HPLC測定冠心丹參膠囊中主成分的含量

湯杰，宋冰娜，鄭盼*，丁梅

(1.國藥集團致君(深圳)制藥有限公司，廣東 深圳 518118；2.國藥集團致君(深圳)坪山制藥有限公司，廣東 深圳 518118)

·中藥工業·

HPLC測定冠心丹參膠囊中主成分的含量

湯杰1，宋冰娜2，鄭盼1*，丁梅1

(1.國藥集團致君(深圳)制藥有限公司，廣東 深圳 518118；2.國藥集團致君(深圳)坪山制藥有限公司，廣東 深圳 518118)

目的：測定冠心丹參膠囊中丹參素、丹酚酸B、隱丹參酮、丹參酮Ⅰ、丹參酮ⅡA以及人參皂苷Rg1和人參皂苷Rb1的含量。方法：采用高效液相色譜法，以C18柱為色譜柱；流動相為乙腈-0.1%磷酸，梯度洗脫；流速為0.8 mL·min-1；檢測波長為270、203 nm。結果：丹參素鈉和丹酚酸B、隱丹參酮、丹參酮Ⅰ、丹參酮ⅡA以及人參皂苷Rg1和人參皂苷Rb1分別在7.1～113.6、11.7～187.2、6.6～105.0、6.9～110.2、7.3～116.0、31.2～499.4、27.1～433.7 μg·mL-1呈良好線性關系，平均加樣回收率分別是99.51%(RSD=0.91%)、97.73%(RSD=1.35%)、97.20%(RSD=0.78%)、98.47%(RSD=0.69%)、99.12%(RSD=0.31%)、96.64%(RSD=0.86 %)和97.98%(RSD=1.02%)。結論：本方法簡便、準確、重復性好，可作為冠心丹參膠囊中主成分的含量測定方法。

冠心丹參膠囊；高效液相色譜；含量測定

冠心丹參膠囊是由丹參、三七和降香油3味中藥組成的復方制劑，具有活血化瘀、理氣止痛之功能。用于氣滯血瘀所致的胸痹，癥見胸悶刺痛、心悸氣短，是治療冠心病心絞痛的常用藥物。該制劑臨床應用時間長，單用或聯合用藥療效確切[1-2]。以降香油代替冰片入藥降低了不良反應[3]，得到醫生和患者的認可。隨著中藥地位日益提高，中藥制劑的質量標準也越來越受到重視，《中華人民共和國藥典》2010版規定以丹參酮ⅡA作為冠心丹參膠囊的質量控制指標[4]。然而中藥制劑的有效成分復雜，單一質控指標不盡合理，本研究采用HPLC建立冠心丹參膠囊中丹參水溶性成分(丹參素鈉、丹酚酸B)、脂溶性成分(隱丹參酮、丹參酮Ⅰ、丹參酮ⅡA)和三七主成分(人參皂苷Rg1、人參皂苷Rb1)的含量測定方法，為冠心丹參膠囊質量標準的完善提供參考。

1 儀器和試藥

1.1 儀器

E2695-2486型高效液相色譜儀(美國Waters公司)；SPD-20A二極管陣列檢測器(美國waters公司)；超聲清洗器(頻率為40 KHz，功率為300 W)；AL204型萬分之一電子天平、XP6型十萬分之一電子天平(美國Metteler-Toledo公司)。

1.2 試藥

丹酚酸B對照品、丹參素鈉、隱丹參酮對照品、丹參酮Ⅰ、丹參酮ⅡA、人參皂苷Rg1、人參皂苷Rb1(中國食品藥品檢定研究院，批號分別為111562-201313，110855-201412，110852-200806，11086-200406，110766-200619，110703-201128，110704-201424)；冠心丹參膠囊[國藥集團致君(深圳)坪山制藥有限公司，批號分別為PC-130101，PC-140603，PC-140702]；乙腈和甲醇均為色譜純；磷酸為分析純；水為純化水。

2 方法和結果

2.1 對照品溶液的制備

精密稱取丹參素鈉、丹酚酸B、隱丹參酮、丹參酮Ⅰ、丹參酮ⅡA以及人參皂苷Rg1和人參皂苷Rb1對照品適量，采用70%甲醇配制成質量濃度分別為113.6、187.2、105.0、110.2、386.0、499.4、433.7 μg·mL-1的對照品儲備液。

2.2 供試品溶液的制備

精密稱取研磨均勻的冠心丹參膠囊0.3 g，加入20 mL 70 %甲醇，密塞，稱定重量，超聲提取30 min，放冷，用70%甲醇補足減失的重量，搖勻，8000 r·min-1離心濾過，取續濾液，以0.45 μm的微孔濾膜過濾，即得。

2.3 色譜條件

以乙腈為流動相A，以0.1%磷酸為流動相B，按表1所示進行梯度洗脫；檢測波長分別為270 nm(檢測丹參成分)、203 nm(檢測三七成分)；柱溫為30 ℃；流速為0.8 mL·min-1；進樣量為10 μL。

2.4 陰性對照溶液的制備

參照冠心丹參膠囊的處方工藝過程制備缺丹參或三七的陰性樣品，照2.2項下的供試品制備方法處理，制成缺丹參或三七的陰性樣品溶液。

表1 流動相梯度洗脫表

2.5 專屬性試驗

分別精密吸取對照品溶液、供試品溶液、陰性對照溶液各10 μL，注入色譜儀，按照2.3項下色譜條件進行檢測，記錄色譜圖。在與丹參素鈉、丹酚酸B、隱丹參酮、丹參酮Ⅰ、丹參酮ⅡA以及人參皂苷Rg1和人參皂苷Rb1對照品相應的保留時間處沒有色譜峰，說明陰性對照溶液無干擾，見圖1。

2.6 線性關系考察

精密量取按2.1項制備的丹參素鈉、丹酚酸B、隱丹參酮、丹參酮Ⅰ、丹參酮ⅡA以及人參皂苷Rg1和人參皂苷Rb1的對照品儲備液適量，質量濃度分別為丹參素鈉：7.1、14.2、28.4、56.8、113.6 μg·mL-1；丹酚酸B：11.7、23.4、46.8、93.6、187.2 μg·mL-1；隱丹參酮：6.6、13.1、26.3、52.5、105.0 μg·mL-1；丹參酮Ⅰ：6.9、13.8、27.6、55.1、110.2 μg·mL-1；丹參酮ⅡA：7.3、14.5、29.0、58.0、116.0 μg·mL-1；人參皂苷Rg1：31.2、62.4、124.9、249.7、499.4 μg·mL-1；人參皂苷Rb1：27.1、54.2、108.4、216.9、433.7 μg·mL-1，經0.45 μm的微孔濾膜過濾后，按2.3項下色譜條件進樣，記錄色譜峰面積，以濃度(X)為橫坐標，峰面積(Y)為縱坐標繪制標準曲線，對其進行線性回歸，得回歸方程。結果見表2。

表2 線性關系試驗結果

注：A.丹參主成分混合對照品(270 nm)；B.供試品(270 nm)；C.缺丹參陰性對照品(270 nm)；D.三七主成分混合對照品(203 nm)；E.供試品(203 nm)；F.缺三七陰性對照品(203 nm)；1.丹參素鈉；2.丹酚酸B；3.隱丹參酮；4.丹參酮Ⅰ；5.丹參酮ⅡA；6.人參皂苷Rg1；7.人參皂苷Rb1。圖1 冠心丹參膠囊中主成分的HPLC圖

2.7 精密度試驗

按2.1項下方法制備對照品溶液，在2.3項下色譜條件下連續進樣6次。丹參素鈉、丹酚酸B、隱丹參酮、丹參酮Ⅰ、丹參酮ⅡA以及人參皂苷Rg1和人參皂苷Rb1峰面積的RSD分別為0.23%、0.27%、0.37%、0.42%、0.13%、0.10%、0.57%，表明儀器精密度良好。

2.8 重復性試驗

取同一批號樣品，按2.2項方法制備6份供試品溶液，進行含量測定。丹參素鈉、丹酚酸B、隱丹參酮、丹參酮Ⅰ、丹參酮ⅡA以及人參皂苷Rg1和人參皂苷Rb1峰面積的RSD分別為0.87%、1.1%、0.69%、0.99%、1.73%、2.1%、1.65%、1.42%，表明測定方法的重復性良好。

2.9 穩定性試驗

取同一批號的供試品溶液，分別于配制后0、2、4、8、12 h進樣測定，結果丹參素鈉、丹酚酸B、隱丹參酮、丹參酮Ⅰ、丹參酮ⅡA以及人參皂苷Rg1和人參皂苷Rb1峰面積的RSD分別為0.15%、0.33%、0.21%、0.44%、0.37%、0.46%、0.29%，表明供試品溶液在12 h內穩定。

2.10 加樣回收率試驗

精密稱取6份已知含量的同一批次供試品約0.3 g，精密加入1 mL濃度分別為1.369 1、2.673 0、0.178 5、0.256 3、0.400 5、6.176 8、3.017 3 mg·mL-1的丹參素鈉、丹酚酸B、隱丹參酮、丹參酮Ⅰ、丹參酮ⅡA以及人參皂苷Rg1和人參皂苷Rb1對照品溶液，按2.3項下色譜條件進行測定，計算回收率，結果見表3。

表3 加樣回收率試驗結果

2.11 樣品含量測定

取生產批號為PC-130101、PC-140603、PC-140702的冠心丹參膠囊的內容物，混勻，分別按2.2項下方法制備3個批次供試品溶液，按2.3項下色譜條件測定，結果見表4。

表4 樣品測定結果

3 討論

3.1 檢測波長的選擇

冠心丹參膠囊成分復雜，各成分的色譜行為及儀器的響應值也有差異。本研究采用二極管陣列檢測器對樣品進行190～400 nm全波長掃描。結果顯示，檢測波長為203、270 nm時，分離度、峰形、柱效及出峰的穩定性較為滿意，結合已發表文獻[5-7]，選擇270 nm作為丹參成分檢測波長，203 nm作為三七成分檢測波長。

3.2 流動相的選擇

本研究考察了乙腈-0.1%磷酸、乙腈-甲醇-1.7%甲酸、甲醇-0.1%磷酸，乙腈-水等不同流動相，結果以乙腈-0.1%磷酸為流動相時色譜圖的基線較穩定，且在本研究所采用梯度下分離效果最好。

3.3冠心丹參膠囊是治療冠心病心絞痛的常用藥物，藥效確切，安全性好，受到廣大醫生和患者的認可。其成分眾多，包括丹參水溶性成分如丹參素和丹酚酸B等，脂溶性成分如隱丹參酮、丹參酮I、丹參酮IIA等，三七成分如人參皂苷Rg1、人參皂苷Rb1等。本研究建立了冠心丹參膠囊中丹參和三七的7種主成分含量的綜合測定方法，為提高該制劑的質量標準，更好地對其生產過程進行質控提供參考。

根據本研究結果，除了質控標準丹參酮ⅡA等丹參脂溶性成分以外，冠心丹參膠囊中丹參水溶性成分丹參素和丹酚酸B、三七成分人參皂苷Rg1和人參皂苷Rb1均較高。丹參水溶性成分具有擴張血管、保護內皮細胞和心肌細胞等作用[8-9]，人參皂苷類成分對心血管系統也具有保護作用[10]，建議增加丹參水溶性成分以及三七成分作為冠心丹參膠囊的質控指標。

與冠心丹參膠囊處方相同的制劑中，冠心丹參滴丸以人參皂苷Rg1、人參皂苷Rb1為質量控制標準[10]。與冠心丹參膠囊處方相近的制劑中，復方丹參滴丸以丹參素鈉為質量控制標準[11]。復方丹參片則以丹酚酸B、丹參酮IIA以及三七總皂苷為質量控制標準[4]。不同的中藥制劑的質量控制標準各不相同，然而對于處方相同或相近的制劑，應建立多個共同質控指標，以提高同類制劑的質量，以確保臨床安全有效。

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DeterminationofMainComponentsinGuanxinDanshenCapsulesbyHPLC

TANGJie1，SONGBingna2，ZHEGNPan1*，DINGMei1

(1.SinopharmZhijun(Shenzhen)PharmaceuticalCo.,Ltd.Shenzhen，Guangdong518118，China; 2.SinopharmZhijun(Shenzhen)PingshanPharmaceuticalCo.,Ltd.Shenzhen，Guangdong518118，China)

Objective：To determine the content of the tanshinol natrium，salvianolic acid B，cryptotanshinone，tanshinoneⅠ，tanshinoneⅡA，ginsenoside Rg1and ginsenoside Rb1in Guanxin Danshen Capsules.Methods：HPLC was performed on C18column using acetonitrile-0.1% phosphoric acid (gradient elution) as the mobile phase at a flow rate of 0.8 mL·min-1.The detection wavelengths were set at 270 nm and 203 nm.The column temperature was 30 ℃.Results：Tanshinol natrium，salvianolic acid B，cryptotanshinone，tanshinoneⅠ，tanshinoneⅡA，ginsenoside Rg1and ginsenoside Rb1showed good linearity in the concentration range of 7.1-113.6，11.7-187.2，6.6-105.0，6.9-110.2，7.3-116.0，31.2-499.4 and 27.1-433.7 μg·mL-1，respectively.And their average recovery rates were 99.51% (RSD=0.91%)，97.73% (RSD=1.35%)，97.20% (RSD=0.78%)，98.47% (RSD=0.69%)，99.12% (RSD=0.31%)，96.64% (RSD=0.86%) and 97.98% (RSD=1.02%)，respectively.Conclusion：The method is simple and accurate with good reproducibility.It can be used for the determination of the main components in Guanxin Danshen Capsules.

Guanxin Danshen Capsules；HPLC；content determination

2015-06-26)

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鄭盼，碩士，研究方向：藥理學；TEL：(0755)29528333-8203,E-mail:zhengpan@szzhijun.com

10.13313/j.issn.1673-4890.2015.10.020