豬偽狂犬、繁殖與呼吸障礙綜合征和鏈球菌混合感染診斷

南文金 黃健強 胡鴻惠 吳靜波

摘 要：廣東某豬場，哺乳仔豬和保育豬舍仔豬出現以神經癥狀、呼吸困難和關節炎為主要特征的疾病。發病豬樣品經過實驗室檢測，結果表明豬偽狂犬病毒gE抗體和豬繁殖與呼吸綜合征病毒核酸呈陽性，細菌分離鑒定豬鏈球菌2型為陽性。綜合臨床癥狀、剖檢變化及實驗室檢測結果，該例傳染病診斷為豬偽狂犬病毒、繁殖與呼吸障礙綜合征病毒和鏈球菌混合感染。

關鍵詞：豬偽狂犬病毒；繁殖與呼吸障礙綜合征病毒；鏈球菌；診斷

中圖分類號 S852 文獻標識碼 A 文章編號 1007-7731（2015）17-102-03

Diagnosis for Mixed Infection of Pseudorabies，Porcine Reproductive and Respiratory Syndrome and Streptococcus

Nan Wenjin et al.

（Laboratory of Animal Disease，Shaoguan University，Shaoguan 512005，China；North Guangdong Collaborative Innovation and Development Center of Pig Farming and Disease Control，Shaoguan 512005，China）

Abstract：A pig farms in Guangdong，suckling pigs and nursery pigsbroken out neurological symptoms，dyspnoea and arthritis as the main clinical characteristics of the disease. Samples of infected pigs through laboratory tests，the results showed that the Porcine Pseudorabies virus（PRV）gE antibodyand Porcine Reproductive and Respiratory Syndrome virus（PRRSV）nucleic acid positive，and the bacterial isolation and identification showed that Streptococcus suis type 2（SS2）positive. Comprehensiveclinical symptoms，pathological anatomical change and laboratory test results，the case of infectious disease diagnosis of PRV，PRRSV and SS2 co-infection.

Key words：Pseudorabies virus；Porcine Reproductive and respiratory syndrome virus；Streptococcus；Diagnosis

廣東某豬場，哺乳后期仔豬和保育舍仔豬出現關節腫脹，神經癥狀，呼吸困難等癥狀，隨著病程發展，發病仔豬食欲廢絕，逐漸消瘦死亡，損失較大。綜合臨床癥狀，病理變化和實驗室檢測結果，確診為豬偽狂犬、豬繁殖與呼吸綜合征和鏈球菌混合感染。

1 發病情況

廣東某豬場，存欄母豬300頭，2014年9月份開始哺乳后期個別仔豬開始出現呼吸道癥狀和神經癥狀，斷奶仔豬轉入保育舍后部分出現后肢關節腫脹，神經癥狀增多，體溫上升，呼吸困難，逐漸消瘦死亡。發病后懷疑為副豬嗜血桿菌或鏈球菌，采用多種抗生素保健和治療，效果不理想，保育舍發病率和死亡率不斷增加，2014年12月份豬舍保育舍仔豬發病率達40%，發病豬死亡率接近60%。

2 解剖病變

解剖發病和死亡保育豬，普遍存在心包、胸腔和腹腔有積液；肺臟腫脹、間質性性肺炎；肝臟和脾臟腫大、部分肝臟表面覆蓋纖維素性滲出物，偶見白色壞死點；腫大的關節腔里有滲出液；腹股溝淋巴結和腸系膜淋巴結腫大充血；腎臟有點狀血；腦膜水腫明顯，個別充血。

3 實驗室診斷

3.1 樣品采集 無菌采集發病保育豬心血、關節液、淋巴結、肺臟和脾臟組織5份；隨機采集19頭有臨床癥狀的仔豬（產房仔豬和保育舍保育豬）和25頭懷孕母豬前腔靜脈血3～5mL，實驗室分離分離血清備用。

3.2 主要試劑 Taq PCR Mastermix、DL 2000 DNA Marker、RNAiso Plus、cDNA第一鏈試劑盒購自寶生物工程（大連）有限公司；瓊脂糖購自Sigma公司；豬藍耳病抗體檢測試劑盒和豬偽狂犬野毒抗體檢測試劑盒購自北京愛德士元亨生物科技有限公司；營養瓊脂購、小牛血清、藥敏紙片購置杭州天和微生物試劑有限公司；其余試劑均為國產分析純。

3.3 主要儀器 PCR儀、恒溫金屬浴為杭州博日科技有限公司產品；恒溫培養箱為韶關科力儀器設備公司生產；凝膠成像系統為法國VILBER公司生產；臺式冷凍離心機、全波長酶標儀為美國Therm Fisher公司生產；移液器為芬蘭百得公司生產；超凈工作臺為蘇州凈化科技有限公司生產。

3.4 血清學檢測 按IDEXX抗體檢測試劑盒使用說明對采集的母豬和仔豬血清樣品進行豬藍耳病抗體檢測和豬偽狂犬野毒抗體檢測。結果19頭仔豬藍耳病抗全部呈陽性，陽性率100%，平均S/P值2.34，抗體離散度高達81.6%；19頭仔豬豬偽狂犬野毒抗體陽性的7頭，野毒抗體可疑的2頭。25頭母豬藍耳病抗全部呈陽性的有19頭，陽性率76%，平均S/P值1.74，抗體離散度高達73.3%；25頭母豬偽狂犬野毒抗全部呈陽性的有6頭，豬偽狂犬野毒陽性率24%。

3.5 病毒檢測 用實驗室建立的豬藍耳病經典毒株和變異毒株鑒別診斷RT-PCR、豬瘟病毒RT-PCR和豬圓環病毒PCR檢測方法進行血清和病料中病毒核酸檢測。

3.6 細菌分離鑒定 取新鮮的病料組織和關節液觸片，革蘭氏染色后鏡檢。用無菌接種環取少量關節炎接種到THB培養基中，37℃，培養18h，取少量菌液進行革蘭氏染色，同時用豬鏈球菌2型特異性鑒定引物進行PCR鑒定。

3.6 細菌藥敏試驗 將PCR鑒定過的鏈球菌2型菌株純培養物均勻涂布于含小牛血清的LB瓊脂平板上，常規K-B紙片擴散方法進行藥敏試驗，準確記錄抑菌圈直徑。

4 結果

4.1 血清學檢測結果 19頭仔豬藍耳病抗全部呈陽性，，陽性率100%，平均S/P值2.34，抗體離散度高達81.6%；19頭仔豬豬偽狂犬野毒抗體陽性的7頭，野毒抗體可疑的2頭。25頭母豬藍耳病抗全部呈陽性的有19頭，陽性率76%，平均S/P值1.74，抗體離散度高達73.3%；25頭母豬偽狂犬野毒抗全部呈陽性的有12頭，豬偽狂犬野毒陽性率48%。

4.2 病毒檢測結果 對采集的8頭發病保育豬血清提取RNA后進行了藍耳病核酸擴增，結果1～4號血清樣品藍耳病變異毒株和經典毒株呈陽性（418bp和508bp），5號樣品變異毒株陽性（418bp），6～8號樣品藍耳病擴增為陰性（見圖1）。對采集的4份病料進行了豬瘟、豬圓環病毒PCR擴增，均無目的條帶擴增。

圖1 豬藍耳病變異毒株和經典毒株RT-PCR鑒定結果

注：1-8：血清樣品；M：DNA Marker DL 2000。

4.3 細菌檢測結果 新鮮病料觸片革蘭氏染色可見優勢菌為成對或短鏈狀排列，接種BHT培養基進行鏈球菌增菌培養后革蘭氏染色可見典型的鏈球菌，經過豬鏈球菌2型PCR鑒定為豬鏈球菌2型菌株（見圖2和圖3）。

圖2 BHT增菌培養后革蘭氏染色（1000X）

圖3 豬鏈球菌2型PCR鑒定

注：SS：鏈球菌；M：DNA Marker DL2000。

4.4 藥敏試驗結果 選擇常用的獸用抗菌藥物進行藥敏試驗，結果表明，該菌株對慶大霉素、新霉素、丁胺卡那霉素、阿莫西林、青霉素、磺胺間甲氧嘧啶、泰妙菌素、氟苯尼考幾乎都不敏感。

5 診斷結果

依據實驗室血清檢測和病原檢測結果，結合臨床癥狀、病理變化和疫苗免疫程序，本次疫情診斷為豬偽狂犬野毒感染，同時該豬場藍耳病變異毒株處于活躍期，豬群發病后又繼發感染鏈球菌2型，造成了保育豬死亡較多。

6 防治措施

及時淘汰沒有飼養價值的發病豬并進行無害化處理，加強全場飼養管理，增加消毒次數，飼料和飲水中添加電解多維。全場所有豬緊急免疫豬偽狂犬基因工程疫苗，種豬和中大豬肌肉注射3頭份，保育舍小豬肌肉注射2頭份，21d后再加強免疫1次。產房現有仔豬滴鼻免疫1頭份，斷奶轉群前再肌肉注射1次。

該場原偽狂犬疫苗免疫不科學，母豬每年免疫2次，小豬45日齡左右肌肉注射疫苗1次。鑒于偽狂犬野毒感染比例較高，必須增加滴鼻免疫，產房新分娩仔豬出生當天進行滴鼻免疫1頭份，60日齡左右肌肉注射疫苗1次，90日齡加強免疫1次，公豬和母豬每90d偽狂犬免疫1次。30d后，生產基本恢復正常，新出生的仔豬發病率和死亡率大大降低。

7 討論

我國豬偽狂犬疫病控制成效較好，很多豬場都成功凈化了該疫病。但近2a來豬偽狂犬疫情在部分地區爆發，一些偽狂犬陰性場短時間內轉陽，在部分豬場造成較大損失。該場就是因為忽視了偽狂犬疫苗免疫，種豬免疫次數減少，商品豬免疫程序不科學，造成偽狂犬野毒感染。

混合感染成為豬病主要發病形式，疾病臨床癥狀和病理變化不典型，依據傳統經驗很難做出一個準確的診斷，特別是在藍耳病病毒普遍感染情況下，對一些疫病要通過實驗室檢測，根據檢測結果綜合判斷，才能制定科學合理的防治措施。 （責編：徐煥斗）