乙型肝炎肝硬化患者血清IL-17 IL-23 CRP 三者關系的探討

鄧茂林 柯貴寶 胡小麗 駱方靜 向 謙 蒲 紅

慢性乙型肝炎是全世界主要的公共衛生問題之一，目前全世界約有3.5 億人感染慢性乙型肝炎病毒，感染乙型肝炎病毒(HBV)的人群中有10%～20%將發展成肝硬化。在亞洲國家，慢性乙型肝炎是肝硬化的主要病因，發生肝硬化后患者5 年生存率約為55% ～84%［1］。研究顯示，宿主免疫應答對乙型肝炎肝硬化患者的疾病進展具有重要作用［2，3］，IL-23/IL-17軸參與了多種自身免疫性疾病和慢性炎癥的發病過程［4，5］。故本研究對乙型肝炎肝硬化患者血清中IL-17、IL-23 及Th17 細胞的變化和作用進行闡述，以了解這些細胞、細胞因子在乙型肝炎肝硬化過程中可能的作用，以期對防治乙型肝炎肝硬化的進展提供新認識。

1 資料與方法

1.1 一般資料收集2012 年1 月至2013 年12 月本院消化內科118 例肝病患者，其中慢性乙型肝炎40例，其中男性24 例，女性16 例，平均年齡(44.26±4.35)歲;乙型肝炎肝硬化代償期38 例，男性25 例，女性13 例，平均年齡(47.14±4.78)歲;乙型肝炎肝硬化失代償期40 例，男性27 例，女性13 例，平均年齡(52.39±5.64)歲。所有入選患者簽署知情同意書，診斷標準符合2010 年慢性乙型肝炎防治指南［6］。正常對照組10 例，系本院健康體檢者。所有入選對象均排除有已知代謝性或遺傳肝病、肥胖或自身免疫性肝炎、膽汁淤積性肝病，并排除甲型肝炎病毒、丙型肝炎病毒、丁型肝炎病毒、戊型肝炎病毒、人體免疫缺陷病毒等病毒重疊感染，以及近3 個月內均未經免疫調節劑及抗病毒治療、未接受長時間保肝治療。

1.2 研究方法

1.2.1 標本采集和主要試劑 抽取受試者清晨空腹時靜脈血4 mL，離心后取上清液，置－80℃冰箱保存待測。ELISA 試劑盒購自美國RD 公司。

1.2.2 血清IL-17 和IL-23 檢測 應用IL-17 和IL-23 ELISA 試劑盒進行檢測，操作嚴格按說明書進行，酶標儀(MK3，美國Thermo 公司)測定450 nm 處的OD 值。1.2.3 CRP 的檢測 采用免疫比濁法，用OLYMPUS2700 全自動生化分析儀檢測血清標本CRP 水平。

1.3 統計學方法采用SPSS 17.0 軟件進行統計分析，數據用±s 表示，多樣本均值比較采用單因素方差分析，兩兩比較采用SNK 檢驗，相關性分析采用Pearson 相關分析，P ＜0.05 為差異有統計學意義。

2 結果

2.1 各組患者IL-17、IL-23 和CRP 表達水平比較

①慢性乙型肝炎組、代償期肝硬化組和失代償期肝硬化組血清IL－17、IL-23 和CRP 表達水平明顯高于正常對照組(P ＜0.05);②慢性乙型肝炎組、代償期肝硬化組和失代償期肝硬化組之間血清IL-17、IL-23和CRP 表達水平具有統計學意義(P ＜0.05)。詳見表1。

表1 正常對照組及3 組患者IL-17、IL-23 和CRP 表達水平比較±s)

表1 正常對照組及3 組患者IL-17、IL-23 和CRP 表達水平比較±s)

注:與正常對照組比較，*P ＜0.05;與慢性乙型肝炎組比較，#P ＜0.05;與代償期肝硬化組比較，＆P ＜0.05

?

2.2 相關性分析入選患者血清IL-17 與IL-23、CRP呈正相關(P ＜0.05)，詳見表2。

表2 慢性乙型肝炎組、乙型肝炎肝硬化組IL-17與IL-23、CRP 水平的相關性

3 討論

IL-17 是一種促炎癥細胞因子，由特殊的輔助型CD4+T 細胞產生，定義為Th17 細胞。血清中的IL-17從一定程度上反映了Th17 細胞的數量與功能情況［7－9］。Sun 等［10］研究表明，乙型肝炎肝硬化患者肝內Th17 細胞增加，可促進肝星狀細胞的活化而導致疾病進展。慢性乙型肝炎患者肝內浸潤的Th17 細胞一方面通過分泌IL-17 招募炎性細胞到達肝臟，另一方面直接激活肝內天然免疫細胞，造成持續的慢性炎癥［11］。Ye 等［12］研究發現，IL-17 表達隨著肝纖維化分級上升而增多，可能與TGF-β1 在肝纖維化的發生發展過程中起到重要作用有關。本研究通過對慢性乙型肝炎、乙型肝炎肝硬化患者IL-17 水平的檢測，結果發現:每一位患者血清中的IL-17 水平遠高于正常人(P＜0.05)，且與公認的反應炎癥狀態的指標以及與肝組織的炎性反應、壞死程度成正比的CRP 之間有正相關關系，提示IL-17 可能參與了乙型肝炎肝硬化的慢性炎癥及肝纖維化過程。

IL-23 在機體控制感染和自身免疫反應中起重要作用。有文獻報告，IL-23 可促進Th17 細胞擴增和存活，并分泌具有強大的募集和激活嗜中性粒細胞功能的IL-17，從而發揮其免疫學效應，在自身免疫性疾病和變態反應性疾病發病中發揮作用［13］。IL-23 缺乏不影響Th17 的正常產生，但卻使其不能擴展和存活。故IL-23 在Th17 細胞數量擴增與維持以及之后參與免疫應答的過程中是必須的。本研究結果中，慢性乙型肝炎、代償期肝硬化、失代償期肝硬化患者血清IL-23 和IL-17 的水平均呈逐漸升高趨勢，失代償期肝硬化患者高于代償期肝硬化患者，代償期肝硬化患者高于慢性乙型肝炎患者，3 組間比較存在差異(P ＜0.05)，說明IL-23 和IL-17 的表達水平與乙型肝炎肝硬化疾病進展密切相關，且IL-23 和IL-17 的表達水平呈正相關，推測IL-23 可能作用于分化成熟的Th17 細胞，促進IL-17 表達水平增高，并可能通過IL-17 發揮其功能。

綜上所述，本研究結果提示IL-17 可能參與了乙型肝炎肝硬化的慢性炎癥和肝纖維化，與肝臟的損傷程度密切相關。IL-23 可能作用于分化成熟的Th17 細胞，促進IL-17 表達水平增高，并可能通過IL-17 發揮其功能，進一步深入研究IL-23 誘導乙型肝炎肝硬化患者產生IL-17 的機制將有助于為肝臟纖維化和肝硬化后的疾病進展提供新的治療靶標。

［1］ Tseng PL，Lu SN，Tung HD，et al.Determinants of early mortality and benefits of lamivudine therapy in patients with hepatitis B virus-related decompensated liver cirrhosis［J］.J Viral Hepat，2005，12(4):386－392.

［2］ Hernandez-Gea V，Friedman SL.Pathogenesis of liver fibrosis［J］.Annu Rev Pathol，2011，11(6):425－456.

［3］ 王大剛，洪煒，何江英，等.乙肝患者外周血單核細胞比例與肝臟病變程度的關系研究［J］.解放軍醫學雜志，2012，37(8):811－814.

［4］ 王笑顏，鄒偉華，吳泉，等.原發性干燥綜合征患者IL-17測定及臨床意義［J］.中華全科醫學，2014，12(4):620－621.

［5］ Zheng L，Ye P，Liu C.The role of the IL-23/IL-17 axis in the pathogenesis of Graves＇disease［J］.Endocr J，2013，60(5):591－597.

［6］ 中華醫學會肝病學分會，中華醫學會感染病學分會.慢性乙型肝炎防治指南［J］.中華肝臟病雜志，2011，19(1):13－24.

［7］ Infante-Duarte C，Horton HF，Byrne MC，et al.Microbial lipopeptides induce the production of IL-17 in Th cells［J］.J Immunol，2000，165(11):6107－6115.

［8］ Harrington LE，Hatton RD，Mangan PR，et al.Interleukin 17-producing CD4+effector T cells develop via a lineage distinct from the T helper type 1 and 2 lineages.［J］.Nat Immunol，2005，6(11):1123－1132.

［9］ 歐琪亮，丁宋軍，李云，等.出生前后雙酚A 暴露對小鼠不同時期血清白介素-17 白介素-23 的影響［J］.安徽醫學，2013，34(5):530－532.

［10］Sun HQ，Zhang JY，Zhang H，et al.Increased Th17 cells contribute to disease progression in patients with HBV-associated liver cirrhosis［J］.J Viral Hepat，2012，19(6):396－403.

［11］Zhang JY，Zhang Z，Lin F，et al.Interleukin-17-producing CD4 T cells increase with severity of liver damage in patients with chronic hepatitis B［J］.Hepatology，2010，51(1):81－91.

［12］Ye Y，Xie X，Yu J，et al.Involvement of Th17 and Th1 effector responses in patients with hepatitis B［J］.J Clin Immunol，2010，30(4):546－555.

［13］Bamias G，Cominelli F.Immunopathogenesis of inflammatory bowel disease:current concepts［J］.Curr Opin Gastroenterol，2007，23(5):365－369.