含乳食品中三聚氰胺檢測方法研究進展

徐 昊，劉慶軍，馬 蓉

（1.江蘇正帆華東凈化設備有限公司，江蘇 寶應225800；2.國家有機食品質量監督檢驗中心，江蘇 寶應225800）

1 引言

三聚氰胺（Melamine，化學式：C3H6N6），是一種富含氮的化工原料，廣泛用于涂料、塑料、黏合劑、紡織、造紙等工業生產中[1]。三聚氰胺對身體有害，不可用于食品加工或食品添加。

食品中蛋白質含量通常是利用凱氏定氮法測定氮含量來間接測定的，而三聚氰胺的含氮量為66.67%，因此一些不法商販將三聚氰胺添加到含乳食品中來提高蛋白質的表象含量，從而降低成本[2]。2007年，美國發生多起寵物食品中添加三聚氰胺導致寵物中毒事件。2008年，中國牛奶、嬰兒配方奶粉及其他奶制品中添加三聚氰胺事件，導致多起嬰兒腎結石，部分患兒發展為腎功能不全甚至死亡[3]。這些事件使消費者對含乳食品產生了恐懼，對此國家各部門對含乳食品中三聚氰胺的檢測展開了研究，制定出一系列標準。《原料乳與乳制品中三聚氰胺檢測方法》（GB/T 22388－2008）中規定了原料乳及乳制品中三聚氰胺的限量值分別為：嬰幼兒配方乳粉1mg/kg；成人奶粉2.5mg/kg[4]。

目前，含乳食品中三聚氰胺的檢測方法主要包括分光光度法、酶聯免疫吸附法（ELISA）、高效液相色譜法（HPLC）、液質聯用法（LC－MS）、氣質聯用法（GC－MS）、離子色譜法等。這些方法具有靈敏度高、適應性廣等特點[5]，在一定程度上滿足了目前對其檢測的要求。

2 分光光度法

分光光度法是通過測定被測物質在特定波長處或一定波長范圍內的吸光度或發光強度，對該物質進行定性和定量分析的方法。

肖錫林等[6]利用可見分光光度法對牛奶中微量的三聚氰胺進行了定量分析。試驗中對不同的顯色劑、溫度、顯色時間和入射波長進行了條件試驗。結果表明，采用2，6－二氯靛酚鈉為顯色劑，25℃顯色10min，在634nm處有最大吸收值。此方法的線性檢測范圍為40～800μg/mL，回收率為92.66%～97.84%，相對標準偏差為0.45%～1.43%。該方法所用儀器設備簡單、操作方便，易于推廣使用。

3 酶聯免疫吸附法

酶聯免疫吸附法（ELISA）是利用抗原與抗體的特異反應將被測物質與酶連接，然后通過酶與底物產生顏色反應來測定目標物質，常用于定量分析。

安徽省地方標準《生鮮乳中三聚氰胺的測定—酶聯免疫吸附法》（DB34/T 1374－2011）就是用酶聯免疫吸附法來測定三聚氰胺的含量，本方法在生鮮乳中的檢出限為100ng/mL[7]。趙寧等[8]自主制備三聚氰胺單克隆抗體，建立了一種快速檢測牛奶中三聚氰胺含量的酶聯免疫檢測方法，該方法的線性檢測范圍為10～810 ng/mL，回收率為84.0%～90.0%，方法檢出限為10 ng/mL。此試驗建立的ELISA一步法能滿足對牛奶中三聚氰胺的檢測要求。

4 色譜法

4.1 高效液相色譜法

高效液相色譜法（HPLC）是以液體為流動相，利用高壓輸液系統，將具有不同極性的流動相泵入裝有固定相的色譜柱中，在柱內樣品各成分被分離后進入檢測器檢測。目前已經開展了用二極管陣列檢測器和紫外檢測器來檢測三聚氰胺的研究。

魏秀蓮等[9]和樊艷等[10]分別通過二極管陣列檢測器和紫外檢測器對含乳食品中的三聚氰胺進行快速檢測，該方法的檢出限可達到0.05mg/kg，回收率可達到85%～98%，相對標準偏差≤0.1%。利用高效液相色譜法能夠快速測定牛奶、奶粉和其他奶制品中的三聚氰胺，具有操作簡便、準確性好、實用性強、適用范圍廣等特點，單一樣品的檢測時間短，樣品的提取也不復雜，適合含乳食品中三聚氰胺的大批量檢測。

4.2 液質聯用法

液質聯用又叫液相色譜—質譜聯用技術（LCMS），它將液相色譜和質譜結合起來，樣品經液相色譜分離后在質譜部分與流動相分開，被離子化后，經質譜的質量分析器將離子碎片按質量數分開，經檢測器得到質譜圖。在藥物分析、食品分析等許多領域得到廣泛應用。

孫志文等[11]建立了牛奶中三聚氰胺高效液相色譜—串聯質譜檢測方法（HPLC－MS/MS）。檢測的三對定性離子對分別為：m/z 126.7＞84.8、126.7＞68.1和126.7＞43.0，定量離子對為126.7＞84.8，采用電噴霧離子源，在多反應監測（MRM）模式下進行分析。該方法的線性檢測范圍為1～500ng/mL，相關系數為0.9996，回收率為58.2%～83.6%，相對標準偏差在4.1%～13.2%之間，方法檢測限為2μg/kg。液質聯用法對三聚氰胺的檢測限低，靈敏度高，抗干擾能力強，前處理方法操作簡便，快速，凈化效果好，可同時進行定性和定量檢測，方法的回收率、重復性、檢測限均能滿足牛奶中三聚氰胺殘留檢測的要求。

4.3 氣質聯用法

氣質聯用（GC－MS）是以氣相色譜作為分離系統，質譜作為檢測系統，借助計算機技術，將色譜的高分辨率和質譜的高靈敏度進行聯用的分析技術，被廣泛應用于復雜組分的分離與鑒定。

李鋒格等[12]建立了氣相色譜—質譜法測定牛奶中三聚氰胺含量的方法，該方法的線性檢測范圍為0.025～2mg/kg，相關系數＞0.98，回收率為84%～87%，相對標準偏差為5.7%～11.7%，檢出限為0.05mg/kg。曾凱等[13]建立了測定乳制品中三聚氰胺的氣相色譜—質譜聯用方法，該方法的線性檢測范圍為0.1～50mg/L，相關系數＞0.99，回收率為80.7%～116.8%，相對標準偏差小于9.4%，檢出限為0.10mg/kg。此方法檢測靈敏度高，回收率較好，適合牛奶中三聚氰胺確證和定量測定。但是該方法的衍生手段復雜，上機耗時較長，且質譜圖不太理想，無法實現快速檢測。

4.4 離子色譜法

離子色譜法是液相色譜法中的一種分析方法，主要是通過電導檢測器對陰、陽離子混合物進行常量和痕量分析，可用于分析在水溶液中能夠解離成陰、陽離子的物質，具有選擇性好、靈敏度高等特點。

趙新穎等[14]利用離子色譜—紫外檢測器檢測牛奶中的三聚氰胺。該法在0.10～10.0mg/L范圍內線性關系良好，相關系數為0.9998，加標回收率在92.0%～99.8%之間，檢測限為0.50μg/L。本方法簡便、快捷、準確，檢出限可以滿足國家衛生部對嬰幼兒配方乳粉和成人奶粉中三聚氰胺的限量規定要求，使用的儀器成本低、操作簡單、維護方便，可以滿足普通奶制品小型企業的需要，在實際檢測中意義重大。

5 展望

面對我國食品安全存在的突出問題和嚴峻形勢，加強食品安全檢測工作十分重要。雖然國標對三聚氰胺的使用范圍和限量指標作了明確規定，但在實際生活中超量超范圍使用的現象時有發生，因此必須繼續加強對其檢測方法的研究。目前，對三聚氰胺提取、凈化溶液的種類、配比等還沒有統一的方法規定，現有的含乳食品中三聚氰胺檢測仍存在靈敏度和檢測效率不高等問題[15]，鑒于此，將來的工作將主要是開發一種快捷、簡便的樣品檢測方法，能夠快速鑒定出含乳食品在生產和銷售各個環節是否受到三聚氰胺的污染，為實驗室檢測階段節約時間和成本。

[1]邵靜君，溫家琪，徐世文.三聚氰胺毒理學研究進展[J].現代畜牧獸醫，2007（12）：52～54.

[2]王二朋.食品安全事件沖擊下的消費者食品安全風險感知與應對行為分析[D].南京：南京農業大學，2012.

[3]Lin M.A review of traditional and novel detection techniques for melamine and its analogues in foods and animal feed[J].Frontiers of Chemical Engineering in China，2009，3（4）：427～435.

[4]國家質量監督檢驗檢疫總局.原料乳與乳制品中三聚氰胺檢測方法 GB/T 22388－2008[S].北京：中國標準出版社，2008.

[5]于 超，馬軍秋，白素琴.乳及乳制品中三聚氰胺檢測研究進展[J].乳業科學與技術，2013，36（4）：32～35.

[6]肖錫林，廖力夫，李艷春.牛奶中微量三聚氰胺的分光光度法檢測[J].應用化工，2013，42（12）：2284～2286，2300.

[7]安徽省質量技術監督局.生鮮乳中三聚氰胺的測定—酶聯免疫吸附法DB34/T 1374－2011[S].合肥：安徽省質量技術監督局，2011

[8]趙 寧，徐 飛，吳小平，等.ELISA一步法快速檢測牛奶中三聚氰胺的研究[J].中國畜牧獸醫，2011，38（4）：124～126.

[9]魏秀蓮，賈 濤，王有月.液相色譜法快速檢測牛奶中三聚氰胺的方法研究[J].飼料研究，2012（5）：68～70.

[10]樊 艷，李浩麗.液相色譜法快速檢測生鮮乳中三聚氰胺[J].農產品加工綜合刊，2012（7）：68～69，73.

[11]孫志文，閆小峰，左文霞.高效液相色譜—串聯質譜法測定牛奶中的三聚氰胺殘留[C]//中國畜牧獸醫學會.首屆中國獸藥大會暨中國畜牧獸醫學會動物藥品學分會2008年學術年會論文集.2008：218～221.

[12]李鋒格，姚偉琴，蘇 敏.氣相色譜—質譜法快速測定牛奶中的三聚氰胺和三聚氰酸[J].色譜，2009，27（2）：233～236.

[13]曾 凱，劉峙嶸，寧雅君.氣相色譜—質譜聯用法同時測定乳及乳制品中的三聚氰胺及肌酐[J].色譜，2013，31（5）：477～480.

[14]趙新穎，張經華，焦 霞.離子色譜—紫外檢測法測定牛奶中的三聚氰胺[J].現代儀器，2009，15（5）：48～50.

[15]談甜甜，朱雙良，田憬若.乳及乳制品中三聚氰胺檢測方法的研究進展[J].乳業科學與技術，2012，35（5）：27～30.