胃癌組織中VEGF和ILK的表達及意義

牛蕾

[摘要] 目的 探討胃癌組織中血管內(nèi)皮生長因子（VEGF）和整合素連接激酶（ILK）的表達及其與臨床病理特征的關系。 方法 應用免疫組化SABC法檢測48例胃癌組織中VEGF和ILK的表達情況，利用SPSS 19.0統(tǒng)計軟件分析VEGF和ILK的差異性及相關性。 結(jié)果 VEGF和ILK在胃癌組織中的表達陽性率依次為56.2%（27/48）、37.5%（18/48）。隨著腫瘤浸潤深度加深及出現(xiàn)淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移，兩者的陽性表達率明顯升高（P<0.05）；VEGF和ILK在Ⅲ、Ⅳ期胃癌中的陽性表達率明顯高于Ⅰ、Ⅱ期（P<0.01），且與患者的性別及年齡無關（P>0.05）。VEGF和ILK在胃癌組織中的表達呈正相關（r=0.379，P<0.05）。 結(jié)論 VEGF和ILK的持續(xù)遞增式表達提示其可能參與了胃癌的生長、侵襲和轉(zhuǎn)移過程。VEGF和ILK在胃癌中的表達存在正相關，ILK可能通過信號轉(zhuǎn)導途徑啟動VEGF的表達，促進腫瘤早期的血管發(fā)生和形成。

[關鍵詞] 胃癌；血管內(nèi)皮生長因子；整合素連接激酶

[中圖分類號] R735.2 [文獻標識碼] A [文章編號] 1674-4721（2015）07（b）-0047-03

[Abstract] Objective To explore the expressions of vascular endothelial growth factor （VEGF） and integrin-linked kinase （ILK） in gastric cancer tissue and their relationships with clinicopathological features. Methods Expressions of VEGF and ILK from gastric cancer tissue in 48 patients were detected by immunohistochemical strept avidin-biotin complex （SABC）.The difference and correlation between VEGF and ILK were analyzed by SPSS 19.0 statistical software. Results The positive expression rates of VEGF and ILK in gastric cancer tissue were 56.2% （27/48） and 37.5% （18/48） respectively.With deepening of depth of tumor invasion and lymphatic metastasis，the positive expression rates in the two indexes were greatly increased （P<0.05）.The positive expression rates in gastric cancer tissue at stage Ⅲ and Ⅳ were much higher than those at stage Ⅰand Ⅱ （P<0.01）.There was no relationship between positive expression rate and gender or age （P>0.05）.Expression of VEGF had a positive correlation with ILK one （r=0.379，P<0.05）. Conclusion The continuous incremental expressions of VEGF and ILK indicate that they may participate in the growth，invasion，and metastasis.VEGF has a positive correlation with ILK in the expression in gastric cancer patients.Expression of VEGF is activated by signal transduction pathway in ILK which promotes early angiogenesis and formation in tumor.

[Key words] Gastric cancer；Vascular endothelial growth factor；Integrin-linked kinase

腫瘤組織中血管的生成是腫瘤生長、發(fā)生的主要因素，而惡性腫瘤微血管網(wǎng)的早期建立及快速生長是其快速侵襲和發(fā)展的原因。血管內(nèi)皮生長因子（vascular endothelial growth factor，VEGF）是迄今發(fā)現(xiàn)的最重要的促血管生成因子[1]。整合素連接激酶（integrin-linked kinase，ILK）可以介導細胞外基質(zhì)蛋白的信號傳遞，參與了貼壁細胞的生長、增殖、移行，在腫瘤組織中高表達，抑制其活性能減弱腫瘤的侵襲和血管生成。本文通過研究胃癌中VEGF和ILK的表達，探討它們在腫瘤的生長過程中對血管的影響及其在腫瘤轉(zhuǎn)移過程中的作用。

1 資料與方法

1.1 一般資料

選取阜新市中心醫(yī)院2010年3月～2014年3月期間行根治性手術的胃癌病例標本，從中隨機選取48例。腫瘤組織標本均經(jīng)甲醛固定、常規(guī)石蠟包埋，HE染色確診為胃癌病例。全部病例術前均未行放療及化療治療。48例患者中男29例，女19例；年齡39～78歲，平均（59.27±18.21）歲；漿膜內(nèi)20例，漿膜外28例；有淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移34例。根據(jù)國際抗癌聯(lián)盟（UICC）關于胃癌TNM分期方法[2]進行臨床分期：Ⅰ期10例，Ⅱ期14例，Ⅲ期21例，Ⅳ期3例。

1.2 試劑及方法

1.2.1 主要試劑 鼠抗人ILK單克隆抗體，鼠抗人VEGF單克隆抗體，SABC免疫組化染色試劑盒，DAB顯色盒，均購自福州邁新生物技術開發(fā)有限公司。

1.2.2 方法 用免疫組織化學染色SABC法觀察VEGF和ILK在胃癌中的表達分布情況。為保證判定結(jié)果的一致性，每次染色均設有已經(jīng)證實的陽性表達的VEGF和ILK切片對照作為染色質(zhì)量控制標準。以PBS代替一抗作為陰性對照，由2名有經(jīng)驗的病理醫(yī)師獨立觀察切片。

1.2.3 結(jié)果判定 在200倍視野下隨機選取5個視野，記數(shù)每個視野中腫瘤上皮細胞的染色情況，取平均值。VEGF和ILK陽性著色位于細胞質(zhì)中呈彌散或散在的棕黃色顆粒。根據(jù)瘤組織中陽性細胞的有無及數(shù)量，將其分為陰性（-）：未見陽性細胞；弱陽性（+）：陽性細胞少于10%；陽性（++）：陽性細胞11%～30%；強陽性（+++）：陽性細胞不低于30%[3]。

1.3 統(tǒng)計學處理

采用SPSS 19.0軟件統(tǒng)計包分析，計數(shù)資料以率表示，采用χ2或Fisher精確概率法檢驗。相關性分析采用Spearman相關分析法。以P<0.05為差異有統(tǒng)計學意義。

2 結(jié)果

2.1 胃癌組織中VEGF與ILK的表達情況

VEGF主要表達在細胞漿，呈棕褐色顆粒狀（圖1）。ILK主要也表達在細胞漿，呈棕褐色顆粒狀（圖2）。本組中VEGF的陽性表達率為56.2%（27/48），ILK的陽性表達率為37.5%（18/48）。VEGF和ILK在胃癌組織中的表達與性別、年齡無關（P>0.05），VEGF和ILK在浸潤深度累及漿膜、有淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移、TNM（Ⅲ+Ⅳ）期中的組陽性表達明顯高于在浸潤深度未累及漿膜，無淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移、TNM（Ⅰ+Ⅱ）期中的陽性表達，差異有統(tǒng)計學意義（P<0.05）（表1）。

2.2 胃癌中VEGF與ILK之間的關系

3討論

腫瘤在早期發(fā)生時僅以一種微小的、無癥狀表現(xiàn)的腫瘤灶形式存在，腫瘤灶限制腫瘤對氧及營養(yǎng)的利用，使其處于被動限制狀態(tài)，但是當腫瘤內(nèi)新生血管形成之后，腫瘤灶的局部被動限制狀態(tài)被打破，腫瘤病灶快速發(fā)展，新生血管網(wǎng)也迅速建立，這種變化帶來了腫瘤尤其是惡性腫瘤的侵襲性增強，遠處轉(zhuǎn)移能力提高[4-5]。因此，腫瘤的血管形成以及新生血管網(wǎng)的建立在腫瘤的發(fā)生、發(fā)展、侵襲及轉(zhuǎn)移中發(fā)揮著重要作用，已成為腫瘤治療的新靶點之一[6]，尋找到血管生成的機制，有效控制血管生成的方法就有希望控制腫瘤的生長和轉(zhuǎn)移，從而找到治療腫瘤尤其是惡性腫瘤的手段和方法。

目前已知促進血管生成的細胞因子有VEGF、表皮細胞生長因子、轉(zhuǎn)化生長因子等，而VEGF及其受體是目前公認的促進新生血管形成及血管網(wǎng)建立的關鍵因素，它能夠促使血管內(nèi)皮細胞進行有絲分化、增殖、移行并最終形成新生血管，進一步再建立新生血管網(wǎng)，是目前已知的刺激腫瘤血管生成能力最強的細胞因子。有研究表明，VEGF在腫瘤組織中的高表達與腫瘤浸潤深度、惡性程度、轉(zhuǎn)移情況、患者預后不良密切相關[7]。ILK廣泛表達于黏著斑中，是磷脂酰肌醇激酶（PI3K）的作用底物，是蛋白激酶B（Pkb/Akt）和糖原合成酶激酶3（GSK-3）重要的上游激酶。在細胞基質(zhì)之間及細胞外信號傳遞具有重要的作用，可以調(diào)節(jié)諸多細胞的生長、分裂、增殖、存活、遷移和侵襲，在血管形成的化學信號傳導中起著重要作用[8-9]。研究表明，在VEGF的轉(zhuǎn)錄和表達上ILK參與并調(diào)控整個過程，增加血管內(nèi)皮細胞的移動性和通透性，并促進血管內(nèi)皮細胞的分裂和增殖，具有顯著促進微血管發(fā)生和新生血管網(wǎng)建立的作用。

本研究發(fā)現(xiàn)，VEGF和ILK在胃癌組織中的表達與性別、年齡無關，在浸潤深度累及漿膜、有淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移、TNM（Ⅲ+Ⅳ）期中的陽性表達明顯高于浸潤深度未累及漿膜、無淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移、TNM（Ⅰ+Ⅱ）期中的表達，這與李勝水等[10]的研究相符，表明VEGF和ILK在胃癌的發(fā)生發(fā)展中起重要作用，尤其是在浸潤程度高、有淋巴轉(zhuǎn)移的TNM（Ⅲ+Ⅳ）期，說明在腫瘤成熟期后，大量高表達的VEGF繼續(xù)促進血管生成，而腫瘤內(nèi)血管網(wǎng)已經(jīng)基本充分建立，它的生長速度及擴張程度已經(jīng)能夠達到自我調(diào)節(jié)和控制，但腫瘤的發(fā)展已經(jīng)不滿足自身血管網(wǎng)的完善，它要繼續(xù)擴展占領，而人類身體已然成為腫瘤的宿主。VEGF與ILK在胃癌中的表達存在正相關，說明它們之間存在某種正反饋機制，可能由活化的ILK通過激活Pkb/Akt-473絲氨酸，使mTOR/FRAP-2448磷酸化水平增高，激活了Akt/iNOS通路，促進HIF-1α產(chǎn)生，通過iNOS調(diào)節(jié)NO濃度、誘導細胞增殖，從而起到了促血管生成的作用[11-12]。Dulak等[13]和Kubo等[14]認為，NO又可增加VEGF的合成。機制可能為通過增強VEGF基因啟動子的活性來增加VEGF表達。Konopha等[15]研究也表明NO在VEGF促血管內(nèi)皮細胞增殖和遷移中起重要作用，而且NO還發(fā)揮參與VEGF的促血管通透性的作用。

總之，腫瘤的血管形成以及新生血管網(wǎng)的建立在腫瘤的發(fā)生、發(fā)展、侵襲及轉(zhuǎn)移中發(fā)揮著重要作用，而通過細胞因子的調(diào)節(jié)可能是解決和控制腫瘤血管生成及血管網(wǎng)建立的新的手段和方法。

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（收稿日期：2015-03-02 本文編輯：衛(wèi) 軻）