ApoC-Ⅲ啟動子C-482T和T-455C單核苷酸多態性與2型糖尿病的相關性探析

張　華　刁玉荃　邢　卿

ApoC-Ⅲ啟動子C-482T和T-455C單核苷酸多態性與2型糖尿病的相關性探析

張華①刁玉荃①邢卿①

目的：分析探究2型糖尿病與ApoC-Ⅲ啟動子C-482T和T-455C單核苷酸多態性的相關性。方法：選擇2012年9月-2014年9月在本院接受治療的50例2型糖尿病患者作為試驗組，并選取同期50例接受健康體檢的正常人作為對照組，分別檢測兩組ApoC-Ⅲ啟動子C-482T和T-455C單核苷酸多態性，對比分析兩組C-482T、T-455C基因型與等位基因之間的頻率情況及T-455C與C-482T各基因型間ApoC-Ⅲ的濃度情況。結果：兩組C-482T、T-455C等位基因C含量與T含量比較差異均無統計學意義（P＞0.05）。試驗組T-455C與C-482T各基因型的ApoC-Ⅲ濃度與對照組比較差異無統計學意義（P＞0.05）。對照組-482TT基因型的ApoC-Ⅲ濃度高于其-482CT基因型的ApoC-Ⅲ濃度，比較差異有統計學意義（P＜0.05）。結論：2型糖尿病的發病與ApoC-Ⅲ啟動子C-482T和T-455C單核苷酸多態性之間并不存在相關性，但健康人體內的C-482T多態性與其血清ApoC-Ⅲ水平的變化之間存在一定的聯系。

ApoC-Ⅲ啟動子C-482T； T-455C單核苷酸多態性； 2型糖尿病

First-author's address：Qingdao Municipal Hospital，Qingdao 266011，China

doi：10.3969/j.issn.1674-4985.2015.27.002

糖尿病近年來嚴重影響著患者的健康水平，作為臨床上一種常見的內分泌系統疾病，給患者的身體和心理都帶來很大的影響。其中，2型糖尿病屬于后天獲得性糖尿病，與先天性糖尿病有根本差異［1-2］。胰島素的分泌異常是2型糖尿病主要的發病機制，最終造成血糖調節過程中的異常，該病患者發病特點可分為兩種，一是胰島素抵抗，具體表現為胰島素利用率降低；二是胰島素分泌不足。根據不同發病特點，選擇不同的治療方法，以恢復患者健康［3］。糖尿病若得不到有效治療，很可能發展惡化，最終導致腎功能衰竭，嚴重影響糖尿病患者的生活質量和身心健康。因此，本院為進一步對2型糖尿病與ApoC-Ⅲ啟動子C-482T 及T-455C單核苷酸多態性的相關性進行研究與分析，特選取50例患有該病患者的資料，研究后做出如下報告。

1　資料與方法

1.1一般資料選取2012年9月-2014年9月在本院接受治療的50例2型糖尿病患者作為試驗組，并選取在此期間接受常規體檢者50例作為對照組。試驗組中男23例，女27例，年齡36～65歲，平均（44±2.5）歲，病程5～7年，平均（6±0.5）年，BMI19.3～28.4kg/m2，平均（22.3±2.6）kg/m2，其中伴有高脂血癥6例，合并高血壓病9例，存在視網膜病變10例，糖尿病周圍神經病變5例，脂肪肝10例，雙側頸動脈輕度硬化5例，糖尿病合并其他病癥5例；對照組中男25例，女25例，年齡34～68歲，平均（45±1.9）歲，BMI 19.1～27.6 kg/m2，平均（22.1±1.9）kg/m2，體檢正常，排除糖尿病等疾患。糖尿病患者的納入標準：符合糖尿病的西醫診斷標準；符合糖尿病周圍神經病變的中醫證型診斷標準，且符合1999年世界衛生組織WHO關于糖尿病的診斷標準，在研究期間不離開醫院且精神狀況良好，能夠配合研究且獨立完成各項檢查［4］。排除標準：不符合上述的兩種標準；患者的相關病歷資料不夠齊全；排除由其他病癥引發的周圍神經病變而發生的血淤癥；本研究的相關人員認為患者有不符合入組的情況，在治療期間可能外出或離家，精神狀態出現異常，在半年內進行化學藥物治療［5］。兩組患者均簽署研究知情同意書，兩組一般資料比較差異均無統計學意義（P＞0.05）。

1.2方法 對兩組患者體內的ApoC-Ⅲ啟動子C-482T及T-455C單核苷酸多態性進行檢測的方法主要是通過多態性分析，其主要為：（1）將DNA從患者的基因組中提取出來，采集患者的外周靜脈血液標本并進行抗凝處理，將有核細胞從血標本中提取后，用相應蛋白酶溶解后得到基因組DNA，將其溶解到一定量的TE緩沖液中，且將DNA的濃度調整到50 ng/μL，保存后以作備用。（2）對核酸中的序列進行擴增，將DNA序列由上海生物工程有限公司進行純化或合成。（3）對DNA進行酶切與電泳分離，用限制酶在所需基因的位點處進行分離與切割，并使用電泳的方式將所需的基因碎片進行分離，得到確切的基因部分。

1.3觀察指標 記錄分析兩組患者的C-482T及T-455C基因型與等位基因之間的頻率情況及兩組患者的T-455C與C-482T各基因型間的ApoC-Ⅲ的濃度情況。1.4 統計學處理 采用SPSS 17.0軟件對所的數據進行分析，計量資料以（x-±s）表示，比較采用t檢驗，計數資料以率（%）表示，比較采用 χ2檢驗，以P＜0.05表示差異有統計學意義。

2　結果

2.1兩組C-482T基因型與等位基因之間的頻率情況比較 兩組等位基因C含量與T含量比較差異均無統計學意義（P＞0.05），見表1。

2.2兩組T-455C基因型與等位基因之間的頻率情況比較 兩組等位基因C含量與T含量比較差異均無統計學意義（P＞0.05），見表2。

表2　兩組患者T-455C基因型與等位基因之間的頻率情況比較　　　　　　　　　例（%）

2.3兩組T-455C與C-482T各基因型間的ApoC-Ⅲ濃度情況比較 兩組T-455C各基因型間的ApoC-Ⅲ濃度比較差異均無統計學意義（P＞0.05）。試驗組T-455C 與C-482T各基因型間的ApoC-Ⅲ濃度與對照組比較差異無統計學意義（P＞0.05）。對照組-482TT基因型的ApoC-Ⅲ的濃度高于其-482CT基因型的ApoC-Ⅲ濃度，比較差異有統計學意義（P＜0.05），見表3。

表1　兩組C-482T基因型與等位基因之間的頻率情況比較 例（%）

表3　兩組T-455C與C-482T各基因型間的ApoC-Ⅲ濃度比較（±s） 　　mg/dL

表3　兩組T-455C與C-482T各基因型間的ApoC-Ⅲ濃度比較（±s） 　　mg/dL

C-482T組別T-455C -455TT-455TC-455CC-482CT-482TT-482CC對照組（n=50）10.23±2.399.37±3.1210.01±4.118.42±3.1910.48±4.219.45±2.13試驗組（n=50）10.59±6.4310.89±5.7910.23±6.019.23±7.8210.37±4.329.56±1.94

3　討論

2型糖尿病是一種后天糖尿病類型，胰島素的分泌異常是其主要的發病機制，最終造成血糖調節過程中的異常，近年來，有資料顯示2型糖尿病患者內臟型肥胖與胰島素抵抗存在一定的相關性［6-7］。2型糖尿病原名是成人發病性糖尿病，患者體內產生胰島素的功能完全喪失。該疾病是以高血糖為主要特征的代謝性疾病，多飲、多食、多尿、消瘦等是其主要臨床表現［8-11］。近幾年來，2型糖尿病的發病率逐年攀升，已經成為危害人們健康的首要疾病，這與人口老齡化的發展趨勢和人們不良的飲食生活習慣有極大的關系［12-13］。該病嚴重影響患者的健康水平，是臨床上一種常見的內分泌系統疾病，以中老年人群居多，給患者的身體和心理帶來很大的影響。大多數患者由于對疾病缺少正確的認知，心里有恐慌、張緊等不良情緒，會出現情緒低落或自暴自棄的情況，對治療不抱有希望，因此，全面認識2型糖尿病的臨床相關評估對早期診斷并治療有重要意義。

該研究結果中表明，2型糖尿病患者體內的ApoC-Ⅲ啟動子C-482T與T-455C等位基因C、T與正常人之間并沒有較為明顯的差異，即兩種物質的基因的含量并不能夠證明其與2型糖尿病發病之間的關系。臨床上對于ApoC-Ⅲ對2型糖尿病患者的影響已經存在較多的研究，并且經過多個試驗與研究表明，血清的高密度脂蛋白中含有ApoC-Ⅲ物質，該物質是關于機體代謝疾病綜合癥的一種相對較為獨立的危險因子，并且該物質與2型糖尿病患者的發病之間存在著密切的聯系。經過相應報道證實，ApoC-Ⅲ在患者的血清中含量增加時，能夠促進患者胰島細胞的快速凋亡，故而，降低患者體內的ApoC-Ⅲ含量，不僅能夠改善患者胰島細胞的部分功能，還可以預防2型糖尿病的發生［14］。但臨床上對于ApoC-Ⅲ如何引起胰島細胞的快速凋亡并沒有明確的解釋，因此，本研究中對ApoC-Ⅲ中的兩種主要物質T-455C單核苷酸多態性及Ⅲ啟動子C-482T的含量與2型糖尿病的發病之間的關系進行研究，以便于確定ApoC-Ⅲ中主要影響2型糖尿病發生的因素，并針對該物質進行進一步的準確監測與疾病的預防，但本研究中的結果顯示，T-455C單核苷酸多態性、Ⅲ啟動子C-482T兩種物質與2型糖尿病之間沒有確切的聯系，故而臨床上需對發病的因素進行進一步的研究［15］。

與此同時，對兩組研究對象進行基因型檢測后，兩組T-455C與C-482T各基因型間的ApoC-Ⅲ濃度比較差異均無統計學意義（P＞0.05）。該結果證明2型糖尿病患者發病的主要原因與這兩種物質之間沒有聯系。然而，對照組-482TT基因型的ApoC-Ⅲ的濃度高于其-482CT基因型的ApoC-Ⅲ濃度，比較差異有統計學意義（P＜0.05），可以根據兩種基因的序列檢測準確的監視正常人體內的ApoC-Ⅲ血清變化情況，確保其能夠在出現異常情況的早期得到及時且有效的檢測，具有重要的臨床作用。

在ApoC-Ⅲ基因中，其啟動因子的區域中有胰島素反應元件的存在，并且胰島素能夠將ApoC-Ⅲ基因中的表達過程進行下調，從而發揮其控制血糖的作用，并且如果該基因出現突變，則導致胰島素的降糖作用減弱甚至消失，本研究中的T-455C與C-482T兩個基因的突變位點便位于胰島素反應元件當中。臨床上，對于糖尿病等代謝綜合征的發病原因主要是胰島素的功能抵抗，并且，目前在我國，隨著醫學技術水平的不斷發展，已出現對于T-455C與C-482T兩個基因位點的研究，但結果均是兩種物質單獨出現時與2型糖尿病的發病之間并沒有突出的關系，即不存在明顯的作用，故而，臨床上應加大對此方面的研究，以便于提高2型糖尿病患者的臨床治療效果，改善患者的生活質量，增加患者對臨床治療效果的滿意程度，具有十分重要的臨床意義。

綜上所述，ApoC-Ⅲ啟動子C-482T及T-455C單核苷酸多態性與2型糖尿病的發病過程之間沒有較為明顯的相關性，但健康人ApoC-Ⅲ血清水平與體內的C-482T多態性的變化之間有一定的聯系。

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Exploration of the Relationship between Single Nucleotide Polymorphisms of ApoC-Ⅲ Promoter C-482T，T-455C and Type 2 Diabetes/

Z HANG Hua，DIAO Y u-quan，XING Qing.//Medical Innovation of China，2015，12（27）：006-009

Objective：To analyze and explore the relationship between single nucleotide polymorphisms of ApoC-Ⅲ promoter C-482T，T-455C and type 2 diabetes.Method：50 patients with type 2 diabetes who accepted treatment in our hospital from September 2012 to September 2014 were selected as the test group，50 health people who accepted health examination at the same time were selected as the control group.The single nucleotide polymorphisms（SNPs） of C-482T and T-455C of the two groups were detected.The frequency of genotype and allele of C-482T and T-455C in the two groups，the concentration of ApoC-Ⅲ in different genotypes of C-482T and T-455C were analyzed and compared. Result：The differences in the content of C，T in C-482T and T-455C of the two groups were not statistically significant （P＞0.05）.The differences in concentrations of ApoC-Ⅲ in different genotypes of C-482T and T-455C of the two groups were not statistically significant（P＞0.05）.In the control group，the concentration of ApoC-Ⅲ in genotype of -482TT was higher than that in genotype of -482CT，the difference was statistically significant（P＜0.05）.Conclusion：There is no relationship between single nucleotide polymorphisms of ApoC-Ⅲ promoter C-482T，T-455C and type 2 diabetes.But in the health people，the polymorphism of C-482T has a relationship with the level of serum ApoC-Ⅲ.

ApoC-Ⅲ promoter C-482T； Single nucleotide polymorphism of T-455C； Type 2 diabetes

①山東省青島市市立醫院 山東 青島 266011

張華

（2015-03-09） （本文編輯：王利）