間充質(zhì)干細(xì)胞移植減輕大鼠肺氣腫及氧化應(yīng)激的探討

金志賢，畢虹，周開(kāi)華，杜俊毅，陳敏，王清△，潘興華

間充質(zhì)干細(xì)胞移植減輕大鼠肺氣腫及氧化應(yīng)激的探討

金志賢1，畢虹1，周開(kāi)華1，杜俊毅1，陳敏1，王清1△，潘興華2△

目的研究間充質(zhì)干細(xì)胞（MSCs）移植在肺氣腫大鼠氧化應(yīng)激和肺氣腫發(fā)展過(guò)程中的作用。方法26只雌性SD大鼠隨機(jī)分為對(duì)照組（A組，n=8），肺氣腫組（B組，n=8），肺氣腫+MSCs移植組（C組，n=10），將B與C組大鼠在香煙煙霧中暴露14周，制作肺氣腫大鼠模型，C組大鼠予MSCs移植。完成4次MSCs移植后的2、4周分別處死C組大鼠各1只，觀察MSCs在肺氣腫大鼠肺部的定植情況；MSCs移植8周后同時(shí)處死各組大鼠，觀察大鼠肺組織病理形態(tài)，并進(jìn)行定量分析；用硫代戊巴比妥法測(cè)定血清和肺組織勻漿中丙二醛（MDA）的水平，用WST-1法測(cè)定各組血清和肺組織勻漿中超氧化物歧化酶（SOD）的水平。結(jié)果MSCs移植后2周及4周，C組大鼠肺組織內(nèi)均可見(jiàn)標(biāo)記過(guò)的MSCs，隨著時(shí)間的推移，肺組織內(nèi)MSCs比例逐漸減少。B組和C組大鼠的肺組織呈現(xiàn)肺氣腫樣改變，B組和C組大鼠肺組織的平均內(nèi)襯間隔（MLI）高于A組，平均肺泡數(shù)（MAN）明顯低于A組，B組大鼠肺組織的MLI高于C組，MAN低于C組（P＜0.05）。B組和C組大鼠血清及肺組織中MDA高于A組，SOD低于A組，B組血清及肺組織中MDA高于C組，SOD低于C組（P＜0.05）。結(jié)論MSCs移植可能通過(guò)降低氧化應(yīng)激水平對(duì)大鼠肺氣腫發(fā)揮治療作用。

肺氣腫；間質(zhì)干細(xì)胞；氧化性應(yīng)激；間質(zhì)干細(xì)胞移植

慢性阻塞性肺疾病（COPD）是患病率及死亡率均較高的最常見(jiàn)的慢性呼吸系統(tǒng)疾病。COPD的病理改變包括小氣道炎癥及肺氣腫。肺氣腫是COPD非常關(guān)鍵的病理改變，以肺泡壁缺失及終末細(xì)支氣管遠(yuǎn)端的空腔永久性擴(kuò)大為特征。肺氣腫的形成是一個(gè)不可逆的病理過(guò)程，目前尚無(wú)治愈肺氣腫的有效方法。間充質(zhì)干細(xì)胞（MSCs）是未分化的細(xì)胞，可從骨髓或其他器官動(dòng)員到損傷組織，分化成不同的細(xì)胞表型，以發(fā)揮修復(fù)功能，有研究表明MSCs對(duì)肺纖維化［1］、肺高壓［2］及急性肺損傷［3］有治療作用。關(guān)于MSCs治療肺氣腫的研究很少，本研究通過(guò)分析MSCs移植對(duì)大鼠肺氣腫的治療效果，從氧化應(yīng)激方面探討MSCs治療肺氣腫的可能機(jī)制。

1　材料與方法

1.1實(shí)驗(yàn)動(dòng)物及材料SPF級(jí)健康雌性SD大鼠26只（昆明醫(yī)科大學(xué)實(shí)驗(yàn)動(dòng)物中心），動(dòng)物質(zhì)量合格證號(hào)：SCXK（滇）2011-0004，鼠齡6周，體質(zhì)量（150±10）g；紅梅烤煙型香煙（紅塔煙草有限責(zé)任公司）；胎牛血清（Bi以色列）；DMEM/ F12，0.25%Trypsin-EDTA（Hyclone）；Anti-Rat CD45 FITC、an?ti-Rat/mouse CD90-FITC、Anti-Rat CD44H PE及FITC、FE同型對(duì)照（eBioscience），anti-mouse CD34 FITC（Santa Cruz）；4，6-二乙酰基-2-苯基吲哚（DAPI，北京中杉金橋生物技術(shù)有限公司）；MDA試劑盒、SOD試劑盒均購(gòu)自南京建成生物研究所）。

1.2實(shí)驗(yàn)動(dòng)物分組及動(dòng)物模型的建立將大鼠隨機(jī)分為3組，對(duì)照組（A組）、肺氣腫組（B組）每組各8只，肺氣腫+ MSCs移植組（C組）10只。參照文獻(xiàn)［4］自制大鼠實(shí)驗(yàn)性被動(dòng)吸煙裝置，復(fù)制肺氣腫模型，方法稍有改變。將B組和C組大鼠置于自制的煙霧暴露箱中（熏煙箱體積0.6 m3，可于每側(cè)箱壁鉆5個(gè)通風(fēng)孔，每孔1 cm×1 cm，以防止CO中毒），采用紅梅烤煙型香煙（焦油量11 mg，煙氣煙堿量1.0 mg，煙氣CO量：12 mg）放入箱內(nèi)自然燃燒。點(diǎn)燃時(shí)，每次熏煙15支，以5 支-5支-5支方式連續(xù)點(diǎn)燃（即5支同時(shí)點(diǎn)燃，至香煙燃燒完全、煙霧基本消失，再點(diǎn)燃下5支），共約45 min，此期間，艙內(nèi)煙霧體積百分比約為15%（V/V）［5］。取出大鼠，清洗煙霧暴露箱。4 h后重復(fù)上述煙霧暴露。每天煙霧暴露2次，每周5 d，持續(xù)14周。A組大鼠在常氧下飼養(yǎng)14周，除不予煙霧暴露外，其他飼養(yǎng)條件相同。

1.3MSCs的分離、培養(yǎng)將6周鼠齡SD大鼠脫臼處死后，無(wú)菌條件下取大鼠股骨，用咬骨鉗將股骨兩端剪去，PBS反復(fù)沖洗骨髓腔獲取骨髓細(xì)胞懸液，1 000 r/min離心5 min，棄上清，DMEM/F12（10%FBS）重懸細(xì)胞后接種于培養(yǎng)瓶，37℃、5%CO2培養(yǎng)箱培養(yǎng)。待細(xì)胞生長(zhǎng)密度達(dá)80%～90%時(shí)進(jìn)行消化，以1∶2比例進(jìn)行傳代擴(kuò)增培養(yǎng)，通過(guò)多次傳代對(duì)細(xì)胞進(jìn)行純化，取第3代MSCs進(jìn)行鑒定、標(biāo)記和體內(nèi)干預(yù)實(shí)驗(yàn)。

1.4MSCs的表型鑒定取第3代細(xì)胞經(jīng)胰酶消化、PBS洗滌l～2遍后，離心收集細(xì)胞。取1×106個(gè)細(xì)胞，加入350 μL流式細(xì)胞染色洗滌液，混勻后以50 μL/管加入7個(gè)流式管中。分別加入2 μL熒光標(biāo)記的單抗CD34-FITC、CD45-FITC、CD90-FITC、CD44-PE、同型對(duì)照FITC及PE，設(shè)1管空白對(duì)照，每管加入48 μL PBS，室溫避光孵育30 min。然后每管加入400 μL 1%的多聚甲醛。應(yīng)用流式細(xì)胞儀檢測(cè)細(xì)胞表面抗原表達(dá)。

1.5MSCs的標(biāo)記與肺氣腫大鼠MSCs移植于移植當(dāng)天，取第3代大鼠MSCs，加入無(wú)菌的DAPI至終濃度為50 g/L。在37℃孵育30 min，標(biāo)記完成后，0.25%胰酶-0.1%EDTA液常規(guī)消化獲得細(xì)胞懸液。離心后PBS反復(fù)洗滌以去除未結(jié)合的DAPI，離心收集細(xì)胞，稀釋至1×107/mL，放于冰浴中。1 h內(nèi)將細(xì)胞通過(guò)尾靜脈注入C組大鼠體內(nèi)，細(xì)胞數(shù)約5× 106/只，每周1次，連續(xù)4次。A組及B組注入等體積PBS。

1.6觀察MSCs在肺氣腫大鼠肺及其他組織的定植情況在完成4次MSCs移植后的2周、4周分別處死C組大鼠各1只，取新鮮組織行冰凍切片，熒光顯微鏡下觀察大鼠肺組織及心、肝、胰、脾、腎中DAPI標(biāo)記細(xì)胞（即MSCs）的定植、分布情況。

1.7血清和肺組織的留取MSCs移植8周后處死剩余所有大鼠。戊巴比妥鈉（5 mg/kg）腹腔內(nèi)注射麻醉大鼠。腹主動(dòng)脈部穿刺抽血，以促凝采血管采血至約5～7 mL，可放血處死大鼠，將采血管在室溫下充分靜置后，3 000 r/min離心15 min，用移液管吸取上清，以2 mL EP管分裝成兩管，標(biāo)記封口后保存于-70℃冰箱備用。切斷肋骨入胸，暴露氣管、肺臟和心臟，切斷主支氣管，用彎鉗將其提起，沿背部脊柱前方分離，將心臟和肺臟一起分離下來(lái)，剪去心臟。結(jié)扎右主支氣管，右肺放-70℃冰箱保存?zhèn)溆谩Ｔ僖猿掷m(xù)25 cmH2O （1 cmH2O=0.098 kPa）的壓力向氣管內(nèi)注入4%多聚甲醛至左肺膨脹，左肺葉浸泡于4%多聚甲醛液中固定2 h，將左肺作常規(guī)石蠟包埋、切片。

1.8大鼠肺組織病理切片形態(tài)定量分析每只大鼠各取左肺最大橫徑處肺組織，常規(guī)石蠟包埋、切片，行蘇木精-伊紅（HE）染色作常規(guī)病理學(xué)檢查。每例標(biāo)本選2張切片，按Robbesom等［6］的方法，在光學(xué)顯微鏡下（×100）觀察，每切片取5個(gè)視野（避開(kāi)大血管和支氣管），在每個(gè)視野正中心劃十字交叉線，計(jì)算與交叉線相交的肺泡隔數(shù)（NS）和每個(gè)視野內(nèi)肺泡數(shù)（Na），同時(shí)測(cè)出十字線總長(zhǎng)（L）和每個(gè)視野面積（S），按公式平均內(nèi)襯間隔（MLI）=L/NS，其數(shù)值反映肺泡平均直徑。按公式平均肺泡數(shù)（MAN）=Na/S，計(jì)算平均肺泡數(shù)，其數(shù)值反映肺泡的密度。

1.9測(cè)定肺組織勻漿與血清中超氧化物歧化酶（SOD）和丙二醛（MDA）的水平制備肺組織勻漿，按照試劑盒說(shuō)明書(shū)要求操作，用硫代戊巴比妥法測(cè)定血清和肺組織勻漿中MDA的水平，用WST-1法測(cè)定各組血清和肺組織勻漿中SOD的水平。

1.10統(tǒng)計(jì)學(xué)方法應(yīng)用SPSS 17.0軟件進(jìn)行統(tǒng)計(jì)學(xué)分析。計(jì)量資料采用±s表示，多組比較采用方差分析，組間多重比較采用LSD-t檢驗(yàn)。P＜0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2　結(jié)果

2.1MSCs的鑒定第3代MSCs高表達(dá)CD44 （97.2%）、CD90（97.7%），而不表達(dá)造血細(xì)胞標(biāo)志抗原CD34（0.4%）及CD45（0.5%），證實(shí)本實(shí)驗(yàn)培養(yǎng)的細(xì)胞為MSCs，見(jiàn)圖1。

Fig.1　Immunophenotyping of MSCs圖1　MSCs細(xì)胞表面分子標(biāo)志鑒定

2.2DAPI標(biāo)記MSCsDAPI標(biāo)記30 min后，MSCs細(xì)胞核在熒光顯微鏡下全部標(biāo)記上并顯示藍(lán)色熒光，標(biāo)記率達(dá)100%。

2.3肺及其他組織中MSCs檢測(cè)DAPI標(biāo)記后的MSCs可以看見(jiàn)藍(lán)色的細(xì)胞核。熒光顯微鏡下隱約可見(jiàn)肺泡輪廓，MSCs移植后2周、4周，肺組織內(nèi)均可見(jiàn)到藍(lán)色熒光表達(dá)，隨著時(shí)間的推移，肺內(nèi)陽(yáng)性細(xì)胞比例逐漸減少。而心、肝、胰、脾、腎等組織均未見(jiàn)到藍(lán)色熒光表達(dá)，見(jiàn)圖2。

Fig.2　Implantations of MSCs in lungs under a fluorescence microscope（×100）圖2　熒光顯微鏡下肺組織中的MSCs（×100）

2.4肺組織病理學(xué)觀察A組大鼠肺組織肺泡大小均勻，肺泡數(shù)目較多，肺泡間隔較厚。B組和C組大鼠的肺組織呈現(xiàn)肺氣腫樣改變，肺泡大小不一，肺泡腔擴(kuò)大，肺泡數(shù)目明顯減少，肺泡間隔變窄，并有不同程度的斷裂。C組肺氣腫樣改變較B組明顯減輕，見(jiàn)圖3。B組和C組大鼠肺組織的MLI高于A組，MAN低于A組，B組大鼠肺組織的MLI高于C組，MAN低于C組（P＜0.05），見(jiàn)表1。

Tab.1　Comparison of MLI and MAN between three groups表1　各組大鼠平均內(nèi)襯間隔與平均肺泡數(shù)比較　（±s）

Tab.1　Comparison of MLI and MAN between three groups表1　各組大鼠平均內(nèi)襯間隔與平均肺泡數(shù)比較　（±s）

＊＊P＜0.01；a與A組比較，b與B組比較，P＜0.05

組別A組B組C組F n 80 80 80 MLI（μm）74.48±10.25 111.40±23.01a90.33±14.59ab97.13＊＊MAN（個(gè)/mm2）158.64±21.62 93.72±21.88a125.47±15.18ab214.98＊＊

2.5SOD和MDA水平的測(cè)定B組和C組大鼠血清及肺組織中MDA高于A組，SOD低于A組，B組血清及肺組織中MDA高于C組，SOD低于C組（P＜0.05），見(jiàn)表2。

Tab.2　The levels of MDA and SOD in serum and lungbetween three groups表2　各組血清與肺組織勻漿中MDA及SOD水平比較　（n=8，±s）

Tab.2　The levels of MDA and SOD in serum and lungbetween three groups表2　各組血清與肺組織勻漿中MDA及SOD水平比較　（n=8，±s）

＊P＜0.05；a與A組比較，b與B組比較，P＜0.05

組別A組B組C組F血清MDA （mol/L）3.04±0.36 4.29±0.76a3.69±0.43ab10.65＊SOD （U/mL）10.47±0.87 8.72±0.83a9.58±0.74ab9.18＊肺組織MDA （mol/g）4.22±0.57 5.36±0.51a4.83±0.43ab10.06＊SOD （U/mg）84.93±12.95 56.28±13.36a70.18±11.00ab10.55＊

3　討論

吸煙是COPD發(fā)病最重要的危險(xiǎn)因素。本研究使大鼠被動(dòng)吸煙發(fā)生肺氣腫，以模擬人類COPD的發(fā)病過(guò)程。慢性炎癥、蛋白酶/抗蛋白酶失衡、細(xì)胞凋亡及氧化應(yīng)激參與吸煙導(dǎo)致COPD的發(fā)病過(guò)程，氧化應(yīng)激在其中起樞紐作用。機(jī)體可以通過(guò)內(nèi)源性與外源性途徑產(chǎn)生氧化劑（如活性氧族），同時(shí)肺擁有廣大的細(xì)胞內(nèi)外抗氧化防御系統(tǒng)，正常情況下機(jī)體氧化劑的損害作用及抗氧化劑的保護(hù)作用處于動(dòng)態(tài)平衡狀態(tài)。吸煙使氧化劑產(chǎn)生過(guò)多，使抗氧化劑產(chǎn)生不足或功能受損，從而發(fā)生氧化應(yīng)激。活性氧主要攻擊細(xì)胞膜多不飽和脂肪酸產(chǎn)生脂質(zhì)過(guò)氧化物（如MDA），與非吸煙健康者相比，COPD患者及吸煙者的痰液、肺組織及血清中MDA水平增加，且與COPD嚴(yán)重程度相關(guān)［7-8］。氧化應(yīng)激可上調(diào)氧化還原敏感性轉(zhuǎn)錄因子（如核因子-κB）及活化蛋白-1（AP-1），激活其下游信號(hào)傳導(dǎo)通路，調(diào)控多種炎癥基因表達(dá)，從而放大慢性炎癥反應(yīng)；氧化應(yīng)激可以促進(jìn)蛋白酶的產(chǎn)生、激活，導(dǎo)致蛋白酶/抗蛋白酶失衡；氧化應(yīng)激可以通過(guò)抑制血管內(nèi)皮生長(zhǎng)因子（VEGF）、激活核因子-κB及直接損傷DNA等途徑誘發(fā)肺泡細(xì)胞凋亡；從而導(dǎo)致肺泡結(jié)構(gòu)泡壞，肺泡腔擴(kuò)大，形成肺氣腫，促進(jìn)COPD的進(jìn)展。故戒煙及抗氧化應(yīng)激是預(yù)防COPD進(jìn)展最重要、最有效的方法［9］。但有研究報(bào)道，在戒煙之后，炎癥反應(yīng)及氧化應(yīng)激等仍在繼續(xù)［10-11］。

MSCs移植作為一種生物治療手段，具有易分離、培養(yǎng)，可大量擴(kuò)增，具有多分化潛能及具有免疫抑制屬性等多種特性，對(duì)多種呼吸系統(tǒng)疾病，如肺氣腫、急性肺損傷及肺纖維化等具有治療作用［12］。MSCs在調(diào)節(jié)氧化還原環(huán)境中的作用是目前研究的熱點(diǎn)。血紅素氧化酶-1（HO-1）具有很強(qiáng)的抗氧化應(yīng)激及細(xì)胞保護(hù)作用［13］。在脂多糖誘導(dǎo)的肺損傷模型中，MSCs移植可以明顯增加肺組織HO-1的水平而降低過(guò)氧化物MDA水平［14］。另一項(xiàng)研究表明，在自發(fā)性腦卒中模型中，MSCs移植可以降低腦組織中氧化應(yīng)激的水平［15］。

本研究結(jié)果顯示，MSCs移植可以減輕吸煙所致的大鼠肺氣腫：肺氣腫組和肺氣腫+MSCs移植組大鼠的肺組織呈現(xiàn)肺氣腫樣改變，肺泡大小不一，肺泡腔擴(kuò)大，肺泡數(shù)目明顯減少，肺泡間隔變窄，并有不同程度的斷裂。肺氣腫+MSCs移植組的肺氣腫樣改變較肺氣腫組明顯減輕，提示MSCs可以減輕吸煙所致的肺氣腫。肺氣腫+MSCs移植組與肺氣腫組比較，血清及肺組織中MDA的水平下降；而SOD的水平升高。提示MSCs可以降低肺氣腫大鼠氧化應(yīng)激水平。由于氧化應(yīng)激是肺氣腫發(fā)病過(guò)程的中心環(huán)節(jié)，故MSCs可能通過(guò)降低氧化應(yīng)激水平對(duì)肺氣腫發(fā)揮治療作用。MSCs對(duì)肺氣腫發(fā)病過(guò)程中氧化應(yīng)激的影響及其抗氧化應(yīng)激機(jī)制有待于進(jìn)一步研究。

（圖3見(jiàn)插頁(yè)）

［1］Huang K，Wu XM，Wang XY，et al.The effect of marrow mesenchy?mal stem cell transplantation on pulmonary fibrosis in rats［J］.Zhong hua Jie He He Hu Xi Za Zhi，2012，35（9）:659-664.

［2］Tian HJ，Yang JP，Wang XX.The effect of bone marrow mesenchy?mal stem cell transplantation on hypoxic pulmonary hypertension in rats［J］.Zhongguo Ying Yong Sheng Li Xue Za Zhi，2014，30（3）:233-236.

［3］Gupta N，Su X，Popov B，et al.Intrapulmonary delivery of bone mar?row-derived mesenchymal stem cells improves survival and attenu?ates endotoxin-induced acute lung injury in mice［J］.J Immunol，2007，179（3）:1855-1863.

［4］Feng J，Chiang AA，Wu Q，et al.Sleep-related hypoxemia aggra?vates systematic inflammation in emphysematous rats［J］.Chin Med J（Engl），2010，123（17）:2392-2399.

［5］Lee JH，Lee DS，Kim EK，et al.Simvastatin inhibits cigarette smok?ing-induced emphysema and pulmonary hypertension in rat lungs ［J］.Am J Respir Crit Care Med，2005，172（8）:987-993.

［6］Robbesom AA，Versteeg EM，Veerkamp JH，et al.Morphological quantification of emphysema in small human lung specimens:com?parison of methods and relation with clinical data［J］.Mod Pathol，2003，16（1）:1-7.

［7］Antus B，Harnasi G，Drozdovszky O，et al.Monitoring oxidative stress during chronic obstructive pulmonary disease exacerbations using malondialdehyde［J］.Respirology，2014，19（1）:74-79.

［8］Cristóv?o C，Cristóv?o L，Nogueira F，et al.Evaluation of the oxi?dant and antioxidant balance in the pathogenesis of chronic obstruc?tive pulmonary disease［J］.Rev Port Pneumol，2013，19（2）:70-75.

［9］Yao H，Rahman I.Current concepts on oxidative/carbonyl stress，in?flammation and epigenetics in pathogenesis of chronic obstructive pulmonary disease［J］.Toxicol Appl Pharmacol，2011，254（2）:72-85.

［10］Gamble E，Grootendorst DC，Hattotuwa K，et al.Airway mucosal in?flammation in COPD is similar in smokers and ex-smokers:a pooled analysis［J］.Eur Respir J，2007，30（3）:467-471.

［11］Louhelainen N，Rytila P，Haahtela T，et al.Persistence of oxidant and protease burden in the airways after smoking cessation［J］. BMC Pulm Med，2009，9:25.

［12］Zhao KY，Wang HS，Hou MX，et al.Therapeutic effect of mesenchy?mal stem cells transplantation on pulmonary hypertension model rats ［J］.Med J Chin PLA，2013，38（10）:830-833.［趙科研，王輝山，侯明曉，等.骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞移植對(duì)肺動(dòng)脈高壓模型大鼠的作用［J］.解放軍醫(yī)學(xué)雜志，2013，38（10）:830-833］.

［13］Fredenburgh LE，Perrella MA，Mitsialis SA.The role of heme oxy?genase-1 in pulmonary disease［J］.Am J Respir Cell Mol Biol，2007，36（2）:158-165.

［14］Li J，Li D，Liu X，et al.Human umbilical cord mesenchymal stem cells reduce systemic inflammation and attenuate LPS-induced acute lung injury in rats［J］.J Inflamm（Lond），2012，9（1）:33.

［15］Calió ML，Marinho DS，Ko GM，et al.Transplantation of bone mar?row mesenchymal stem cells decreases oxidative stress，apoptosis，and hippocampal damage in brain of a spontaneous stroke model ［J］.Free Radic Biol Med，2014，70:141-154.

（2014-09-26收稿2014-11-05修回）

（本文編輯閆娟）

Mesenchymal stem cells transplantation alleviates pulmonary emphysema and oxidative stress in rat

JIN Zhixian1，BI Hong1，ZHOU Kaihua1，DU Junyi1，CHEN Min1，WANG Qing1△，PAN Xinghua2
1 Respiratory Department Two of The First People's Hospital of Kunming，Kunming 650000，China；2 Stem Cell Engineering Laboratory of Yunnan Province，Kunming General Hospital of Chengdu Military Command
△Corresponding AuthorE-mail:wangqing87329@126.com；xinghuapan@aliyun.com

ObjectiveTo test the effect of bone marrow mesenehymal stem cells（MSCs）transplantation on oxidative stress and the development of pulmonary emphysema in rats.MethodsSD rats（n=26）were randomly divided into three groups：normal control group（group A，n=8），emphysema group（group B，n=8）and emphysema+MSCs transplantation group （group C，n=10）.Rat models of emphysema was established by exposing rats to cigarette smoking for 14 weeks.Then rats of group C received MSCs transplantation.At the 14thand 28thdays after 4 course of MSCs transplantations，one rat in group C was sacrificed at each time point and their lungs were preserved in frozen sections.Survival of MSCs in the lung tissues were observed by fluorescence microscopy.Eight weeks after transplantations，lung sections were stained by hematoxylin and eo?sin（HE）to observe the morphological alterations.Mean linear intercept（MLI）and mean alveolar numbers（MAN）were also measured.Serum and lung malondialdehyde（MDA）levels and superoxide dismutase（SOD）activity were also examined.Re?sultsAt the 14thday and 28thday after transplantations of MSCs，MSCs successfully localized to lung and survived in rat models of emphysema.Emphysematous changes of lung tissues were observed in both group B and group C.MLI was higher while MAN was lower in group B and C than those in group A（P＜0.05）.MLI and MDA levels in serum and lung were high?er while MAN level and SOD activity were lower in group B than those in group C（P＜0.05）.MDA levels in serum and lung was higher while SOD activity was lower in group B and C than those in group A（P＜0.05）.ConclusionMSCs transplanta?tions can effectively alleviates pulmonary emphysema in rat models which might through reducing oxidative stress.

pulmonary emphysema；mesenchymal stem cells；oxidative stress；mesenchymal stem cell transplantation

R563.3

ADOI：10.11958/j.issn.0253-9896.2015.02.003

云南省應(yīng)用基礎(chǔ)研究項(xiàng)目資助（2012FB106）

1昆明市第一人民醫(yī)院呼吸二科（郵編650011）；2云南省干細(xì)胞工程實(shí)驗(yàn)室，成都軍區(qū)昆明總醫(yī)院

金志賢（1970），女，主任醫(yī)師，學(xué)士，主要從事呼吸系統(tǒng)疾病研究

△E-mail：wangqing87329@126.com；xinghuapan@aliyun.com