as one of the methods for quality control of this preparation.

Key Words：Eugenol；Dan phenol；Gas chromatography；Content determination