耬斗菜提取物的抗衰老作用

敖恩寶力格 烏達巴拉 張園園 (內蒙古師范大學生命科學與技術學院，內蒙古 呼和浩特 010022)

果蠅生命周期短、繁殖快、飼養方便，因此與其他生物相比更有利于衰老實驗的研究〔1，2〕。耬斗菜屬毛茛科耬斗菜屬植物，是蒙古族藥用及食用野生植物，具有通經活血、催產、下胎衣、愈傷、止痛等功效，主要活性成分是生物堿〔3，4〕。本實驗旨在探討耬斗菜提取物對黑腹果蠅的抗衰老作用。

1 材料與方法

1.1 材料與儀器 耬斗菜采自呼和浩特市大青山。采摘后自然晾干，取全草粉碎過100目的篩子后保存于陰涼干燥處。黑腹果蠅由內蒙古師范大學生命科學與技術學院遺傳實驗室提供。基本培養基原料為瓊脂粉(天津市英德生化試劑有限公司)、丙酸(北京百利化學品開發中心)、乙醚(天津市津東天正精細化學試劑)、玉米粉、紅糖、酵母粉。其他化學試劑均為國產分析純試劑。實驗用水為二次石英亞沸蒸餾水。主要儀器有MGC-350BP-2光照培養箱(上海一恒科技有限公司)，DC-2006型超級數控恒溫水槽(上海天平儀器技術有限公司)，UV-2000紫外-可見分光光度計(北京萊伯泰科有限公司)，XMT數控超級恒溫槽(上海長豐計量儀器儀表廠)和HVE-50全自動高壓滅菌鍋(HIRA YAMA制造公司)等。

1.2 提取方法 準確稱取耬斗菜粉末1.00 g于100 ml錐形瓶中，加入80%濃度的乙醇15 ml，浸泡6 h，超聲輔助提取(12 kHz，10 min)，過濾，濾液用冷凍干燥儀干燥，稱重，然后用為10%二甲基亞砜(DMSO)溶液使其溶解并用蒸餾水稀釋至一定體積。

1.3 果蠅壽命的測定 培養果蠅的基本培養基原料為瓊脂粉、丙酸、乙醚、玉米粉、紅糖和酵母粉。收集8 h內孵出的雌雄果蠅各600只，相同性別的果蠅以100只為單位隨機分為6個小組，雌雄同步分瓶培養。將其中一組接于基礎培養基作為對照組，其余兩組分別培養在耬斗菜提取物(0.06 mg/100 g和0.12 mg/100 g)培養基上作為實驗組。各組均放在(25±1)℃的培養箱中培養，每3 d更換1次培養基。自接種次日開始觀察和記錄各飼養瓶內果蠅死亡數，直至全部死亡。以每組存活天數的總和除以該組果蠅數目作為平均壽命，每組中最后死亡的10只果蠅壽命的平均數為最高壽命。

1.4 果蠅性活力測定 連續喂養15 d后做性活力測定。雌雄果蠅1∶1配對，記錄40 min內交配的果蠅對數、交配潛伏期、交配時長。如果40 min后交尾果蠅沒有分開，則等其自然分開并記錄交尾時長。

1.5 果蠅繁殖力測定 對上述果蠅進行性活力測定之后，將同一小組中的雌雄果蠅以1∶1比例置于培養管內進行交配。3管/組、每管30對果蠅。置于(25±1)℃的培養箱內孵育，第7天清除親本。第13天開始統計子代成蟲，連續統計5 d，記錄每管果蠅數目。

1.6 統計學處理 采用SPSS10.0軟件行t檢驗、單因素方差分析。

2 結果

2.1 耬斗菜提取物對果蠅壽命的影響 實驗組平均壽命均高于對照組(P＜0.05)。0.06 mg/100 g劑量組雌雄果蠅的壽命分別延長了10 d和3 d;0.12 mg/100 g劑量組分別延長了11 d和4 d。對于雌雄果蠅，實驗組最高壽命均高于對照組，但無顯著性差異(P＞0.05)。雌果蠅平均壽命差異極顯著(P＜0.01)，雄果蠅平均壽命差異顯著(P＜0.05)。0.06 mg/100 g劑量組的雌雄果蠅間平均壽命差異顯著(P＜0.05)，而0.12 mg/100 g實驗組的雌雄果蠅之間有極顯著的差異(P＜0.01)。見表1。

2.2 耬斗菜提取物對果蠅性活力的影響 實驗組交配對數明顯多于對照組(P＜0.05)，交配率提高7.8% ～18.9%，交配潛伏期相對短，交配時間明顯延長(P＜0.01)。見表2。

2.3 耬斗菜提取物對果蠅繁殖力的影響 各實驗組子代果蠅數較對照組均有所增加，增值率達48.3% ～65.2%，0.12 mg/100 g劑量組子代雄果蠅數目與對照組比較差異顯著(P＜0.01)。見表3。

表1 耬斗菜提取物對果蠅壽命的影響(n=200)

與對照組比較:1)P＜0.01，2)P＜0.05;與雌性比較:3)P＜0.05，4)P＜0.01下表同

表2 耬斗菜提取物對果蠅性活力的影響

表3 耬斗菜提取物對果蠅繁殖力的影響(±s)

表3 耬斗菜提取物對果蠅繁殖力的影響(±s)

組別 代果蠅數雌蠅(只) 雄蠅(只) n 增殖率(%F1)21.25±6.0120.86±6.122010 0.06 mg/100 g組 29.08±8.8532.34±5.5529848.30.12 mg/100 g組 33.12±7.2937.69±7.5841)對照組33265.2

3 討論

壽命是評價受試生物抗衰老作用的重要指標，田金強等〔5〕研究發現，阿魏菇多糖能夠明顯延長果蠅壽命。李連德等〔6〕研究表明，不同來源的蟲草多糖對果蠅均有不同程度的延壽作用。虞磊等〔7〕研究發現蜜環菌菌索多糖可顯著延長果蠅壽命。陳葆荃等〔8〕研究證實，枸杞子提取物能夠延長雌果蠅平均壽命和半數成活期。本研究結果表明耬斗菜提取物具有顯著延長雌果蠅壽命、增強果蠅性活力及繁殖能力的作用。

性活力和繁殖能力可從生理角度反映受試生物的抗衰老作用。阿娃漢等〔9〕研究發現，黑果枸杞色素能夠延長果蠅壽命，但對提高果蠅性活力無效。李春紅等〔10〕研究發現，南沙參具有明顯增強小鼠和果蠅性活力的作用，并指出其作用與清除自由基有關。楊冬梅等〔11〕的研究表明，凍干胡蜂蜂蛹可顯著延長果蠅壽命，并增強果蠅繁殖力。王沂等〔12〕研究發現，厚樸酚具有延緩衰老、促進果蠅繁殖力及提高生育能力的作用。儀慧蘭等〔13〕表明，靈芝浸提液具有加速果蠅幼蟲的生長發育、增加子代數、延長果蠅壽命。本實驗研究結果推測適量的耬斗菜提取物能使果蠅受精卵生存力提高。

1 王塔娜，邰麗華，富新年.藻藍蛋白(Phycocyanin)對果蠅壽命的影響〔J〕.國際遺傳學雜志，2010;33(4):215-7.

2 王塔娜，邰麗華，圖雅嘎日拉，等.節旋藻藻膽蛋白對果蠅性活力及繁殖能力的影響〔J〕.內蒙古師范大學學報(自然科學版)，2010;39(6):608-11.

3 林 镕，陳藝林.中國植物志〔M〕.北京:科學出版社，1985:43.

4 陳四寶，王立為.耬斗菜族藥用植物化學成分及資源利用概況〔J〕.中藥學，2001;32(11):3-5.

5 田金強，朱克瑞，李新明，等.阿魏菇多糖的抗氧化功能及其對果蠅壽命的影響〔J〕.食品科學，2006;27(4):223-6.

6 李連德，樊美珍，李增智.14種蟲草多糖對果蠅成蟲壽命影響的試驗〔J〕.微生物學通報，2000;27(6):427-8.

7 虞 磊，沈業壽，吳建民.蜜環菌菌索多糖抗衰老作用研究〔J〕.中成藥，2006;28(7):994-6.

8 陳葆荃，謝梅林，錢曾年.枸杞子提取物對小鼠免疫功能和果蠅壽命的影響〔J〕.中國野生植物資源，1995;2(8):5-7.

9 阿娃漢，陳 瑛，陶大勇.黑果枸杞色素對果蠅性活力及壽命影響的研究〔J〕.塔里木法大學學報，2007;19(3):19-20.

10 李春紅，李 泱，李新芳.南沙參多糖對小鼠和果蠅性活力的影響〔J〕.生殖醫學雜志，2002;11(4):213-7.

11 楊冬梅，李俊年，張 麗.凍干胡蜂蜂蛹對果蠅壽命和繁殖性能的影響〔J〕.天然產物研究與開發，2005;17(4):450-2.

12 王 沂，吳 翔，翁新楚.厚樸酚對果蠅壽命和繁殖力的影響〔J〕.四川動物，2006;25(4):700-2.

13 儀慧蘭，高翠蓮.靈芝浸提液對果蠅生物學特性的影響〔J〕.山西大學學報，2000;23(3):146-9