中藥“七皮飲”對銀屑病樣皮損大鼠模型不同組織β-內啡肽的影響*

楊家玥，李　靜，王　超，蘭鳳榮，徐麗敏

中藥“七皮飲”對銀屑病樣皮損大鼠模型不同組織β-內啡肽的影響*

楊家玥1，李靜2，王超3，蘭鳳榮2，徐麗敏4

（1.天津市第四中心醫院，天津300140；2.天津市婦女兒童保健中心，天津300070；3.天津中醫藥大學，天津300193；4.天津市中醫藥研究院長征醫院，天津300120）

［目的］研究中藥七皮飲對銀屑病樣皮損大鼠模型皮損及不同組織中β-內啡肽（β-EP）含量的影響及其作用規律。［方法］復制銀屑病樣皮損大鼠模型，中藥七皮飲治療，每日治療1次，連續10 d。觀察皮膚組織病理變化、測定皮損Baker組織學得分及銀屑病面積與嚴重性指數（PASI）得分、放射免疫學方法檢測血漿、皮損及下丘腦中β-EP含量。［結果］中藥治療后大鼠皮損明顯改善，中藥組Baker組織學得分及PASI得分均明顯較模型組降低（P＜0.01）。與空白組比較，模型組血漿β-EP呈降低趨勢，差異無統計學意義；模型組皮損β-EP升高（P＜0.05）；模型組下丘腦β-EP降低（P＜0.01）。與模型組比較，中藥組血漿β-EP含量無明顯變化；皮損處β-EP降低（P＜0.01）；下丘腦β-EP含量升高（P＜0.01）。［結論］中藥七皮飲對銀屑病樣皮損大鼠模型皮損有改善作用，其治療機制可能與降低皮損β-EP、升高下丘腦β-EP含量有關。

銀屑病；中藥；七皮飲；β-內啡肽

DOI：10.11656/j.issn.1672-1519.2015.11.10

銀屑病是一種常見的慢性、復發性、炎癥性皮膚病，受該病困擾的人數呈上升趨勢，西醫雖有一定的療效，但毒副作用大，易復發。在總結多年臨床經驗的基礎上，采用以清熱解毒、涼血消斑、解郁安神為基本治法的七皮飲治療銀屑病，經臨床運用觀察，發現具有減少炎癥、抑制表皮過度角化及止癢等肯定療效。為了探討七皮飲對銀屑病的干預機制，本實驗選用5%心得安長期外涂復制大鼠銀屑病樣皮損模型，觀察七皮飲對銀屑病的治療作用及機制，為臨床治療銀屑病提供科學的實驗依據。

1　材料與方法

1.1主要材料將5 g的心得安原料（由天津力生制藥有限公司饋贈）加入95 g的乳劑基質配成5%心得安乳劑；七皮飲（由地骨皮、桑白皮、合歡皮、大腹皮、牡丹皮、白鮮皮、陳皮組成，天津中醫藥大學第一附屬醫院藥劑科加工成顆粒劑，溶于100 mL水中，相當于每毫升含生藥1.8 g）；β-內啡肽（β-EP）放免試劑盒購自北京華英生物技術研究所；健康成年Wistar雄性大鼠24只，體質量200～250 g，購自北京維通利華有限公司實驗動物中心［許可證號：SCXK（京）2002-0003］。

1.2動物分組及處理將24只大鼠隨機數字表余數法分為正常組、模型組及中藥組，每組各8只。正常組不做任何處理；將模型組和中藥組大鼠背部剪出面積為1.5 cm2對稱的無毛區，按照黃畋［1］及Gaylarde［2］的方法，將5%心得安乳劑涂于兩側被皮區（0.3 g/cm2），3次/d，連續21 d。第22天開始對中藥組進行治療，根據《藥理實驗方法學》［3］按人與動物體積表面積折算的等效劑量比值進行換算，按體質量灌胃給藥，以9 mL/kg的量，每日1次，連續10 d。

1.3取材及檢測指標

1.3.1大鼠一般狀況及皮損局部銀屑病面積與嚴重性指數（PASI）評分觀察大鼠的皮毛色澤、行為活動、神態、體質量、飲食、局部及全身遲發性變態反應等情況。參考Van de Kerkh［4］制定的經典PASI評分標準，對皮損表現進行評分。

1.3.2大鼠皮損組織蘇木精-伊紅（HE）染色及組織病理評分實驗結束后取皮膚組織一塊，10%中性甲醛水溶液進行固定，脫水，透明浸蠟后包埋，石蠟切片，常規HE染色，參照通用的Baker［5］評分方法，對各組大鼠皮膚的組織病理學改變進行定量評估。1.3.3血漿、皮損、下丘腦β-EP含量測定各組大鼠迅速斷頭取血2 mL，注入預先加好抗凝劑（10%乙二胺四乙酸30 μL、抑肽酶20 μL）的試管中，混勻，4～8℃放置15min后，迅速低溫離心（3 500 r/min，5 min）去上清，取血漿放入EP管內，-20℃以下保存待檢。迅速在冰上取皮損組織一塊及下丘腦，入沸生理鹽水中煮5 min，滅活酶；稱質量后，置于玻璃勻漿管內，分別加入1 mol/L冰醋酸及鹽酸（HCl）各1 mL，在冰浴上充分勻漿后移入塑料離心管中，加入1mol/L氫氧化鈉（NaOH）1 mL中和；低溫離心（4 000 r/min，20 min），取上清，-20℃以下保存待檢。放射免疫法測定血漿、皮損、下丘腦中β-EP含量。

1.4統計學處理運用SPSS18.0軟件分析。計量資料采用均數±標準差（x±s）表示，兩組計量資料組間比較采用兩獨立樣本t檢驗，多組計量資料組間比較采用單因素方差分析，組間兩兩比較采用LSD法，P＜0.05為差異有統計學意義。

2　結果

2.1各組大鼠一般狀況及皮損觀察模型組大鼠較正常組表現急躁，毛發晦暗雜亂、無光澤，飲食減少，大便稀薄，體質量下降，搔抓皮損，可見明顯的紅斑丘疹，鱗屑，表皮肥厚浸潤；中藥組上述表現明顯改善，反應靈敏，皮毛有光澤，體質量增加，紅斑、鱗屑基本消退，表皮變薄，見圖1。皮損臨床癥狀PASI評分顯示中藥組明顯低于模型組（P＜0.01），見表1。

圖1　不同組大鼠皮膚表現Fig.1 Performance of rats skin in different groups

表1　模型與中藥組大鼠皮損PASI評分比較（±s）Tab.1　Comparison of the PASI score between the model and Chinese traditional medicine group（±s）分

表1　模型與中藥組大鼠皮損PASI評分比較（±s）Tab.1　Comparison of the PASI score between the model and Chinese traditional medicine group（±s）分

注：與模型組相比，*P＜0.01。

分組動物數PASI得分模型組88.500±1.604*中藥組82.500±0.527*

2.2皮損組織病理觀察空白組：角質層薄，顆粒層約為2～4層，棘層約2～3層。模型組：不同程度的彌漫或灶性角化過度及角化不全、可見少數中性白細胞的聚集、顆粒層減少、棘層肥厚、真皮乳頭上延、皮突下延呈杵狀、真皮淺層毛細血管擴張充血、淋巴及組織細胞的浸潤。中藥組：表皮變薄，基本接近正常皮，角化不全和角化過度基本消失，顆粒層增多，真皮乳頭毛細血管擴張充血等表現減輕，見圖2。皮損組織病理評分顯示中藥組明顯下降，較模型組明顯減輕（P＜0.01），見表2。

圖2　不同組大鼠皮膚組織病理改變（HE染色×40）Fig.2Histopathology in different groups of rats skin tissue（HE×40）

表2　模型與中藥組大鼠皮膚組織病理評分比較（±s）Tab.2　 Comparison of the histology score between the model and Chinese traditional medicine group（±s）分

表2　模型與中藥組大鼠皮膚組織病理評分比較（±s）Tab.2　 Comparison of the histology score between the model and Chinese traditional medicine group（±s）分

注：與模型組相比，*P＜0.01。

分組動物數PASI得分模型組85.063±1.178*中藥組81.100±0.459*

2.3各組大鼠不同組織中β-EP水平的變化模型組、中藥組大鼠血漿β-EP含量均降低，與空白組相比，均無統計學差異（P＞0.05）；與空白組比較，模型組大鼠皮損處β-EP明顯升高（P＜0.05），中藥治療后使升高的β-EP明顯降低，與模型組相比差異有統計學意義（P＜0.01）；模型組大鼠下丘腦β-EP含量較空白組明顯降低，兩者相比差異有統計學意義（P＜0.01），中藥治療后含量顯著升高，與模型組相比差異有統計學意義（P＜0.01），見表3。

表3　不同組間大鼠血漿、皮損、下丘腦中β-EP含量變化的比較（±s）Tab.3　Comparison of the β-EP contents between different groups in plasma，skin lesions and hypothalamus（±s）ng/L

表3　不同組間大鼠血漿、皮損、下丘腦中β-EP含量變化的比較（±s）Tab.3　Comparison of the β-EP contents between different groups in plasma，skin lesions and hypothalamus（±s）ng/L

注：與空白組相比，*P＜0.05，**P＜0.01；與模型組相比，#P＜0.01。

分組動物數血漿β-EP含量皮損β-EP含量下丘腦β-EP含量空白組899.34±49.13093.08±27.53433.48±63.58模型組887.66±20.49118.11±20.07*312.69±30.55**中藥組880.94±22.94085.19±17.79#485.73±65.72#

3　討論

中醫認為銀屑病“皆是風濕邪氣，客于腠理，復值寒濕，與血氣相搏而生”［6］，其發生多因素體陽盛，感受外邪，或進食辛辣，或心情煩擾，七情內傷等，使血熱內蘊，耗傷陰血，生風致燥，引起血燥；燥熱使血受熱煎熬成塊，瘀熱互結形成瘀血，致肌膚失養，瘀阻經絡，影響氣血營運，使原有的血瘀進一步加重，使銀屑病患者長期處于一種因熱而燥，因瘀而熱，因熱而瘀的虛實夾雜不良循環中［7］。本病病因在血，病位在肌表，在此基礎上自擬七皮飲，以達到清熱解毒、涼血消斑、解郁安神。本方由《六科準繩》五皮飲化裁而來，而五皮飲是《三因極一病癥方論》中的名方，后世很多醫家取其化裁應用于皮膚病的治療［8］，取其“以皮達皮”之意。方中地骨皮、桑白皮泄肺熱而清皮毛；牡丹皮涼血化斑消瘀；合歡皮解郁安神、養心寧神；白鮮皮清熱燥濕，祛風止癢，專走皮膚，幾乎為皮膚科所專用；大腹皮、陳皮理氣行滯，通理中焦氣機。全方共收清熱解毒、涼血消斑、解郁安神之效，使熱去血平，血歸常道，氣機得暢，恢復正常。通過對大鼠一般情況、皮損PASI評分及組織病理學評分進行比較，發現中藥七皮飲能明顯使銀屑病樣皮損呈良性改善，接近正常大鼠。

銀屑病的發病機制目前尚不十分清楚，近年來隨著神經內分泌、免疫調節概念的建立和發展，皮膚和血漿中某些神經肽與銀屑病的關系已引起了人們的重視，認為心理應激、神經肽能影響銀屑病的病情及病程［9-12］。神經肽β-EP作為重要的應激調節因子，不僅在表皮、真皮外周神經纖維上有μ-阿片肽受體表達，甚至在皮膚中的免疫活性細胞上也有β-EP及其受體的表達，部分外周神經纖維還能產生β-EP［13］，在神經和皮膚的直接交流中發揮了至關重要的作用，對皮膚的病理生理有不同程度的影響。

Glinski等［14］通過比較尋常型銀屑病患者及正常人血清中β-EP水平，發現銀屑病患者β-EP水平明顯增高，并發現β-EP水平與銀屑病疾病嚴重程度相關，提示炎癥可能是引起銀屑病β-EP的產生因素。國內學者［15-16］用同樣方法檢測銀屑病患者血漿和皮損中β-EP的含量，結果均高于正常人。最近Hollo等［17］觀察同時接受光療和浴療治療的銀屑病患者，發現癥狀改善的患者血液中β-EP的水平并無顯著變化。認為血液中的β-EP水平與皮膚所處的病理狀態并不一致，銀屑病病灶處的炎癥可能不是由血液中β-EP直接介導的。由于β-EP的免疫調節作用有中樞和外周兩種機制，所以本實驗在檢測血漿、皮損中β-EP含量的同時，對中樞下丘腦中的β-EP也進行觀察。實驗結果發現模型組中血漿β-EP含量未見升高，與正常組之間無明顯變化，這與Hollo［17］的結果一致；而模型組皮損處β-EP含量明顯升高，中藥治療后使之降低，與空白組無差異；對于下丘腦來說，中藥可促進模型組降低的β-EP含量升高，且與空白組無差異。皮損、下丘腦中β-EP含量的變化可能與銀屑病的發生發展有密切的關系，并且經七皮飲治療后皮損、下丘腦中β-EP含量基本得到恢復；而血漿中β-EP的變化與皮損病理狀態不一致，對銀屑病關系未見明顯的影響。

由此可見，無論β-EP在銀屑病中如何作用，但其在數量的增加和功能上的異常，參與了銀屑病的發病機制，中藥七皮飲可下調皮損處β-EP、上調下丘腦中β-EP，通過對不同組織中β-EP含量的調節發揮治療作用。

［1］黃畋，張淑芝，孫令.心得安涂藥造成豚鼠耳部銀屑病樣病理變化［J］.中華皮膚科雜志，1991，24（2）:96.

［2］Gaylarde PM，Brock AP，Sarkany I.Psoriasiform changes in guineapig skin from propranolol［J］.Clin Exper Dematol，1978（3）:157.

［3］徐叔云，卞如濂，陳修.藥理實驗方法學［M］.北京：人民衛生出版社，1982.

［4］Van de Kerkhof PC.The Psoriasis Area and Severity Index and alternative approaches for the assessment of severity:persisting areas of confusion［J］.Br J Dermatol，1997，137（4）:661-662.

［5］Baker BS，Brent L，Valdimarsson H，et al.Is epidermal cell proliferation in psoriatic skin grafts on nude mice driven by T-cell derived cytokines［J］.Br J Dermatol，1992，126（2）:105-110.

［6］劉忠恕.現代中醫皮膚病學［M］.天津：天津科學技術翻譯出版公司，1997：174-181.

［7］于曉飛，吳秀艷，徐雯潔，等.尋常型銀屑病不同時期中醫癥狀分布特點的現代文獻研究［J］.天津中醫藥，2013，30（8）:455-458.

［8］翟曉翔，王蒙蒙.多皮飲治療疑難皮膚病經驗［J］.天津中醫藥，2014，31（12）：737-738.

［9］謝艷秋，孔祥君，代維維，等.涼血消風湯加減治療血熱型銀屑病的療效及對外周血白介素-8的影響［J］.天津中醫藥，2014，31（4）:215-217.

［10］高志莉.白芍總苷膠囊聯合白疕湯治療尋常性銀屑病76例療效觀察［J］.天津中醫藥，2012，29（2）:138-139.

［11］Raychaudhuri SP，Rein G，Farber EM，et al.Neuropathogenesis and neuropharmacology of psoriasis［J］.Int J Dermatol，1995（34）:685-693.

［12］王玉芝，董文堯，趙曉霞.神經肽水平與銀屑病相關性實驗研究進展［J］.中西醫結合研究，2012，4（5）:264-265.

［13］Bigliardi-Qi M，Sumanovski LT，Buchner S，et al.Mu-opiate receptor and Beta-endorphin expression in nerve endings and keratinocytes in human skin［J］.Dermatology，2004，209（3）:183-189.

［14］Glinski W，Brodecka H，Glinska-Ferenz M，et al.Increase concentration of beta-endorphin in sera of pations with psoriasis and otherinflammatorydermatoses［J］.BrJDermatol，1994（131）:260-264.

［15］楊志波，歐陽恒，許斌，等.竹黃顆粒劑Ⅱ號對銀屑病患者β-內啡肽的影響［J］.中國中西醫結合皮膚性病學雜志，2003，2（3）：166-167.

［16］范斌，李斌，章云，等.涼血和活血中藥對銀屑病患者進行期和靜止期血漿中P物質、β-內啡肽分泌的影響［J］.上海中醫藥雜志，2006，40（10）:34-35.

［17］Hollo P，Bender T，Marschalko M，et al.No significant change of plasma beta-EPorphin levels of psoriasis patients after synchronous balneophototherapy［J］.Photodermatol Photoimmunol Photomed，2004，20（4）:205-209.

（本文編輯：馬英，滕曉東）

Effects of“Qipiyin”decoction on the contents of beta-endorphine in different tissues on the rat model with psoriasis-like lesion

YANG Jia-yue1，LI Jing2，WANG Chao3，LAN Feng-rong2，XU Li-min4
（1.Tianjin Fourth Centre Hospital，Tianjin 300140，China；2.Tanjin Women and Children’s Health Center，Tianjin 300070，China；3. Tianjin University of Traditional Chinese Medicine，Tianjin 300193，China；4.Changzheng Hospital of Tianjin Academy of Traditional Chinese Medicine Affiliated Hospital，Tianjin 300120，China）

［Objective］To study on the influence of Chinese drug Qipiyin on the rat model with psoriasis-like lesion and the contents of beta-endorphine in different tissues.［Methods］The rat model with psoriasis-like lesion were prepared，and they were treated with Chinese drug once each day.After treatment of 10 days，changes of the skin histopathology were observed，and its Baker，and scores were determined and the contents of beta-endorphine in different tissues（plasma，skin，hypothalamus）were detected with radioimmunoassay.［Results］After treatment the skin Baker，s scores were decreased in the Chinese drug group as compared with those in the model group（P＜0.01）.Compared as normal group，the β-EP level in plasma of the rat model with psoriasis-like lesion decreased，but its level in skin increased（P＜0.05）and decreased in hypothalamus（P＜0.01）.After Chinese drug，there were no change in β-EP of plasma，but in skin the β-EP level were lower（P＜0.01）and higher in hypothalamus（P＜0.01）.［Conclusion］The rat model with psoriasis-like lesion can be improved by Chinese drug.The mechanism is possibly related with the down-regulation of β-EP in skin and up-regulation of β-EP in hypothalamus.

psoriasis；Chinese drug；Qipiyin；beta-endorphine

R758.63

A

1672-1519（2015）11-0675-04

天津市中醫中西醫結合科研專項資金課題（07027）。

楊家玥（1981-），男，醫學碩士，主治醫師，主要研究方向為針灸推拿學。

徐麗敏，E-mail：lijing_med@163.com。

（2015-06-04）