痰脫落細(xì)胞涂片結(jié)合TCT、痰沉渣瓊脂石蠟雙包埋片法在肺癌高危人群篩查診斷中的應(yīng)用

林淑端??郭智俊??陳石橋等

[摘要] 目的 探討痰脫落細(xì)胞涂片結(jié)合膜式超薄液基細(xì)胞學(xué)檢測（thin-prep cytology test，TCT）技術(shù)、痰沉渣瓊脂石蠟雙包埋片法（sputum sediment AGAR paraffin double embedding method，APSM）在肺癌高危人群篩查診斷中的應(yīng)用價值。 方法 選取2014年1月～2015年6月南海經(jīng)濟開發(fā)區(qū)人民醫(yī)院呼吸內(nèi)科、居民健康體檢及工廠體檢可疑肺癌患者（吸煙史、胸部影像學(xué)檢查陽或陰，臨床癥狀有咳痰咯血）189例，分別進行痰脫落細(xì)胞涂片結(jié)合TCT與APSM檢查，然后再行TCT與APSM細(xì)胞學(xué)比較分析。 結(jié)果 在189例疑似肺癌患者痰液標(biāo)本中，自熒光支氣管鏡（AFB）技術(shù)和手術(shù)切除標(biāo)本病理組織學(xué)檢查確診為肺癌179例占94.71%（179/189）。痰脫落細(xì)胞涂片、TCT及痰沉渣瓊脂石蠟雙包埋片法檢測肺癌細(xì)胞結(jié)果之間相比較（P均>0.05），痰脫落細(xì)胞涂片結(jié)合TCT、痰沉渣瓊脂石蠟雙包埋片法檢測肺癌細(xì)胞檢出陽性率為97.21%顯著地高于TCT結(jié)合痰沉渣瓊脂石蠟雙包埋片法的84.92%（P<0.05）。 結(jié)論 運用子宮頸脫落細(xì)胞學(xué)診斷的TCT技術(shù)、胸腹水細(xì)胞學(xué)檢查APSM檢查技術(shù)聯(lián)合應(yīng)用于痰脫落細(xì)胞中，減少因取材的重復(fù)性、延期診斷等給患者帶來的生活壓力，旨在提高陽性診斷率，進而達(dá)到早期發(fā)現(xiàn)、診斷、治療，減少由于遲后診斷帶來的肺癌的死亡率。

[關(guān)鍵詞] 痰細(xì)胞學(xué)；TCT；痰沉渣切片法；肺癌

[中圖分類號] R734.2 [文獻標(biāo)識碼] B [文章編號] 2095-0616（2015）14-156-04

Application of sputum exfoliated cells smear combined with TCT， sputum sediment AGAR paraffin double embedding method in screening and diagnosis of high risk group with lung cancer

LIN Shuduan1 GUO Zhijun2 CHEN Shiqiao1 PAN Qisen1 HUANG Qianping1 JIANG Shan1 WU Yehui1

1.Nanhai Economic Development Zone People's Hospital， Foshan 528234， China； 2.Nanhai Second People's Hospital， Foshan 528200， China

[Abstract] Objective To explore the application value of sputum exfoliated cells smear combined with ThinPrep cytology test （TCT） and sputum sediment AGAR paraffin double embedding （APSM） method in screening and diagnosis of high risk group with lung cancer. Methods 189 suspected patients with lung cancer （history of smoking， chest imaging examination positive or negative， clinical symptoms with expectoration and hemoptysis） who were from department of respiration medicine of Nanhai economic development zone People's Hospital， resident's physical examination and factory physical examination from January 2014 to June 2015 were examined with sputum exfoliated cells smear combined with TCT and APSM， and then cytology of TCT and APSM were compared and analyzed. Results In the sputum specimen of 189 suspected patients with lung cancer， 179 patients were confirmed as lung cancer by auto fluorescence bronchoscope （AFB） technology and histopathologic examination of surgical specimens， which accounted for 94.71% （179/189）. Examination results of sputum exfoliated cells smear， TCT and APSM were compared （P>0.05）. Positive rate of lung cancer cell that tested by sputum exfoliated cells smear and APSM was 97.21%， which was significantly higher than 84.92% that tested by TCT combined with APSM （P<0.05）. Conclusion Application of TCT of detachment of cervix cytodiagnosis combined with APSM of pleural and ascitic fluid cytodiagnosis in sputum exfoliated cells can alleviate patients life pressure from repeated drawing materials and delayed diagnosis to improve positive diagnostic rate and achieve early detection， diagnosis and treatment， so as to decrease the mortality rate of lung cancer due to delayed diagnosis.

[Key words] Sputum cytology； TCT； APSM； Lung cancer

肺癌是全球最常見的惡性腫瘤之一，其發(fā)病率及病死率增長迅速且居高不下。在我國城市中首位惡性腫瘤就是肺癌，成為對人類健康和生命威脅最大的惡性腫瘤之一，在村鎮(zhèn)人口發(fā)病率則居第4位，我國每年因肺癌致死的病例數(shù)約40萬例，造成了巨大的社會及患者家庭的經(jīng)濟負(fù)擔(dān)[1-2]。肺癌死亡的人數(shù)已經(jīng)超過了乳腺癌、前列腺癌和結(jié)直腸癌死亡人數(shù)的總和，早期肺癌因無癥狀而發(fā)現(xiàn)困難，已成為一個嚴(yán)重的公共健康問題[3]。其增長速度位列所有癌癥類別之首，成為對人類健康和生命威脅最大的惡性腫瘤之一[4-5]。肺癌早期無特殊癥狀出現(xiàn)，80%的患者在診斷時發(fā)現(xiàn)已經(jīng)到了晚期，雖然經(jīng)過治療，但是患者生存時間很短[6]。痰細(xì)胞學(xué)直接涂片法、胸部X線檢查，診斷肺癌敏感性低，此方法簡便易行，但由于痰液中含有大量黏液，涂片厚薄不均，致使痰涂片癌細(xì)胞的陽性檢出率降低，假陰性率（又稱漏診率）增高，肺癌早期診斷受到很大影響[7]。尋找新的肺癌診斷方法做到早確診、早治療，對高危人群進行篩查，并改善肺癌患者預(yù)后顯得尤為重要。TCT是一種明顯優(yōu)于傳統(tǒng)涂片法的檢查方法，APSM幾乎能收集送檢標(biāo)本中的全部細(xì)胞，常可保持一定的組織結(jié)構(gòu)，且無細(xì)胞重疊，觀察起來比較清晰。本研究旨在探討痰脫落細(xì)胞涂片結(jié)合TCT、痰沉渣瓊脂石蠟雙包埋片法在肺癌高危人群篩查診斷中的應(yīng)用價值，現(xiàn)報道如下。

1 資料與方法

1.1 一般資料

選取2014年1月～2015年6月南海經(jīng)濟開發(fā)區(qū)人民醫(yī)院呼吸內(nèi)科、居民健康體檢及工廠體檢可疑肺癌患者（吸煙史、胸部影像學(xué)檢查陽或陰，臨床癥狀有咳痰咯血）189例，其中男127例，女62例，年齡29～78歲，平均（58.7±5.7）歲；納入標(biāo)準(zhǔn)：無嚴(yán)重伴發(fā)疾病，患者主動配合治療、檢查，經(jīng)本院倫理委員會批準(zhǔn)，知情并簽署同意書；排除標(biāo)準(zhǔn)：患者依從性片，伴有呼吸衰竭、心力衰竭等嚴(yán)重伴發(fā)疾病。對每一例患者標(biāo)本均同時采用痰脫落細(xì)胞涂片、膜式超薄液基細(xì)胞學(xué)檢測（TCT）技術(shù)及痰沉渣瓊脂石蠟雙包埋片法進行細(xì)胞學(xué)檢查。

1.2 方法

1.2.1 標(biāo)本采集 指導(dǎo)患者早晨咳痰之前刷牙漱口、喝開水一杯，以避免食物殘渣和細(xì)菌的污染。讓其深呼吸后用力咳痰，痰量至少5～6口，咳出肺深部的痰液，盡量選擇含血絲部分或粘液絲部分的新鮮痰，痰量應(yīng)3～5mL。收集在盒內(nèi)送檢。送檢后立即做對每一例患者標(biāo)本均同時采用傳統(tǒng)涂片、液基細(xì)胞學(xué)和痰沉渣瓊脂石蠟雙包埋切片法進行檢查。

1.2.2 痰脫落細(xì)胞涂片法 將送檢的痰液用竹簽挑取灰白色或帶血絲均勻涂于2張玻片，每張玻片約有痰液0.2mL，厚約1mm。置于95%乙醇固定10min。蘇木素-伊紅（HE）染色、封片。

1.2.3 TCT法 子宮頸脫落細(xì)胞學(xué)診斷的TCT技術(shù)，是以窺陰器暴露宮頸，擦凈宮頸的分泌物，用特制的一次性無菌標(biāo)本采集刷采集宮頸口及頸管的脫落上皮細(xì)胞，將刷頭放入盛有細(xì)胞保存液的液基瓶內(nèi)漂洗。將沉淀物倒入盛有ThinPrep保存液中，輕搖至細(xì)胞塊懸浮，置于4℃冰箱保存待檢。15min經(jīng)制成超薄細(xì)胞涂片，95%乙醇固定15min，然后采用液基薄層細(xì)胞學(xué)制片系統(tǒng)處理、制片、染色、封片、閱片、分析。

1.2.4 痰沉渣瓊脂石蠟雙包埋片法 胸腹水細(xì)胞學(xué)檢查APSM檢查技術(shù)，取新鮮胸腹水（夏季不超過2h，冬季不超過4h）置于2～4個50mL離心管內(nèi)，每管50mL，2000r/min，離心10～15min，棄去上清液，吸出沉積物涂片4～8張，自然干燥后95%乙醇固定30min，HE染色。均在52℃恒溫箱中進行，蘇木素復(fù)染，梯度乙醇脫水、透明、浸蠟、石蠟包埋、3Lm厚切片，HE染色。

1.3 診斷標(biāo)準(zhǔn)

均采用雙盲由同一細(xì)胞診斷學(xué)高年資病理醫(yī)師閱，對病理學(xué)涂片中的瘤細(xì)胞采用巴氏五級法進行分級：Ⅰ級：涂片內(nèi)無異形或不正常的細(xì)胞；Ⅱ級：細(xì)胞學(xué)有異形，但無惡性證據(jù)。Ⅲ級：性質(zhì)不明、可疑惡性腫瘤細(xì)胞，不容易肯定良或惡性質(zhì)；Ⅳ級：細(xì)胞有惡性特征，高度可疑惡性腫瘤細(xì)胞（重度核異質(zhì)或形態(tài)基本符合癌細(xì)胞標(biāo)準(zhǔn)，但由重度核異質(zhì)或形態(tài)基本符合癌細(xì)胞標(biāo)準(zhǔn)，需要核實）；Ⅴ級：見有癌細(xì)胞，細(xì)胞有明顯惡性特征。在以上的分級中，Ⅰ級、Ⅱ級屬于陰性診斷；Ⅲ級、Ⅳ級屬于可疑而不確定的診斷；V級屬于陽性診斷。

1.4 統(tǒng)計學(xué)處理

采用SPSS16.0軟件包進行分析，計數(shù)資料采用x2檢驗，以P<0.05為差異有統(tǒng)計意義。

2 結(jié)果

2.1 痰脫落細(xì)胞涂片結(jié)合TCT、痰沉渣瓊脂石蠟雙包埋片法檢測肺癌細(xì)胞結(jié)果的比較

在189例疑似肺癌患者痰液標(biāo)本中，自熒光支氣管鏡（AFB）技術(shù)和手術(shù)切除標(biāo)本病理組織學(xué)檢查確診為肺癌179例占94.71%（179/189）。痰脫落細(xì)胞涂片、TCT及痰沉渣瓊脂石蠟雙包埋片法檢測肺癌細(xì)胞結(jié)果之間比較差異無統(tǒng)計學(xué)意義（P均>0.05）。見表1。

表1 痰脫落細(xì)胞涂片結(jié)合TCT、痰沉渣瓊脂石蠟雙包埋片法檢測肺癌細(xì)胞結(jié)果

檢測方法 n 陽性[n（%）] 可疑

TCT 179 149（83.24） 6

APSM細(xì)胞學(xué) 179 140（78.21） 5

痰脫落細(xì)胞涂片 179 132（73.74） 3

x2 4.78

P >0.05

2.2 TCT+APSM細(xì)胞學(xué)與痰脫落細(xì)胞涂片檢測肺癌細(xì)胞結(jié)果比較

痰脫落細(xì)胞涂片結(jié)合TCT、痰沉渣瓊脂石蠟雙包埋片法檢測肺癌細(xì)胞檢出陽性率為97.21%顯著地高于TCT結(jié)合痰沉渣瓊脂石蠟雙包埋片法的84.92%（P<0.05）。見表2。

表2 TCT+APSM細(xì)胞學(xué)與痰脫落細(xì)胞涂片檢測肺癌細(xì)胞結(jié)果比較

檢測方法 n 陽性[n（%）]

TCT+APSM細(xì)胞學(xué) 179 174（97.21）

痰脫落細(xì)胞涂片 179 132（73.74）

x2 39.69

P <0.05

3 討論

肺癌是一種嚴(yán)重威脅人類健康和生命的疾病，其發(fā)病率逐年增高，在全世界癌癥引起的死亡中居首位[8]，到2025年中國每年將有超過一百萬新發(fā)肺癌患者[9]。由于肺癌早期缺乏特異性癥狀，早期肺癌因無癥狀而發(fā)現(xiàn)困難，5年總體生存率不足15%[10]。所以，尋找一種既簡單、又可靠的肺癌診斷方法具有重要意義。然而，單一的涂片方法具有局限性，陽性率低，使非患者得到不必要的治療、增加了不必要的心理負(fù)擔(dān)，給診斷帶來了巨大的麻煩。為了探討研究更快捷準(zhǔn)確的檢查方法，有專家學(xué)者采用兩種及三種聯(lián)合方法診斷肺癌[11]。

3.1 痰脫落細(xì)胞涂片檢測肺癌細(xì)胞的形態(tài)特征

痰脫落細(xì)胞學(xué)方法則是當(dāng)今診斷肺癌的有利措施。該檢查方法具有經(jīng)濟、簡便、損傷小、無痛苦、結(jié)果準(zhǔn)確等優(yōu)點[12]。傳統(tǒng)涂片時細(xì)胞厚薄不一，紅細(xì)胞、黏液及雜質(zhì)多見，很容易導(dǎo)致細(xì)胞壞死、腫脹變性，且結(jié)構(gòu)不清、厚薄不均，準(zhǔn)確率不高，染色后的細(xì)胞片背景干擾因素較多，癌細(xì)胞多分布于黏液之中。因此，觀察時間長，易產(chǎn)生視覺疲勞、粗心和漏診。

3.2 TCT涂片檢測肺癌細(xì)胞的形態(tài)特征

美國Cytyc公司發(fā)明的的ThinPrep膜式過濾技術(shù)，過濾膜由數(shù)萬個直徑8?m孔徑組成，細(xì)胞圖像清晰，層次分明。能有效排除紅細(xì)胞、炎性細(xì)胞、黏液等干擾物。細(xì)胞保持完整，細(xì)胞分布均勻，背景干凈，細(xì)胞結(jié)構(gòu)清晰，核大小不等，核膜清晰，染色質(zhì)細(xì)膩，核仁明顯，胞漿較豐富、淡染[13]。TCT所用液基絕大部分都是進口產(chǎn)品，價格較貴，患者難以承受，制片過程繁瑣，致使國內(nèi)大部分醫(yī)療機構(gòu)未能開展使用。

3.3 痰沉渣瓊脂石蠟雙包埋片法

痰沉積物石蠟切片操作簡單，顯微鏡下所見切片厚薄均勻，細(xì)胞形態(tài)完整，染色鮮艷，對比度強，背景清晰，可提高細(xì)胞學(xué)診斷的敏感性和特異性。痰中不僅可以看到各種原發(fā)肺癌的細(xì)胞，蠟塊可反復(fù)、間斷切片，能夠清晰的看到各種轉(zhuǎn)移性肺癌的細(xì)胞，既可提高陽性率，又便于會診。每高倍視野的有效細(xì)胞數(shù)明顯多于常規(guī)涂片法。同時，由于瓊脂包埋時，胸腹水中的脫落細(xì)胞及碎小組織能包埋在同一平面上，瓊脂石蠟雙包埋切片對癌細(xì)胞的檢出率遠(yuǎn)遠(yuǎn)高于普通涂片法，瓊脂石蠟雙包埋切片的各細(xì)胞及碎小組織能夠很順利地完整切出，還可以防止由于切片不完全所造成的漏診[14]。

本研究結(jié)果表明，在189例疑似肺癌患者痰液標(biāo)本中，自熒光支氣管鏡（AFB）技術(shù)和手術(shù)切除標(biāo)本病理組織學(xué)檢查確診為肺癌179例占94.71%（179/189）。痰脫落細(xì)胞涂片、TCT及痰沉渣瓊脂石蠟雙包埋片法檢測肺癌細(xì)胞結(jié)果之間相比較（P均>0.05），痰脫落細(xì)胞涂片結(jié)合TCT、痰沉渣瓊脂石蠟雙包埋片法檢測肺癌細(xì)胞檢出陽性率為97.21%顯著地高于TCT結(jié)合痰沉渣瓊脂石蠟雙包埋片法的84.92%（P<0.05）。綜上所述，運用子宮頸脫落細(xì)胞學(xué)診斷的TCT技術(shù)、胸腹水細(xì)胞學(xué)檢查APSM檢查技術(shù)聯(lián)合應(yīng)用于痰脫落細(xì)胞中，減少因取材的重復(fù)性、延期診斷等給患者帶來的生活壓力，旨在提高陽性診斷率，進而達(dá)到早期發(fā)現(xiàn)、診斷、治療，有利提高患者的生存質(zhì)量，減少由于遲后診斷帶來的肺癌的死亡率。

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（收稿日期：2015-04-16）