酒精性肝病患者血清IL-33高水平的臨床意義*

郝書理，張紀(jì)元，黃 昂，張龍玉，孫 穎，李保森，田 輝，鄒正升

酒精性肝?。ˋlcoholic liver diseases，ALD）是由于長期大量飲酒而導(dǎo)致的肝臟疾病。乙醇可使肝細(xì)胞處于氧應(yīng)激狀態(tài)，直接造成肝細(xì)胞壞死，進(jìn)而導(dǎo)致原發(fā)性肝損傷。此外，脂質(zhì)過氧化產(chǎn)物和乙醇代謝產(chǎn)物乙醛與機(jī)體蛋白結(jié)合成新抗原，激發(fā)對肝細(xì)胞損害的免疫反應(yīng)。近年來，隨著嗜酒人群比例的升高，ALD發(fā)病率逐年升高，已成為繼病毒性肝炎后的第二大肝損傷性疾病。臨床上，將ALD分為輕癥酒精性肝病、酒精性脂肪肝、酒精性肝炎（Alcoholic hepatitis，AH）和酒精性肝硬化（Alcoholic liver cirrhosis，ALC）。ALD重癥化亦被稱為重癥酒精性肝炎（Severe alcoholic hepatitis，SAH），或稱為酒精性肝衰竭，是酒精性肝病中病情最嚴(yán)重的一種。長期以來，ALD在發(fā)展過程中機(jī)體的免疫應(yīng)答如何，其中的相關(guān)機(jī)制及其臨床意義等問題尚缺乏全面的研究。因此，闡明影響ALD病情進(jìn)展的免疫學(xué)機(jī)制將有助于臨床治療。白細(xì)胞介素 -33（Interlukin-33，IL-33）作為一種新的IL-1家族成員，于2005年被發(fā)現(xiàn)[1]，在許多非造血細(xì)胞分泌，如內(nèi)皮細(xì)胞、成纖維細(xì)胞、支氣管和上皮細(xì)胞及某些免疫細(xì)胞（如巨噬細(xì)胞和樹突細(xì)胞）。IL-33通過其受體homolog of sulfotransferase（ST2）發(fā)揮生物學(xué)作用，在Th2驅(qū)動的慢性炎癥病變中，如哮喘、類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎、變應(yīng)性鼻炎或炎癥性腸病，IL-33/ST2信號通路的作用已被廣泛研究。在肝臟病學(xué)領(lǐng)域，IL-33被確定為在乙型肝炎和丙型肝炎發(fā)病中導(dǎo)致肝損傷的一種重要因子，而且在體外模型中證實(shí)其與肝纖維化密切相關(guān)[2]。然而，IL-33及其可溶性受體ST2（sST2）血清水平與ALD患者疾病嚴(yán)重程度關(guān)系仍未闡明。本研究分析了ALD患者血清IL-33及其sST2水平，以探討它們與疾病嚴(yán)重程度的相關(guān)性。

1 對象與方法

1.1 研究對象 我中心2013年4月至2014年3月間住院的ALD患者，其中AH患者40例，SAH患者17例和ALC患者75例（Child-Pugh A、B、C級各25例，表1）。診斷符合ALD診斷標(biāo)準(zhǔn)[2]，同時滿足AH診斷標(biāo)準(zhǔn)[2，3，8]。排除 HBV、HCV或 HIV感染、藥物性肝損傷、自身免疫性肝病、肝臟原發(fā)或繼發(fā)惡性腫瘤、肝外梗阻性疾病、孕婦以及合并嚴(yán)重的心、腦、血管、呼吸系統(tǒng)、泌尿系統(tǒng)疾病。另選健康體檢者（HC）48例，均為男性。本研究經(jīng)過我院倫理委員會批準(zhǔn)，所有受試者均簽署知情同意書。

表1 研究對象基線資料

1.2 檢測 采用ELISA法檢測血清IL-33和sST2（e-Bioscience，Santiago，USA，檢測范圍分別為 0～720 pg/ml和 0～1000 pg/ml，批內(nèi)和批間變異系數(shù)分別為＜5%和＜10%），所有樣品均進(jìn)行重復(fù)檢測。

1.3 統(tǒng)計學(xué)分析 應(yīng)用Windows系統(tǒng)的SPSS 18.0（SPSS Inc.Chicago，IL，USA）統(tǒng)計軟件完成。多個組間的多重比較采用Kruskal-Wallis H非參數(shù)檢驗。不同組間的比較采用Mann-Whitney U檢驗，同組之間的比較采用Wilcoxon rank檢驗。采用Spearman秩相關(guān)，采用雙側(cè)檢驗，P＜0.05為差異具有顯著統(tǒng)計學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 ALD患者外周血漿IL-33和sST2水平明顯升高 與HC組比，AH、SAH和ALC患者血清IL-33水平均明顯升高 [（42.17±2.41）pg/ml對（85.20±9.44）pg/ml、（68.70±8.14） pg/ml和（64.45±3.78） pg/ml，P<0.001]；AH患者較ALC患者IL-33水平明顯升高（P<0.05），而Child-Pugh A級、B級和C級ALC患者[（68.50±2.90） pg/ml、（72.47±3.22） pg/ml和（73.68±2.99）pg/ml]無顯著性相差（P＞0.05）。與 HC 組比，AH、SAH和ALC患者血清sST2水平均明顯升高[（43.97±3.01） pg/ml 對 （96.75±11.30） pg/ml、（51.92±11.78）pg/ml和（75.82±6.81） pg/ml，P＜0.001]；AH 患者血漿sST2水平較SAH和ALC患者均明顯升高（P<0.001或 P＜0.05）；在ALC患者中，Child-Pugh A級血漿sST2水平較B級或C級均明顯升高 [（98.37±12.84）pg/ml 對（63.65±5.59）pg/ml和（66.68±15.38）pg/ml，P<0.001]。ALD患者血漿IL-33與sST2水平之間無明顯相關(guān)（R=0.100，P=0.180，圖 1）。

圖1 ALD患者與正常人血漿IL-33和sST2水平比較

2.2 ALD患者血清IL-33水平與臨床指標(biāo)的相關(guān)性分析 ALD患者血清IL-33水平與淋巴細(xì)胞計數(shù)（R=0.273，P<0.01）、ALB（R=0.237，P<0.01）、ALT（R=0.462，P<0.001）、AST（R=0.387，P<0.001）和 CHE（R=0.225，P<0.01）水平呈顯著正相關(guān)，而與中性粒細(xì)胞計數(shù)（Neutrophils）、TBIL、ALP、GGT、TC和 PTA水平無顯著相關(guān)性（圖2）。

圖2 ALD患者血漿IL-33水平與血指標(biāo)的相關(guān)性分析 血漿IL-33水平與淋巴細(xì)胞計數(shù)（Lymphocytes）、ALB、ALT、AST 和CHE呈顯著正相關(guān)

3 討論

IL-33是一個新近發(fā)現(xiàn)的IL-1家族細(xì)胞因子[3～6]，與其它成員有共同的結(jié)構(gòu)域，該結(jié)構(gòu)域由12股B鏈構(gòu)成IL-1/成纖維生長因子B的三葉草形折疊[7～12]。與IL-18類似，IL-33產(chǎn)生時是一個缺乏信號肽的前體分子[13]，該前體被半胱天冬酶1切割成一個成熟的18×103的蛋白形式，從而使其獲得生物學(xué)活性。研究表明，可溶性IL-33是一種參與調(diào)控TH2免疫反應(yīng)的調(diào)節(jié)性炎性細(xì)胞因子，在疾病發(fā)生中扮演雙重角色：即可增強(qiáng)TH2型反應(yīng)，保護(hù)機(jī)體免受寄生蟲感染和動脈粥樣硬化，同時也能加重由TH2和肥大細(xì)胞介導(dǎo)的炎癥性疾病[14]。近年來，有研究顯示IL-33在小鼠和人纖維化的肝中過表達(dá)，其表達(dá)水平與膠原蛋白的表達(dá)水平一致；纖維化的肝臟內(nèi)活化的肝星狀細(xì)胞可分泌大量的IL-33，從而誘導(dǎo)肝纖維化的發(fā)生和進(jìn)展[2]。

研究ALD患者不同階段IL-33水平具有臨床意義。本研究收集了不同類型的ALD患者與正常人血清進(jìn)行ELISA檢測，結(jié)果發(fā)現(xiàn)ALD患者血清IL-33水平明顯升高，提示IL-33參與了ALD發(fā)病機(jī)制中的一種未知機(jī)制。IL-33通過結(jié)合IL-33受體（ST2和IL-1RAcP）激活MYD88和TRAF-6依賴的信號途徑，進(jìn)一步啟動NF-кB和AP-1，導(dǎo)致細(xì)胞因子和趨化因子的產(chǎn)生。sST2作為IL-33的拮抗誘餌受體[15]，在變態(tài)反應(yīng)性疾病和自身免疫性疾病患者血清ST2和IL-33均升高，同時sST2能夠競爭性結(jié)合IL-33，從而抑制IL-33/ST2信號途徑。ADH患者外周血漿sST2與IL-33水平雖無明顯的相關(guān)性，但其總體表達(dá)相一致，ALD患者sST2升高，進(jìn)一步支持IL-33在ALD中扮演的重要角色。進(jìn)一步比較分析發(fā)現(xiàn)，IL-33和sST2水平在AH患者中較其他患者明顯升高，提示IL-33與疾病的活動存在相關(guān)性；ALC患者血漿sST2水平呈顯著性下降趨勢，隨著ALC患者疾病病情的加重，IL-33水平呈現(xiàn)更顯著的下降趨勢。推測晚期ALC由于肝細(xì)胞壞死，纖維細(xì)胞增生，IL-33表達(dá)水平隨之降低。因此，可以應(yīng)用IL-33作為監(jiān)測ALD患者疾病進(jìn)展的評價指標(biāo)之一。

相關(guān)性分析結(jié)果則表明ALD患者淋巴細(xì)胞計數(shù)、ALT和AST與患者血清IL-33水平呈正相關(guān)。鑒于免疫系統(tǒng)如Kupffer細(xì)胞在ALD發(fā)病中扮演了重要作用，推測IL-33可參與ALD炎癥反應(yīng)，加重ALD患者肝臟的病理損害。同時，ALD患者血清IL-33水平與ALB和CHE水平呈正相關(guān)，即隨著ALD患者外周血漿IL-33水平的降低，其肝臟儲備功能也隨之降低，即隨著疾病進(jìn)展，IL-33水平降低，推測晚期ALD患者發(fā)生肝硬化及其失代償期，甚至在肝硬化基礎(chǔ)上發(fā)生SAH，故IL33水平在ALC晚期和SAH患者中趨于降低。本研究發(fā)現(xiàn)IL-33在ALD患者血清中呈高水平表達(dá)，隨著ALD疾病病程的進(jìn)展，其表達(dá)水平則降低。

血漿IL-33及sST2雖然各有變化趨勢，且兩者在ALD患者的變化趨勢大致相同。本研究未顯示兩者存在明顯相關(guān)性的可能原因為：IL-33的ST2受體有3個亞型，即ST2L、sST2和ST2V。ST2L為膜錨定形式，限制在Th2細(xì)胞和肥大細(xì)胞的表面。sST2為分泌性可溶性形式，沒有跨膜和胞內(nèi)結(jié)構(gòu)域。sST2作為IL-33的誘導(dǎo)受體，在變態(tài)反應(yīng)性疾?。ㄈ缦?、過敏性結(jié)膜炎、敗血癥、系統(tǒng)性紅斑狼瘡）患者血清sST2、IL-33升高。同時，sST2也是IL-33的阻礙受體，能夠競爭性結(jié)合IL-33，從而抑制IL-33/ST2信號途徑。

本研究闡述了IL-33在ALD疾病中的特征及其臨床意義，類似研究報道相對較少。研究結(jié)論支持IL-33與ALD的發(fā)生發(fā)展密切相關(guān)，參與ALD的發(fā)病機(jī)制，可作為ALD病情評估的預(yù)測指標(biāo)，為臨床醫(yī)生更加系統(tǒng)地了解和評估ALD提供了參考依據(jù)，也為研究人員更加深入的研究ALD的發(fā)病機(jī)制提供了另一可行方向，IL-33在ALD中的作用還值得后續(xù)進(jìn)一步研究。

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