復方丹皮酚醇溶液的皮膚毒性及刺激性的實驗研究

劉曉紅，孫 昕，焦 敬，宋來濤，楊 惠，張倩倩，趙 荻，江彬彬

1 材料與方法

1．1 一般資料

1．1．1 藥品及制備 復方丹皮酚醇溶液的處方組成：丹皮酚 0．5 g，麝香草酚 0．1 g，水楊酸 1 g，稀氨溶液100 ml，70%乙醇適量。制備方法：取丹皮酚，麝香草酚，水楊酸，稀氨溶液加70%乙醇適量，攪勻使溶解，濾過，加著色劑，在自濾器上添加70%乙醇使成全量 1000 ml，攪勻，即得。

1．1．2 實驗動物 健康成年無傷日本大耳白兔12只，體重 1．8～2．4 kg，健康無傷成年豚鼠 12 只，體重280～310 g，雌雄各半，雌性無孕，解放軍88醫院中心實驗室提供。實驗條件：溫度為18～29℃，相對濕度為40%～70%。

1．2 評價方法

1．2．1 皮膚急性毒性實驗 主要觀察家兔的行為活動、皮膚、飲食、體重和死亡情況。

1．2．2 皮膚刺激反應評分標準［1］見表 1。

1．2．3 皮膚刺激強度評分標準 按皮膚刺激反應評分標準評分，并計算平均分值以判斷刺激強度：①無刺激，分值 0～0．49；②輕度刺激，分值 0．5～2．99；③中度刺激，分值 3．0～5．99；④重度刺激，分值 6．0～8．0。

1．2．4 統計學方法 采用SPSS16．0統計軟件，計量數據以±s表示，組間比較用t檢驗；計數資料用百分比表示，組間比較用χ2檢驗，P≤0．05為差異有統計學意義。

表 4 復方丹皮酚醇溶液外用對豚鼠皮膚的刺激反應

2 實驗方法

2．1 皮膚急性毒性實驗 將成年健康日本大耳白兔12只，隨機分3組，每組4只。在家兔右側背部脫毛50 cm2，24 h后分別涂基質（對照組）、臨床應用濃度（小劑量組）及臨床應用濃度2倍（大劑量組）的復方丹皮酚醇溶液各1 ml，用膠布固定，連續觀察1周家兔的行為活動、皮毛光澤、飲食體重和死亡情況。并與對照組比較，如對完整皮膚無毒性反應，則在其左側背部用細砂紙（＃400）在脫毛區造成擦傷，使皮膚出現密集出血點，在擦傷部位涂藥，觀察指標同上［2］。

2．2 皮膚刺激實驗

2．2．1 急性皮膚刺激實驗 將健康成年豚鼠 12只，分為2組，每組6只。于實驗前24 h將豚鼠脊柱兩側去毛，不損傷表皮。分別左側去毛區涂小劑量及大劑量的復方丹皮酚醇溶液各1 ml，右側涂基質作為對照，用膠布固定。給藥24 h后，用溫水洗去殘留藥物和基質， 于 1、12、24、48、72 h 仔細觀察局部皮膚反應，有無紅斑、水腫、出血點等病變，按表1進行評分［3－4］。

2．2．2 多次皮膚刺激實驗 動物分組、受試皮膚準備及涂藥方法同 2．2．1，連續涂藥 7 d，1 次 ／d，停藥后觀察72 h，記錄局部紅斑水腫情況，觀察涂藥部位是否有出血點、色素沉著、皮膚粗糙（或菲薄）等情況，并記錄其發生時間及消退時間。

2．2．3 破損皮膚刺激實驗 動物分組、受試皮膚準備同2．2．1，在脫毛部位造成局部擦傷，以滲血為度，分別涂以小劑量、大劑量復方丹皮酚醇溶液及基質各 1 ml，具體方法及結果觀察同 2．2．1。

表 2 復方丹皮酚醇溶液外用完整和破損皮膚對白兔體重的影響（kg，±s）

表 2 復方丹皮酚醇溶液外用完整和破損皮膚對白兔體重的影響（kg，±s）

給藥前 完整皮膚給藥7 d后 破損皮膚給藥7 d后對照組 2．23±0．16 2．32±0．15 2．37±0．12小劑量組 2．20±0．16 2．27±0．17 2．36±0．10大劑量組 2．26±0．17 2．31±0．13 2．37±0．14

3 結果

3．1 皮膚急性毒性實驗 觀察涂藥后的白兔1周，三組白兔飲食、口腔黏膜、眼睛、皮膚毛發、四肢活動均無異常改變，體重無異常變化（表2），無中樞神經系統異常表現，未見全身中毒反應，無死亡。結果顯示臨床應用濃度和臨床應用濃度2倍的復方丹皮酚醇溶液外用在白兔完整或破損皮膚上，均未引起出現急性毒性反應。

3．2 急性皮膚刺激實驗 結果顯示豚鼠的完整皮膚外用復方丹皮酚醇溶液后未見紅斑、水腫及出血點等反應。見表3。

表 3 復方丹皮酚醇溶液對豚鼠皮膚急性刺激反應

3．3 多次皮膚刺激實驗 結果顯示豚鼠完整皮膚多次外用復方丹皮酚醇溶液，局部未見紅斑、水腫、出血點、色素沉著、皮膚粗糙（或菲薄）等情況。評分結果見表4。

3．4 破損皮膚刺激實驗 結果顯示不同濃度的復方丹皮酚溶液對豚鼠破損皮膚刺激評價的平均分值均＜0．49。

4 討論

皮膚病是日常生活中的常見病和多發病，尤其在戰爭中，已成為非戰斗減員的主要因素之一，嚴重影響官兵訓練和作戰［5］。蟲咬性皮炎又名丘疹性蕁麻疹，是被蟲類叮咬，接觸其毒液或蟲體的粉毛而引起的皮炎。較為常見的有跳蚤、虱類、蠓、刺毛蟲、飛蛾、蚊、臭蟲、蜂等，以春、夏、秋季多見，尤其在野外訓練及演習期間，發病率較高。由于昆蟲種類的不同和機體反應性的差異，可引起叮咬處不同的皮膚反應。一般為紅色風團樣損害，有的可有偽足，中央可有小水皰，奇癢難忍。以往多采用激素軟膏治療，僅有治療的效果，沒有預防的作用，長期應用還有一定的不良反應。復方丹皮酚醇溶液不僅能有效的治療蟲咬性皮炎，還能防止蚊蟲的叮咬，做到了防治結合。丹皮酚具有很好抗炎、抗過敏作用，能顯著抑制由角叉菜膠引起的大鼠足腫脹，可明顯降低小鼠腹腔毛細血管通透性［6］。麝香草酚具有宜人的香氣和消毒抗菌止癢作用［7］。水楊酸具有抗菌、止癢止汗的作用，還可以促進藥物經皮吸收及加速病灶消散吸收［8］。 稀氨溶液有驅蚊、防蟲蜇咬的作用［9］。

為了臨床用藥安全，本研究中做了皮膚急性毒性試驗和皮膚刺激試驗，在皮膚急性毒性試驗中，結果顯示臨床應用濃度和臨床應用濃度2倍的復方丹皮酚醇溶液外用在完整或破損白兔皮膚上，白兔飲食、口腔黏膜、眼睛、皮膚毛發、四肢活動均無異常改變，體重無異常變化，未引起急性毒性反應。在皮膚刺激試驗中，結果顯示不同濃度的復方丹皮酚醇溶液外用于豚鼠的完整和破損皮膚，局部未見紅斑、水腫、出血點、色素沉著、皮膚粗糙（或菲薄）等情況，均未見刺激反應。本研究顯示了復方丹皮酚醇溶液具有良好的皮膚安全性，可安全用于臨床，為下一步臨床應用提供了理論依據。復方丹皮酚醇溶液制作工藝簡單，原料價格低廉，安全性高，不良反應小，有較好的應用前景。

［1］袁伯俊，王治喬．新藥臨床前安全性評價與實踐［M］．北京：軍事醫學科學院出版社，1997：152－154．

［2］徐叔云．藥理實驗方法學［M］．北京：人民衛生出版社，2001：1861－1862．

［3］吳春艷．氟曲馬唑乳膏的家兔皮膚刺激性試驗［J］．藥學與臨床研究，2010，18（5）：505－506．

［4］劉旭琴，馮玉香，程衛東．黃連酊對家兔皮膚的刺激性研究［J］．西部中醫藥，2012，25（6）：13－14．

［5］劉曉紅，宋來濤，楊 惠，等．濟南軍區某部隊皮膚病情況調查［J］．實用醫藥雜志，2010，27（1）：73．

［6］胡云飛，徐國兵．牡丹皮及其主要成分丹皮酚的藥理作用研究進展［J］．安徽醫藥，2014，18（4）：589－590．

［7］黃 鵬，黃和平，粟進才．麝香草酚電化學檢測方法的研究［J］．中國藥事，2014，24（8）：747．

［8］段沅杏，李千鵬，張承明．水楊酸測定方法現狀分析［J］．云南化工，2014，37（8）：812.

［9］李建華，袁天錫，任國荃，等．中國人民解放軍醫療機構制劑規范［S］．北京：中國人民解放軍總后勤部衛生部，2002：128．