燮理糖腎顆粒降糖作用的實(shí)驗(yàn)研究

趙 蓬，指導(dǎo):張柏林

(天津市第一醫(yī)院中醫(yī)科，張柏林名中醫(yī)工作室，天津300232)

2型糖尿病是由遺傳因素和環(huán)境因素共同作用導(dǎo)致的慢性、進(jìn)展性疾病。研究顯示，高血糖毒性作用是心血管疾病的獨(dú)立危險(xiǎn)因素，隨著疾病的進(jìn)展，患者微血管和大血管并發(fā)癥風(fēng)險(xiǎn)都相應(yīng)增加，是中、老年致殘、致死不可忽視的原因。臨床研究［1-2］認(rèn)為，糖尿病是冠心病的急危癥，冠心病是2型糖尿病主要死亡原因之一，糖尿病患者80%死于心血管事件，心肌梗死更是糖尿病患者死亡的主要原因，急性心肌梗死中糖尿病患者達(dá)20%以上。本研究以中醫(yī)腎主藏經(jīng)瀉濁理論為基礎(chǔ)，配制燮理糖腎顆粒，觀察該方藥的降糖效果。

1 材料與方法

1.1 動(dòng)物 自發(fā)性糖尿病KKAy小鼠、C57BL/6小鼠:均由北京華阜康生物科技股份有限公司提供〔許可證編號(hào):SCXK(京)2009-004〕;Wibtat種大鼠、昆明種小鼠:均由天津藥物研究院動(dòng)物實(shí)驗(yàn)室提供(合格證號(hào):津?qū)崉?dòng)質(zhì)R字第001號(hào))。

1.2 藥物

1.2.1 燮理糖腎顆粒 源于全國(guó)名老中醫(yī)張柏林教授多年來(lái)治療糖尿病腎病的經(jīng)驗(yàn)方，采用廣東一方制藥有限公司提供的顆粒制劑，組方為淫羊藿20 g，熟地黃 10 g，黃柏 10 g，知母10 g，澤瀉10 g，黃連10 g，丹參20 g，益母草20 g。

1.2.2 鹽酸二甲雙胍 天津中新藥業(yè)集團(tuán)有限公司(批號(hào):D3813004);四氧嘧啶，Sigma產(chǎn)品(批號(hào):122H33211)，臨用前用生理鹽水配成2%的液體;鹽酸苯乙雙胍，浙江亞太藥業(yè)股份有限公司(批號(hào):031101);優(yōu)降糖(格列本脲片)，天津力生制藥股份有限公司(批號(hào):0309019)。

1.3 試劑及儀器 血糖試紙:ARKRAY，F(xiàn)actoryic生產(chǎn)(批號(hào):9B5B4S);日本京都血糖儀:日本ARKRAY，inc株式會(huì)社產(chǎn)品。

1.4 模型方法

1.4.1 對(duì)自發(fā)性糖尿病KKAy小鼠血糖的影響 選用健康雄性KKAy小鼠，體質(zhì)量25～35 g，非進(jìn)食狀態(tài)取血測(cè)血糖，選取血糖值在14.5～28.3 mmol/L區(qū)間的小鼠，按血糖高低，隨機(jī)均衡分為模型對(duì)照組，燮理糖腎顆粒4、8、16 g生藥/kg劑量組，鹽酸二甲雙胍260 mg/kg，每組12只，另用10只C57BL/6小鼠做正常對(duì)照組，灌胃給藥，給藥容積為20 mL/kg，正常及模型對(duì)照組給予等容量0.5%羧甲基纖維素鈉(CMC-Na)，同時(shí)喂KKAy小鼠高糖高脂飼料，喂食C57BL/6小鼠正常飼料，每周尾靜脈采血用血糖試紙測(cè)定血糖(給藥后1 h)1次，連續(xù)4周。

1.4.2 對(duì)四氧嘧啶致大鼠高血糖的影響 選用健康Wibtat種大鼠，體質(zhì)量180～220 g，雌雄兼用，禁食不禁水18 h后，尾靜脈注射2%四氧嘧啶50 mg/kg，72 h后禁食4 h，眼眶取血測(cè)血糖，選取血糖值＞11 mmol/L的大鼠，隨機(jī)分為模型對(duì)照組，燮理糖腎顆粒4、8、16 g生藥/kg劑量組，鹽酸苯乙雙胍50 mg/kg組，每組10只(雌性4只，雄性6只)，另取正常大鼠做為正常對(duì)照組。灌胃給藥，1次/d，連續(xù)2周，灌胃容積均為10 mL/kg，正常及模型對(duì)照組給予等劑量0.5%CMC-Na，分別于給藥后第1、2周測(cè)定禁食4 h后的大鼠血糖［3］。

1.4.3 對(duì)四氧嘧啶致小鼠高血糖的影響 選用健康昆明種小鼠，體質(zhì)量20～22 g，雌雄兼用，禁食不禁水18 h后，尾靜脈注射2%四氧嘧啶60 mg/kg，72 h后禁食4 h，眼眶取血測(cè)定血糖，選血糖值＞11 mmol/L的小鼠，隨機(jī)分為模型對(duì)照組，燮理糖腎顆粒4、8、16 g生藥/kg劑量組，鹽酸苯乙雙胍100 mg/kg組，每組12只，雌雄各半，另取10只正常小鼠做為正常對(duì)照組。灌胃給藥，1次/d，連續(xù)1周，灌胃容積均為20 mL/kg，正常及模型對(duì)照組均灌胃給予等容量0.5%CMC-Na，末次給藥后測(cè)定大鼠血糖［3］。

1.4.4 對(duì)正常大鼠血糖的影響 選用健康Wibter種大鼠，體質(zhì)量180～220 g，雌雄各半，禁食4 h后，眼眶取血測(cè)血糖，根據(jù)血糖值，隨機(jī)分為正常對(duì)照組，燮理糖腎顆粒4、8、16 g生藥/kg劑量組，優(yōu)降糖50 mg/kg組，每組10只，雌雄各半。灌胃給藥，1次/d，連續(xù)2周，灌胃容積為10 mL/kg，正常對(duì)照組給予等容量0.5%CMC-Na，分別于末次給藥后4 h測(cè)定血糖。

1.5 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法 采用SPSS 13.0軟件，實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)以均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差(±s)表示，2組數(shù)據(jù)比較采用t值法，有等級(jí)關(guān)系的采用等級(jí)序值法，P＜0.05為有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 實(shí)驗(yàn)結(jié)果

2.1 對(duì)自發(fā)性糖尿病KKAy小鼠血糖的影響 見(jiàn)表1。

2.2 對(duì)四氧嘧啶致高血糖大鼠血糖的影響 見(jiàn)表2。

2.3 對(duì)四氧嘧啶致小鼠高血糖的影響 見(jiàn)表3。

2.4 對(duì)正常大鼠血糖的影響 見(jiàn)表4。

表1 對(duì)自發(fā)性糖尿病KKAy小鼠血糖的影響(±s)mmol/L

表1 對(duì)自發(fā)性糖尿病KKAy小鼠血糖的影響(±s)mmol/L

注:與正常組比較，##P ＜0．01;與模型組比較，△P ＜0．05，△△P ＜0．01

組 別 劑量/(g生藥/kg) n 給藥前 給藥1周 給藥2周 給藥3周 給藥4周正常組 — 10 5．82 ±0．46 6．00±0．57 6．21±0．45 6．09±0．42 6．25 ±0．42模型組 — 12 20．79±4．01## 21．58 ±3．89## 22．18±3．84## 22．58±4．10## 22．97±3．80##燮理糖腎組 4 12 20．92 ±4．17 20．46 ±3．85 19．94 ±4．04 19．59 ±4．21 19．33 ±5．12燮理糖腎組 8 12 20．83 ±4．11 19．88 ±4．06 19．09 ±3．74 17．98 ±3．95△ 16．53 ±3．48△△燮理糖腎組 16 12 20．88 ±4．15 19．01 ±4．48 17．94 ±4．15△△ 16．38 ±4．23△△ 15．56 ±3．64△△二甲雙胍組 0．26 12 20．94 ±4．14 20．00 ±3．46 17．80 ±3．61△△ 16．79 ±3．49△△ 15．40 ±3．05△△

表2 對(duì)四氧嘧啶致大鼠高血糖的影響(±s，n=10)mmol/L

表2 對(duì)四氧嘧啶致大鼠高血糖的影響(±s，n=10)mmol/L

注:與正常組比較，##P ＜0．01;與模型組比較，△△P ＜0．01

組 別 劑量/(g生藥/kg) 給藥前 給藥1周 給藥2周正常組 — 5．88±0．61 6．00±1．08 6．58 ±0．59模型組 — 22．61±2．82## 20．31±1．83## 20．08 ±2．50##燮理糖腎組 4 22．21 ±2．81 16．47 ±5．77 16．50 ±4．98燮理糖腎組 8 22．69 ±2．58 17．54 ±3．81 13．75 ±4．92△△燮理糖腎組 16 22．78±2．01 16．08±3．79△△ 12．18±2．93△△苯乙雙胍組 0．05 22．44±4．19 11．74±4．86△△ 10．93±3．63△△

表3 對(duì)四氧嘧啶致高血糖小鼠血糖的影響(±s)mmol/L

表3 對(duì)四氧嘧啶致高血糖小鼠血糖的影響(±s)mmol/L

注:與正常組比較，##P ＜0．01，與模型組比較，△P ＜0．05，△△P ＜0．01

組 別 劑量/(g生藥/kg) n 給藥前 給藥1周正常組 — 10 6．43±1．33 6．95±1．25模型組 — 12 18．97±5．07 16．46±4．38##燮理糖腎組 4 12 18．84 ±5．49 13．02 ±3．93燮理糖腎組 8 12 19．26 ±5．11 11．87 ±3．50△燮理糖腎組 1 6 12 19．06 ±4．96 11．55 ±2．78△苯乙雙胍組 0.10 12 19．03 ±5．24 10．01 ±2．45△△

表4 對(duì)正常大鼠血糖的影響(±s，n=10)mmol/L

表4 對(duì)正常大鼠血糖的影響(±s，n=10)mmol/L

注:與正常組比較，##P ＜0．01

組 別 劑量/(g生藥/kg) 給藥前 給藥1周 給藥2周正常組組 — 6．18±0．54 6．20±0．50 6．49±0．67燮理糖腎組 4 6．35 ±0．55 6．44 ±0．61 6．58 ±0．71燮理糖腎組 8 6．46 ±0．60 6．37 ±0．61 6．59 ±0．71燮理糖腎組 16 6．32 ±0．57 6．57 ±0．59 6．65 ±0．62優(yōu)降糖組 0．05 6．43 ±0．70 4．38 ±0．77## 4．55 ±0．70##

3 討論

慢性持續(xù)性高血糖造成的糖毒性可使糖尿病并發(fā)癥風(fēng)險(xiǎn)增高，包括大血管及微血管病變［4］，糖尿病與早期心血管疾病間的關(guān)系也得到確認(rèn)［5］，降糖是減少糖尿病患者心血管并發(fā)癥的重要前提。本實(shí)驗(yàn)顯示，燮理糖腎顆粒各劑量組對(duì)自發(fā)性糖尿病KKAy小鼠、四氧嘧啶致大鼠、小鼠的高血糖有明顯的降低作用;并呈現(xiàn)出劑量、時(shí)間依賴性，提示燮理糖腎顆粒具有良好的降糖治療效果。同時(shí)，對(duì)正常大鼠的血糖無(wú)明顯影響。

歷代醫(yī)家多以為消渴病的發(fā)生與陰虛密切相關(guān)，多年來(lái)滋補(bǔ)陰液一直是治療的重要法則。筆者通過(guò)臨床觀察認(rèn)為，陽(yáng)氣不足在消渴病的發(fā)生發(fā)展中同樣發(fā)揮了重要作用，臨床中統(tǒng)計(jì)氣陰兩虛和陰陽(yáng)俱虛型患者占92.74%［6］。消渴總因稟賦不足，或過(guò)食肥甘厚味，情志失調(diào)，勞逸失度，日久化成痰、濁、熱、瘀，以氣陰兩虛為本，濁毒內(nèi)停為標(biāo)，病程遷延發(fā)展，至終末期的心、脾、腎俱衰，濁毒肆虐，毒損腎絡(luò)，病情危篤［7-9］，故在治療上要陰陽(yáng)虛實(shí)并重。

中醫(yī)認(rèn)為，腎的主要功能是藏精和瀉濁，柯琴云“精者，屬癸，陰水也，靜而不走，為腎之體;溺者，屬壬，陽(yáng)水也，動(dòng)而不居，為腎之用。是以腎主五液，若陰水不守，則真水不足;陽(yáng)水不流，則水邪逆行。”所以，藏精與瀉濁是“一陰一陽(yáng)，天地之道;一開(kāi)一合，動(dòng)靜之機(jī)”(清·羅美《古今名醫(yī)方論》)在腎的具體體現(xiàn)。血糖本是水谷精微，是人體化生氣血津液的物質(zhì)基礎(chǔ)，藏于腎則為精，而使人有生長(zhǎng)壯老已的生命現(xiàn)象。但是，如果血糖過(guò)高則為浸淫人體的致病之邪，其道理有如《金匱要略·臟腑經(jīng)絡(luò)先后病脈證第一》所言:“風(fēng)氣雖能生萬(wàn)物，亦能害萬(wàn)物，如水能行舟，亦能覆舟。”和則化，乖則變，變則眚［10］。血糖超過(guò)了腎糖閾則從尿中排出而出現(xiàn)尿糖，2型糖尿病隨著病程的發(fā)展，腎失封藏，精微下瀉，腎臟的“藏精瀉濁”功能受損。“濁陰出下竅”，排出的尿糖，尿蛋白則為病理的敗濁之氣。中醫(yī)治療強(qiáng)調(diào)因勢(shì)利導(dǎo)，要取邪氣易于祛除之法，使邪有出路［11］。

近年來(lái)，鈉-葡萄糖協(xié)同共轉(zhuǎn)體(SGLTs)的發(fā)現(xiàn)及其抑制劑的應(yīng)用，強(qiáng)調(diào)了腎臟在糖代謝中的重要作用。SGLTs參與轉(zhuǎn)運(yùn)葡萄糖，SGLT1主要在胃腸表達(dá)，完成葡萄糖吸收;SGLT2在腎近曲小管SI段表達(dá)，以鈉-葡萄糖1∶1比率轉(zhuǎn)運(yùn)葡萄糖，介導(dǎo)了90%腎小球?yàn)V過(guò)葡萄糖的重吸收，促進(jìn)腎小管上皮細(xì)胞SGLT 對(duì)葡萄糖轉(zhuǎn)運(yùn)［12-13］。研究［14］表明，選擇性抑制SGLT2減少葡萄糖的重吸收，增加尿糖排泄，有助于糖尿病的血糖控制。SGLTs抑制劑抑制了近端腎小管對(duì)糖的重吸收，降低血糖，為中醫(yī)從腎論治糖尿病提供了現(xiàn)代醫(yī)學(xué)依據(jù)。補(bǔ)腎即補(bǔ)益腎元，泄?jié)峒赐ǜ節(jié)幔尾≌咂街斡跈?quán)衡，補(bǔ)腎泄?jié)峒词窃谔搶?shí)之間探求平衡之態(tài)［15］，補(bǔ)腎泄?jié)岱苊黠@改善腎功能指標(biāo)［16］，以循證醫(yī)學(xué)Meta分析為依據(jù)，有改善整體臨床癥候和降低血尿素氮和血肌酐的良好作用［17-18］。

消渴之疾，治一則偏，陰陽(yáng)兼調(diào)則全［19］。張柏林主任針對(duì)其虛實(shí)并見(jiàn)、氣陰兩虛、瘀阻腎絡(luò)的特點(diǎn)，以補(bǔ)腎泄?jié)釣橹委煼▌t，從中醫(yī)“腎藏精、瀉濁”理論出發(fā)，配制燮理糖腎顆粒。該方以淫羊藿配合熟地黃為君，益陰養(yǎng)血與補(bǔ)氣溫陽(yáng)兩法合用，填補(bǔ)腎精、補(bǔ)腎益陰;知母、澤瀉、黃柏、黃連等為臣以清熱泄?jié)幔瑵?rùn)燥堅(jiān)因;因血瘀貫穿于糖尿病的始終，丹參活血祛瘀，益母草活血行水，故選丹參和益母草相配疏瘀泄?jié)釣樽簟Ｈ教搶?shí)兼顧、標(biāo)本兼治，使腎精得固，瘀濁得去。本實(shí)驗(yàn)證實(shí)了燮理糖腎顆粒各劑量組對(duì)不同造模的糖尿病鼠有明顯的降低血糖的作用，但對(duì)正常大鼠的血糖無(wú)明顯影響，有助于2型糖尿病的治療。本實(shí)驗(yàn)為今后進(jìn)一步研究補(bǔ)腎泄?jié)岱ㄖ委熖悄虿〉呐R床應(yīng)用提供了實(shí)驗(yàn)依據(jù)。

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