燈盞花乙素含水類型及水分測定方法的研究*

王 珺，張 偉△，李之恒，2，楊兆祥

（1.昆藥集團股份有限公司藥物研究院，云南 昆明650100； 2.云南中醫學院藥學院，云南 昆明650500）

燈盞花素是從菊科植物短葶飛蓬Erigeron breviscapus（Vant.）Hand.-Mazz.的干燥全草中提取分離得到的黃酮類化合物，其主要成分為燈盞花乙素[1-2]?，F代藥理研究表明，燈盞花乙素具有增加腦血流量，改善微循環；抑制血小板凝集、促進纖溶活性、抗血栓形成等作用[2-6]。臨床上可用于治療腦供血不足、腦出血所致后遺癥、高粘脂血癥、腦血栓、冠心病、心絞痛等疾病[7-9]。

本文對燈盞花乙素原料藥的含水類型及水分測定方法進行了研究[10-15]。含量測定作為質量控制的關鍵指標，其一般以干燥品或無水物計，因此本文的研究內容對于弄清藥物性質，合理選擇其質控方法，科學制定質控限度具有指導意義。文章首先比較研究了3 種水分測定方法，結果表明燈盞花乙素可能含有結晶水，遂進行了含水類型及含結晶水個數的研究。

1 儀器與試藥

1.1 儀器

VD53 型真空干燥箱（BINDER）；CP225D 型分析電子天平（Sartorius）；XP205 型分析電子天平（METLER TOLIDO）；TitroLine KF 型卡式水分滴定儀（SCHOTT Instruments）；Empyrean 型X 射線粉末衍射分析儀（PANalytical）；Q500/Q5000 型熱重分析儀（TA）；Q2000 型差示掃描量熱儀（TA）；870 Titrino plus 型卡氏水分測定儀（Metohm）。

1.2 試藥

燈盞花乙素（昆藥集團股份有限公司藥物研究院 提 供， 批 號：20121026、20121029、20121030、20130521、20130527、20130529）；單組元無吡啶型卡爾費休試劑（分析純，天津市科密歐化學試劑有限公司，批號20120821）；HYDRANAL?-Composite 5 容量法單組元滴定劑（Fluka，批號SZBC1660V）。

2 方法與結果

2.1 水分測定方法研究

2.1.1 常溫減壓干燥法

取供試品約0.5g，精密稱定，置五氧化二磷干燥器中，在常溫（20～30℃）條件下，減壓干燥至恒重，計算減失重量[1]。

2.1.2 60℃恒溫減壓干燥法

取供試品約0.5g，精密稱定，置五氧化二磷干燥器中，在60℃恒溫條件下，減壓干燥至恒重，計算減失重量[16]。

2.1.3 卡氏水分（Karl Fischer Method，KF）

無水甲醇做溶劑，取供試品約50mg，精密稱定，完全溶解，用卡爾·費休試劑滴定，記錄滴定液體積。用水標定滴定度，計算水分[17]。

2.1.4 測定結果對比

3 批中試樣品測定結果見表1：

表1 水分測定方法研究測定結果對比

卡式水分和恒溫減壓測得的水分值遠高于常溫減壓，推測可能因前者測定吸附水和結晶水總和，而后者條件較溫和僅測定吸附水。

2.2 含水類型研究

2.2.1 含水類型推斷

聯合采用熱重分析（Thermogravimetric Analysis，TGA）、示差掃描量熱法（Differential Scanning Calorimetry，DSC）、卡氏水分滴定法（Karl Fischer Method，KF）推斷含水類型。測定參數分別為：TGA（樣品盤：鋁盤，敞開；溫度范圍：室溫～300 °C；掃描速率：10°C/min；保護氣體：氮氣）；DSC（樣品盤：鋁盤，壓蓋；其余均同TGA）；KF（溶劑：無水甲醇）。

TGA 和卡式水分測定結果（見表2）表明加熱情況下丟失的重量很可能來源于水。TGA 和DSC圖譜（見圖1）可見，60℃～200℃TGA 有一失重平臺，對應DSC 中吸熱峰，推斷為丟失結晶水產生。

表2 TGA 和卡式水分測定結果

圖1 TGA 和DSC 圖譜

2.2.2 含結晶水的確證

在氮氣保護下，對供試品在不同溫度下進行XRPD 表征測定。

溫度控制XRPD 測定參數（X 射線Cu，Kα，Kα1：1.540598?、Kα2：1.544426?，Kα2/Kα1 強度比例：0.50；X 射線光管設定：45 kV，40 mA；發散狹縫：自動；單色器：無；掃描模式：連續；掃描范圍（°2Theta）3° ～ 40°；掃描步長（°2Theta）0.013；掃描時間：約4 min）

結果顯示升溫至50 °C 時未發生晶型變化，升溫至150 °C 形成新的晶型，且該晶型在降溫過程中進一步發生轉變（見圖2）；降至室溫，暴露在實驗室濕度二十分鐘后，回到初始晶型（見圖3）。晶型變化可能由脫去結晶水所致，因此推測供試品中含有結晶水，并且二水合物脫水后，在室溫條件下不穩定，極易吸水重新轉變回二水合物。

圖2 升溫和降溫過程中的XRPD 圖譜

圖3 原始樣品和降溫放置后樣品XRPD 圖譜對比

2.2.3 含結晶水個數測定

恒溫TGA 實驗參數（溫度范圍：室溫～250°C；重量變化速率：開始0.23%/min、停止0.01%/min；其余同TGA）。

結果見圖4，樣品分兩步失水，低溫脫去吸附水，高溫脫去結晶水。3 批樣品測定結果見表3，結晶水含量為7.21%；模擬計算燈盞花乙素含不同數量結晶水的理論結晶水含量見表4。對比可見供試品應為二水合物。

圖4 恒溫TGA 圖譜

表3 3 批中試樣品恒溫TGA 測定結果

表4 結晶水個數和理論含量計算

3 討論

由DSC 結果可見，升溫至60℃即開始丟失結晶水，可印證60℃恒溫減壓干燥條件下結晶水已失去。60℃恒溫減壓干燥法測定的是結晶水和吸附水的總和，但該法測定效率低?？ㄊ剿值味ǚㄗ鳛樗譁y定的首選方法[18]，考慮到測定效率及成本，對于該品種優選該方法。

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