番荔枝子油化學成分GC-MS分析△

邱燕，陳勇，苗筠杰，施葉葉，陳建偉，李祥

(南京中醫藥大學 藥學院，江蘇 南京 210023)

·基礎研究·

番荔枝子油化學成分GC-MS分析△

邱燕，陳勇*，苗筠杰，施葉葉，陳建偉，李祥*

(南京中醫藥大學 藥學院，江蘇 南京 210023)

目的：研究番荔枝子油的化學組成及相對含量。方法：采用石油醚提取番荔枝子油，對番荔枝子油進行甲酯化后，應用GC-MS分析其主要成分及相對含量。結果：番荔枝子的得油率為8.27%，GC-MS分析鑒定出14個化學成分，主要成分為棕櫚酸(12.5%)、亞油酸(13.2%)、油酸(24.3%)、硬脂酸(16.3%)和反油酸(12.8%)。結論：番荔枝子油富含不飽和脂肪酸，相對含量為58.2%。

番荔枝子油；GC-MS；不飽和脂肪酸

《廣東省中藥材標準》記載番荔枝子為番荔枝科植物番荔枝AnnonasquamosaLinn.的干燥成熟種子，有消積殺蟲之功，臨床主要用于惡瘡腫痛、驅蟲等[1]。目前對于番荔枝子的研究主要集中在番荔枝內酯類成分，藥效研究表明該類化合物具有較強的體內外抗腫瘤作用[2-4]。而番荔枝子中主要成分為脂肪油，前期本課題組對番荔枝子油進行甲酯化后，應用GC分析與混合對照品對照，分析了其主要成分及含量，由于FID檢測器靈敏度及混合對照品種類的限制，只鑒定出番荔枝子脂肪油中4個主要成分，分別為棕櫚酸、硬脂酸、油酸和亞油酸，其中不飽和脂肪酸含量大于50%[5]。為了更全面地揭示番荔枝子油的化學成分，本論文采用GC-MS分析法分析了番荔枝子油的主要化學成分。

1 材料

1.1 儀器

Agilent 6890 N氣相色譜儀(Palo Alto，CAUSA)，5973型質譜聯用儀，Agilent 7683自動進樣器，NIST-02質譜庫。分析天平(BT-125D，Sartorius，German)。

1.2 藥材與試劑

番荔枝子購自廣東澄海，經南京中醫藥大學藥學院陳建偉教授鑒定為番荔枝科番荔枝屬植物番荔枝AnnonasquamosaL.的成熟干燥種子。

石油醚(沸程60～90 ℃，廣東光華科技股份有限公司)。

2 方法

2.1 番荔枝子油的提取

稱取番荔枝子粗粉(20目)3份，每份500 g，分別用10倍量石油醚滲漉，滲漉液減壓回收得番荔枝子油，稱重，計算出油率。

番荔枝子出油率計算公式為：出油率(%)=油質量(g)/物料質量(g)×100%。

2.2 甲酯化處理

[5]，取2.1項下提取的番荔枝子油150 mg，精密稱定，置于10 mL具塞玻璃管中。加入0.5 mol·L-1氫氧化鈉-甲醇溶液5 mL，置60 ℃水浴皂化40 min(至油珠完全消失)，冷卻至室溫，加入14%三氟化硼-甲醇3 mL，繼續水浴5 min，冷卻至室溫，加入正己烷3 mL，飽和氯化鈉3 mL，振搖，靜置分層，取上清液300 μL，正己烷定容至5 mL，取適量溶液用無水硫酸鈉脫水，12 000 r·min-1離心10 min，過0.45 μm微孔濾膜，得番荔枝子油甲酯化樣品，置于4 ℃冰箱保存，備用。

2.3 GC-MS分析條件

GC條件設置：HP-5毛細管色譜柱(30 m×250 mm，0.25 μm)，進樣口溫度為230 ℃。升溫程序：初始溫度130 ℃，保持5 min，以3 ℃·min-1的速率升溫至230 ℃。載氣為高純氦氣，流量為1.0 mL·min-1。進樣量為1 μL，分流比為10∶1。

MS參數設置：電子轟擊(EI)，離子源電離電壓70 eV，離子源溫度230 ℃，加速電壓200 eV，掃描質量范圍m/z50～550。

3 結果

3.1 番荔枝子得油率

根據3.1項下的實驗方案，提取得到的番荔枝子油在常溫下呈淡黃色透明油狀，對所得番荔枝子油稱重，質量分別為40.34、42.17、41.54 g，結合出油率計算公式計算，得油率分別為8.07%、8.43%、8.31%，平均得油率為(8.27±0.18)%。

3.2 番荔枝子油化學成分分析

將番荔枝子油甲酯化樣品按2.3項下條件進行分析，獲得總離子流圖，見圖1。對總離子流圖中各峰經質譜掃描后得到質譜圖，通過Agilent工作站NIST-02標準質譜圖庫進行檢索，對匹配度≥95%的再進行人工比對解析，確認各化合物，按峰面積歸一化法計算各化合物在揮發油中的相對百分含量，共鑒定的14個化合物及其相對百分含量結果見表1。

圖1 番荔枝子油的總離子流色譜圖

表1 番荔枝子油化學成分分析

由表1可知，GC-MS分析鑒定出的主要化合物為棕櫚酸(12.5%)、亞油酸(13.2%)、油酸(24.3%)、硬脂酸(16.3%)和反油酸(12.8%)，與前期本課題組用GC分析與混合對照品對照的方法鑒定的主要成分基本一致[5]。本實驗結果表明，番荔枝子富含不飽和脂肪酸，相對含量為58.2%。另外，還鑒定出一些相對含量比較低的成分，如2-癸烯醛(0.6%)。

本實驗運用MS作為檢測器，克服了FID檢測器靈敏度及混合對照品種類的限制，盡可能多地鑒定出了番荔枝子油中的一些相對含量比較低的化學成分。番荔枝子作為一種熱帶果實，在我國臺灣、廣東、海南等地大量食用，而種子丟棄后造成自然資源的浪費。同時番荔枝子油具有一定的體外抑制人腫瘤細胞增殖的活性，尤其對人肝癌細胞HepG2表現出高的選擇活性[5]。癌細胞和正常組織在脂質代謝上有著根本的區別，利用不飽和脂肪酸可達到治療腫瘤同時不傷害正常組織的目的[6]。本研究提示番荔枝子中富含不飽和脂肪酸，具有一定的營養及藥用價值。本課題組前期研究表明其含有一類抗腫瘤活性成分番荔枝內酯(Annonaceousacetogenins，ACGs)[7]。根據該類化合物結構特征[8]，其極性較小，在提取番荔枝子的過程中也會提取出少量的ACGs，該類成分無法在GC-MS上檢測到，本課題組后期研究將進行番荔枝子油的LC-MS檢測分析，進一步揭示番荔枝子油抗腫瘤的物質基礎。

參考文獻

[1] 廣東省食品藥品監督管理局.廣東省中藥材標準：第一冊[S].廣州：廣東科技出版社，2004：194.

[2] Pettit GR，Mukku VJRV，Cragg G，et al.Cancer cell growth inhibitory constituents[J].J Nat Prod，2008，71：130-133.

[3] éparvier V，Nguyen VH，Thoison O，et al.Cytotoxic monotetrahydrofuran acetogenins fromDisepalumplagioneurum[J].J Nat Prod，2006，69：1289-1294.

[4] Liaw CC，Chang FR，Wu YC，et al.Montacin and cis-montacin，two new cytotoxic monotetrahydrofuran annonaceous acetogenins fromAnnonamontana[J].J Nat Prod，2004，67：1804-1808.

[5] 邱燕，陳勇，陳建偉，等.番荔枝子脂肪油化學成分及其抗腫瘤活性[J].中國實驗方劑學雜志，2014，20(21)：109-111.

[6] Simonsen N，Van’t Veer P，Strain J J，et al.Adipose tissue omega-3 and omega-6 fatty acid content and breast cancer in the EURAMIC study[J].American Journal of Epidemiology，1998，147：342-352.

[7] Yang H J，Li X，Tang Y P，et al.Supercritical fluid CO2extraction and simultaneous determination of eight annonaceous acetogenins in Annona genus plant seeds by HPLC-DAD method[J].J Pharm Biomed Anal，2009，49：140-141.

[8] Bermejo A，Figadere B，Zafra-Polo MC，et al.Acetogenins from Annonaceae：recent progress in isolation，synthesis and mechanisms of action[J].Nat Prod Rep，2005，22：269-303.

GC-MSAnalysisofOilsfromAnnonasquamosaSeed

QIUYan，CHENYong*，MIAOYunjie，SHIYeye，CHENJianwe，LIXiang*

(CollegeofPharmacy，NanjingUniversityofChineseMedicine，Nanjing210046，China)

Objective：To research the components and their relative amount of oil fromAnnonasquamosaseed.Methods：Petroleum ether was used to extract oils fromA.squamosaseed.The components and their relative amount of methyl esterification of the oils was analyzed by GC-MS.Results：The yield of the oil fromA.squamosaseed was 8.27%.The major chemical constituents of the oil were arepalmitic acid(12.5%)，linoleic acid(13.2%)，oleic acid(24.3%)，stearic acid(16.3%) and elaidic acid(12.8%).Conclusion：A.squamosaseed oil was rich in unsaturated fatty acid with the relative content of 58.2%.

Annonasquamosaseed oil；GC-MS；unsaturated fatty acid

10.13313/j.issn.1673-4890.2015.6.007

2015-03-13)

國家自然基金資助項目(81274057，81403082)；國家教育部博士點專項基金資助項目(20113237110009)；江蘇省自然科學基金資助項目(SBK2012853)；江蘇高校優勢學科建設工程資助項目(PAPD)；南京中醫藥大學青年自然科學基金項目(13XZR23)；2012年江蘇省普通高校研究生科研創新計劃項目(588)

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陳勇，講師，研究方向：中藥化學與分析；Tel：(025)85811512，E-mail：achenyong@gmail.com； 李祥，教授，研究方向：中藥化學與分析；Tel：(025)85811512；E-mail：lixiang_8182@163.com