吡咯烷二硫代氨基甲鹽酸對(duì)人鼻咽癌CNE—2Z細(xì)胞增殖及其細(xì)胞核抗原表達(dá)的影響

向銀洲等

[摘要] 目的 研究核轉(zhuǎn)錄因子-κB（NF-κB）特異性抑制劑吡咯烷二硫代氨基甲鹽酸（PDTC）對(duì)人鼻咽癌CNE-2Z細(xì)胞生長(zhǎng)增殖及其細(xì)胞核抗原（PCNA）的影響。 方法 不同濃度的PDTC（25、50、100 μmol/L）作用CNE-2Z細(xì)胞不同時(shí)間后（24、48、72 h），四甲基偶氮唑藍(lán)（MTT）比色法檢測(cè)PDTC對(duì)CNE-2Z細(xì)胞增殖的抑制效應(yīng)；不同濃度的PDTC（25、50、100 μmol/L）作用于CNE-2Z細(xì)胞48 h后，流式細(xì)胞術(shù)（FCM）分析細(xì)胞周期，免疫組化（SP）法檢測(cè)不同強(qiáng)度PDTC作用下CNE-2Z細(xì)胞增殖細(xì)胞核抗原（PCNA）的表達(dá)情況。 結(jié)果 25、50、100 μmol/L PDTC處理的CNE-2Z細(xì)胞增殖活性明顯受到抑制（P < 0.05），并呈時(shí)間和劑量依賴；流式細(xì)胞術(shù)結(jié)果表明S期細(xì)胞數(shù)減少，細(xì)胞受阻于G0/G1期。與對(duì)照（無PDTC處理）比較，PDTC作用后CNE-2Z細(xì)胞PCNA表達(dá)降低（P < 0.05），并呈明顯的劑量依賴。 結(jié)論 PDTC具有顯著抑制人鼻咽癌CNE-2Z細(xì)胞生長(zhǎng)的作用，是一種有潛力的抑制鼻咽癌細(xì)胞增殖的藥物。

[關(guān)鍵詞] 人鼻咽癌CNE-2Z細(xì)胞；吡咯烷二硫代氨基甲鹽酸；核轉(zhuǎn)錄因子-κB；增殖細(xì)胞核抗原

[中圖分類號(hào)] R286.91 [文獻(xiàn)標(biāo)識(shí)碼] A [文章編號(hào)] 1673-7210（2015）09（a）-0011-05

[Abstract] Objective To explore the effects of pyrrolidine dithiocarbamate （PDTC），a specific inhibitor of NF-κB on the proliferation of human nasopharyngeal carcinoma cell line CNE-2Z and its effect on proliferation cell nuclear antigen （PCNA） expression. Methods CNE-2Z cells were respectively treated with different concentration （25， 50， 100 μmol/L） PDTC and different time （24， 48， 72 h）. The inhibition effects of cell proliferation were assayed by four methyl thiazolyl tetrazolium colorimetric（MTT） method. Cell cycle was analyzed by flow cytometry and the expression of proliferating cell nuclear antigen （PCNA） was detected by immunocytochemical method after treating CNE-2Z cells with different concentration PDTC （25， 50， 100 μmol/L） after 48 h. Results The proliferation activity of CNE-2Z cells dealed with 25， 50， 100 μmol/L PDTC was inhibited obviously （P < 0.05）， and it showed a time-dependent and dose-dependent manner. FCM result showed that the cell population reduced in S phase and the cell cycle was arrested in G0/G1 phase. Compared with the control （no PDTC）， the expression of PCNA of CNE-2Z cells was down regulated after PDTC dealed with （P < 0.05）， and it showed a dose-dependent manner. Conclusion The growth of CNE-2Z can be inhibited and the expression of PCNA in CNE-2Z can could be down-regulated by PDTC. PDTC may be a potential chemotherapeutics for the proliferation of nasopharyngeal carcinoma cell line.

[Key words] Human nasopharyngeal carcinoma cell line CNE-2Z； Pyrrolidine dithiocarbamate； NF-κB； Proliferation cell nuclear antigen

鼻咽癌是我國(guó)南方地區(qū)常見的頭頸部惡性腫瘤，治療以放射治療為主，目前早期鼻咽癌患者3年生存率約為90%，5年生存率為78%左右；但晚期患者生存率仍不樂觀，絕大多數(shù)患者死于腫瘤的局部復(fù)發(fā)和遠(yuǎn)處轉(zhuǎn)移，5年生存率一直徘徊在40%左右[1]。因此在提高放療水平的同時(shí)，積極探討化學(xué)藥物治療尤為重要。核轉(zhuǎn)錄因子-κB（nuclear factor-kappa B，NF-κB）在許多生理、病理過程中發(fā)揮著基因調(diào)控作用，如炎性反應(yīng)、免疫應(yīng)答、細(xì)胞增殖與凋亡等，腫瘤的發(fā)生、侵襲、轉(zhuǎn)移等過程也與NF-κB密切相關(guān)，NF-κB是一類極其重要的多功能核轉(zhuǎn)錄因子[2]。NF-κB特異性抑制劑近年在腫瘤防治中的作用受到廣泛關(guān)注，其作用機(jī)制可能是通過抑制核轉(zhuǎn)錄因子NF-κB的活化，從而間接抑制下游相關(guān)基因的表達(dá)，達(dá)到抑制腫瘤細(xì)胞的生長(zhǎng)增殖、侵襲與轉(zhuǎn)移。本實(shí)驗(yàn)中選用NF-κB的特異性抑制劑吡咯烷二硫代氨基甲鹽酸（pyrrolidine dithiocarbamate，PDTC）作為干預(yù)因素，作用于人鼻咽癌CNE-2Z細(xì)胞，觀察PDTC對(duì)CNE-2Z細(xì)胞生長(zhǎng)增殖及PCNA表達(dá)的影響。

1 材料與方法

1.1 實(shí)驗(yàn)材料

人鼻咽癌CNE-2Z細(xì)胞株由第三軍醫(yī)大學(xué)腫瘤研究所中心實(shí)驗(yàn)室提供。胎牛血清購(gòu)自杭州四季青生物工程有限責(zé)任公司；DAB顯色試劑盒與SP-9000免疫組織化學(xué)試劑盒購(gòu)自武漢百奧斯生物科技有限公司；四甲基偶氮唑藍(lán)（MTT）顯色劑購(gòu)于上海生物工程有限責(zé)任公司；RNA酶（RNase）、PDTC分析純、碘化丙啶（PI）、二甲基亞砜（DMSO）、RPMI1640培養(yǎng)基、胰蛋白酶等分別購(gòu)于Hyclone、Sigma、Amresco公司。

1.2 CNE-2Z細(xì)胞的培養(yǎng)

復(fù)蘇人鼻咽癌細(xì)胞株CNE-2Z，將復(fù)蘇后的細(xì)胞接種于100 mL培養(yǎng)瓶中，加入含10% 滅活胎牛血清、100 U/mL青霉素和100 U/mL鏈霉素的RPMI-1640培養(yǎng)液，放置于37℃、5%二氧化碳、飽和濕度的恒溫 培養(yǎng)箱中培養(yǎng)。常規(guī)更換培養(yǎng)液，進(jìn)行正常傳代，選取對(duì)數(shù)生長(zhǎng)期細(xì)胞進(jìn)行后續(xù)實(shí)驗(yàn)。

1.3 CNE-2Z細(xì)胞形態(tài)學(xué)觀察

隨機(jī)在倒置顯微鏡下選取3個(gè)視野，觀察不同濃度PDTC（濃度分別為25、50、100 μmol/L）作用于CNE-2Z細(xì)胞不同時(shí)間點(diǎn)（24、48、72 h）的形態(tài)學(xué)變化。CNE-2Z細(xì)胞以5×104/mL濃度接種于預(yù)置蓋玻片的6孔板中，然后每孔中滴加1 mL細(xì)胞懸液，再加入適量含10%滅活胎牛血清、100 U/mL青霉素和100 U/mL鏈霉素的RPMI-1640培養(yǎng)液，于37℃、5%二氧化碳、飽和濕度的恒溫培養(yǎng)箱中培養(yǎng)，細(xì)胞貼壁生長(zhǎng)后分為4組，分別滴加含PDTC（25、50、100 μmol/L）的培養(yǎng)液；設(shè)未加PDTC為對(duì)照，繼續(xù)培養(yǎng)72 h后，去除培養(yǎng)液，用PBS洗滌3次，加入95%的乙醇室溫下固定30 min，取出蓋玻片，常規(guī)HE染色，透明樹脂封片，自然晾干，光鏡下觀察細(xì)胞形態(tài)。

1.4 四甲基偶氮唑藍(lán)比色法檢測(cè)PDTC對(duì)CNE-2Z細(xì)胞生長(zhǎng)增殖的抑制作用

采用對(duì)數(shù)生長(zhǎng)期的CNE-2Z細(xì)胞，0.25%胰蛋白酶消化細(xì)胞，調(diào)整細(xì)胞懸液濃度為5×104/mL，每孔200 μL接種于96孔板上，同時(shí)設(shè)空白對(duì)照組、正常對(duì)照組（不含藥物）和PDTC不同濃度藥物處理組（分別為25、50、100 μmol/L），每組重復(fù)4孔，于37℃、5%CO2、飽和濕度恒溫箱中培養(yǎng)24 h后，吸去每孔培養(yǎng)液，實(shí)驗(yàn)組分別滴加含不同濃度PDTC培養(yǎng)液，繼續(xù)培養(yǎng)24、48、72 h，再每孔滴加20 μL MTT（5 mg/mL），繼續(xù)培養(yǎng)4 h后吸去上清液，每孔滴加150 μl DMSO液，遮光振蕩10～20 min，使其溶解，用Quant酶標(biāo)儀570 nm波長(zhǎng)檢測(cè)各孔吸光度（A570），只加RPMI-1640、未接種細(xì)胞的空白對(duì)照調(diào)零。每組實(shí)驗(yàn)重復(fù)3次，取平均值。計(jì)算不同濃度PDTC對(duì)CNE-2Z細(xì)胞增殖的抑制率。細(xì)胞抑制率=（1-藥物處理組吸光度/陰性對(duì)照組吸光度）×100%[3]。

1.5 CNE-2Z細(xì)胞周期分析

采用流式細(xì)胞儀（FCM）檢測(cè)細(xì)胞周期.選取對(duì)數(shù)生長(zhǎng)期CNE-2Z細(xì)胞，輕輕吹打，調(diào)整細(xì)胞濃度為1×105/mL，將細(xì)胞接種于100 mL培養(yǎng)瓶中，加入適量含10%滅活胎牛血清、100 U/mL青霉素和100 U/mL鏈霉素的RPMI-1640培養(yǎng)液，在37℃、飽和濕度、5%二氧化碳的孵箱中培養(yǎng)24 h，待細(xì)胞生長(zhǎng)至70%～80%融合時(shí)，更換為含PDTC為25、50、100 μmol/L的培養(yǎng)液，設(shè)對(duì)照，繼續(xù)培養(yǎng)48 h后吸去培養(yǎng)液，用胰蛋白酶消化、收集細(xì)胞，PBS沖洗3次，用預(yù)冷的70%冰乙醇固定，置4℃冰箱過夜，吸去乙醇，PBS沖洗3次，調(diào)整細(xì)胞濃度為1×106/mL，加入RNase酶（20 μg/mL）200 μL消化30 min，加入碘化丙啶（20 μg/mL）1 mL，于室溫遮光染色30 min，上流式細(xì)胞儀檢測(cè)，每組重復(fù)3次，Cell Quest 及Modifit軟件分析細(xì)胞周期分布。

1.6 免疫組化法檢測(cè)PDTC作用下CNE-2Z細(xì)胞PCNA的表達(dá)

選取對(duì)數(shù)生長(zhǎng)期CNE-2Z細(xì)胞，制成5.0×104/mL濃度細(xì)胞懸液，每孔2 mL接種于預(yù)置蓋玻片的6孔板中，放入37℃、飽和濕度、5%二氧化碳的恒溫箱中培養(yǎng)24 h，更換無血清RPMI1640培養(yǎng)液繼續(xù)培養(yǎng)24 h，去除培養(yǎng)液，實(shí)驗(yàn)組中分別滴加濃度為25、50、100 μmol/L 含PDTC的培養(yǎng)液，對(duì)照組滴加含10%滅活胎牛血清RPMI 1640培養(yǎng)液，每孔2 mL。培養(yǎng)48 h后吸去各孔培養(yǎng)液，0.01 mmol/L PBS液洗滌3次，再以乙酸-甲醛溶液（濃甲醛10 mL，冰乙酸3 mL，0.9%的氯化鈉溶液加至100 mL）固定10 min。采用SP染色檢測(cè)CNE-2Z細(xì)胞中PCNA的表達(dá)，操作按說明書步驟進(jìn)行，然后用DAB染色盒染色，晾干，透明樹膠封片，光鏡下觀察CNE-2Z細(xì)胞PCNA表達(dá)。CNE-2Z細(xì)胞中PCNA陽性表達(dá)標(biāo)準(zhǔn)為細(xì)胞核中可見棕黃色顆粒。HSCORE評(píng)分：排除爬片邊沿細(xì)胞，在低倍鏡下隨機(jī)選取細(xì)胞分布均勻的視野10個(gè)，然后在高倍鏡下每個(gè)視野隨機(jī)選擇50個(gè)細(xì)胞，根據(jù)細(xì)胞核著色深淺進(jìn)行PCNA蛋白表達(dá)評(píng)分：①陰性：0分，胞核不著色；②弱陽性：1分，胞核呈淡黃色；③陽性：2分，胞核呈黃色；④強(qiáng)陽性：3分，胞核呈深棕色。根據(jù)公式HSCORE=ΣPi（i+1）（i=0，1，2，3；Pi表示評(píng)分為i的比例）計(jì)算細(xì)胞HSCORE得分[4]。

1.7 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法

采用統(tǒng)計(jì)軟件SPSS 17.0對(duì)數(shù)據(jù)進(jìn)行分析，正態(tài)分布計(jì)量資料以均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差（x±s）表示，多組間比較采用方差分析，兩兩比較采用LSD-t檢驗(yàn)。計(jì)數(shù)資料以率表示，采用χ2檢驗(yàn)。以P < 0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 CNE-2Z細(xì)胞形態(tài)學(xué)觀察

倒置顯微鏡觀察細(xì)胞貼壁生長(zhǎng)24 h后，可見CNE-2Z細(xì)胞形態(tài)呈多角形，胞體透亮，細(xì)胞輪廓清晰，折光性強(qiáng)，胞核大而深染，核仁明顯，可見巨核和多核細(xì)胞（圖1，封四）。加入PDTC作用后，CNE-2Z細(xì)胞的貼壁性下降，細(xì)胞皺褶增多，形態(tài)逐漸由多角形變?yōu)閳A形，細(xì)胞間隙增寬；細(xì)胞結(jié)構(gòu)變得模糊不清，部分細(xì)胞明顯水腫，胞漿濃縮，胞核聚集，甚至細(xì)胞破碎，可見細(xì)胞碎片。隨著PDTC濃度的增加和作用時(shí)段的延長(zhǎng)，較多細(xì)胞懸浮于培養(yǎng)瓶中（圖2，封四）。HE染色光鏡觀察，PDTC作用后，CNE-2Z細(xì)胞數(shù)量顯著減少，細(xì)胞形態(tài)變?yōu)椴灰?guī)則形，細(xì)胞核空染，隨PDTC濃度增高，CNE-2Z細(xì)胞死亡增加。

2.2 不同濃度PDTC處理后CNE-2Z細(xì)胞增殖的抑制率

不同濃度PDTC處理的CNE-2Z細(xì)胞增殖活性明顯受到抑制（P < 0.05），并呈時(shí)間和劑量依賴。見表1。

2.3不同濃度PDTC對(duì)CNE-2Z細(xì)胞周期的影響

不同濃度PDTC作用24 h后，隨著藥物濃度增加，S期細(xì)胞所占比例逐漸下降（P < 0.05），G0/G1期細(xì)胞所占比例逐漸增高（P < 0.05），細(xì)胞主要呈現(xiàn)G0/G1期阻滯。見表2。

2.4 不同濃度PDTC作用于CNE-2Z細(xì)胞后PCNA蛋白的表達(dá)

對(duì)數(shù)期生長(zhǎng)的CNE-2Z細(xì)胞，可見細(xì)胞核有明顯棕色或棕黃色顆粒著色，PCNA蛋白表達(dá)強(qiáng)陽性（圖3，封四）。PDTC作用后，CNE-2Z細(xì)胞胞核棕黃色顆粒減少，隨著PDTC濃度增高，細(xì)胞核棕黃色顆粒顏色變淺（圖4，封四），表明PCNA表達(dá)減弱。不同濃度的PDTC（0、25、50、100 μmol/L）作用48 h后，PCNA蛋白的表達(dá)評(píng)分為（2.92±0.10）、（2.22±0.18）、（1.45±0.22）、（1.02±0.15）分，隨著PDTC濃度增高，PCNA蛋白的表達(dá)評(píng)分逐步降低（P < 0.05），呈現(xiàn)一定的劑量依賴。

3 討論

NF-κB是一種重要的多功能核轉(zhuǎn)錄因子，是由P65和P50構(gòu)成的雜二聚體，在人體的應(yīng)激、免疫應(yīng)答、炎性反應(yīng)等方面以及腫瘤的形成、侵襲、擴(kuò)散等方面發(fā)揮著重要的基因調(diào)控作用。研究發(fā)現(xiàn)NF-κB能夠顯著促進(jìn)腫瘤細(xì)胞生長(zhǎng)增殖，抑制細(xì)胞凋亡，其抗凋亡機(jī)制極可能是通過調(diào)控其靶基因相關(guān)因子，如腫瘤壞死因子、集落刺激因子、白介素-1、白介素-2等，使NF-κB過度表達(dá)，導(dǎo)致腫瘤細(xì)胞無限制生長(zhǎng)，出現(xiàn)細(xì)胞增殖，細(xì)胞凋亡減少，促使腫瘤發(fā)生、侵襲和擴(kuò)散[5].NF-κB還可以通過直接干擾與細(xì)胞周期相關(guān)的因子如IL-2等，使細(xì)胞的DNA合成異常加速，從而導(dǎo)致腫瘤細(xì)胞增殖而形成腫瘤[6]。有研究發(fā)現(xiàn)PDTC和順鉑在體外聯(lián)合應(yīng)用后，對(duì)人鼻咽癌細(xì)胞株CNE-2Z抑制效應(yīng)增加，中效濃度比單用藥要小，這說明PDTC可能具備化療增敏作用[7]。

PCNA是一種分子量為36 kD的蛋白質(zhì)，是DNA復(fù)制時(shí)聚合酶δ的輔助蛋白，在細(xì)胞核內(nèi)合成，并存在于細(xì)胞核內(nèi)。PCNA影響著細(xì)胞的增殖周期，在細(xì)胞DNA合成、細(xì)胞有絲分裂中發(fā)揮著重要作用。PCNA存在可溶性和不溶性兩種，不溶性PCNA可以在DNA復(fù)制中起作用，同時(shí)調(diào)控細(xì)胞增殖及細(xì)胞周期，研究發(fā)現(xiàn)其在G0/G1期細(xì)胞中表達(dá)不明顯，在G1晚期，其表達(dá)顯著增加，S期表達(dá)達(dá)最高峰，G2/M期則明顯下降[8]。PCNA表達(dá)的量的變化與DNA合成一致，其在細(xì)胞核內(nèi)陽性表達(dá)的強(qiáng)弱與細(xì)胞增殖活性密切相關(guān)，其活性越高，細(xì)胞與細(xì)胞間張力越大，黏附性越小，容易促使腫瘤細(xì)胞向遠(yuǎn)處轉(zhuǎn)移、侵襲和擴(kuò)散。因此PCNA的表達(dá)強(qiáng)度可以比較客觀地反映腫瘤細(xì)胞的增殖活性，是一種能夠準(zhǔn)確、簡(jiǎn)便評(píng)估腫瘤細(xì)胞增殖能力的重要指標(biāo)[9]。

NF-κB特異性抑制劑吡咯烷二硫代氨基甲鹽酸（PDTC）是一種強(qiáng)抗氧化劑，能夠特異性抑制多種腫瘤細(xì)胞NF-κB的活化，其作用機(jī)制主要為：①NF-κB活性亞單位P65的表達(dá)能夠被特異性抑制；②可能通過抑制NF-κB抑制蛋白（IκB）的降解，從而減少了NF-κB的核移位[10]。江從軍等[11]研究發(fā)現(xiàn)，特異性阻斷NF-κB的活化可顯著抑制體外實(shí)體瘤細(xì)胞的生長(zhǎng)，腫瘤的發(fā)生率大大降低。Gao等[12]研究發(fā)現(xiàn)NF-κB抑制劑PDTC通過可下調(diào)血管內(nèi)皮因子（VEGF）的表達(dá)，減少路易斯肺癌小鼠腫瘤血管生成，從而抑制腫瘤的形成；Li等[13]發(fā)現(xiàn)NF-κB信號(hào)途徑與視網(wǎng)膜細(xì)胞瘤的生物學(xué)行為也有關(guān)系。研究發(fā)現(xiàn)PDTC對(duì)腎癌、肝癌、喉癌細(xì)胞有顯著的抑制作用[14-16]；對(duì)胃癌、白血病、宮頸癌細(xì)胞有明顯抑制生長(zhǎng)作用[17-19]，對(duì)人鼻咽癌細(xì)胞的轉(zhuǎn)移與預(yù)后也有較大影響[20]。

本研究中采用NF-κB特異性抑制劑PDTC以不同濃度作用于人鼻咽癌CNE-2Z細(xì)胞后，發(fā)現(xiàn)PDTC能顯著抑制CNE-2Z細(xì)胞生長(zhǎng)增殖，表現(xiàn)為細(xì)胞黏附性下降，細(xì)胞間隙增寬，部分細(xì)胞胞核聚集，胞質(zhì)濃縮，甚至出現(xiàn)細(xì)胞碎裂。在增加PDTC濃度和延長(zhǎng)作用時(shí)間后，大量細(xì)胞懸浮于培養(yǎng)瓶中。HE染色結(jié)果顯示，PDTC干預(yù)后，CNE-2Z細(xì)胞數(shù)量明顯減少，形態(tài)變?yōu)閳A形或橢圓形，細(xì)胞內(nèi)出現(xiàn)大顆粒物質(zhì)及空泡；隨著PDTC濃度遞增，死亡細(xì)胞明顯增多。MTT試驗(yàn)表明，CNE-2Z細(xì)胞的增殖代謝能夠顯著地被PDTC抑制，同時(shí)也具有一定的劑量和時(shí)間依賴。經(jīng)PDTC作用24 h后，分析CNE-2Z細(xì)胞的周期，發(fā)現(xiàn)與對(duì)照細(xì)胞相比，PDTC作用的細(xì)胞G2/M期和S期細(xì)胞明顯減少（P < 0.05），而G0/G1期細(xì)胞顯著增多（P < 0.05），CNE-2Z細(xì)胞生長(zhǎng)過程明顯受阻于G0/G1期。免疫組化結(jié)果顯示，PDTC作用于CNE-2Z細(xì)胞后，PCNA蛋白表達(dá)下降，濃度越高，細(xì)胞核著色越淺。

綜上所述，PDTC能顯著抑制人鼻咽癌CNE-2Z細(xì)胞生長(zhǎng)增殖，其機(jī)制可能是PDTC阻斷NF-κB活化，下調(diào)PCNA表達(dá)，抑制細(xì)胞DNA合成和有絲分裂，減少細(xì)胞的生長(zhǎng)增殖；改變細(xì)胞周期分布，使CNE-2Z細(xì)胞受阻于G0/G1期等，促進(jìn)細(xì)胞凋亡，抑制了CNE-2Z細(xì)胞生長(zhǎng)增殖。PDTC在腫瘤生長(zhǎng)增殖方面的作用，使其可能成為腫瘤治療的新靶點(diǎn)。

[參考文獻(xiàn)]

[1] 張繼屏，范靜平，鄧月，等.Ki67和nm23蛋白在鼻咽癌中的表達(dá)及臨床意義[J].中國(guó)眼耳鼻喉科雜志，2015，15（1）：20-24.

[2] 陳李影慧，吳武佳，秦東春，等.PDTC對(duì)A549細(xì)胞增殖、細(xì)胞周期、凋亡及星形細(xì)胞上調(diào)基因-1表達(dá)的影響[J].鄭州大學(xué)學(xué)報(bào)：醫(yī)學(xué)版，2013，48（4）：485-488.

[3] 向銀洲，余林，魏蓮枝，等.冬凌草甲素對(duì)鼻咽癌HNE-1細(xì)胞株生長(zhǎng)及PCNA、Caspase-3表達(dá)的影響[J].山東醫(yī)藥，2010，50（50）：20-22.

[4] Cetinkaya BO，Pamuk F，Keles GC，et al. The role of phosphatase and tensin homolog in drug-induced gingival overgrowth [J]. Periodontal Res，2014，49（3）：307-313.

[5] Zhi Y，Duan Y，Zhou X，et al. NF-κB Signaling Pathway Confers neuroblastoma cells migration and invasion ability via the regulation of CXCR4 [J]. Med Sci Momit，2014，20（12）：2746-2752.

[6] Oida Y，Gopalan B，Miyahara R，et al. Inhibition of nuclear factor-kappa B augments antitumor activity of adenovirus-medicated melanoma differentiation-associated gege-7 against lung cancer cells via mitogen-activated protein kinase l activation [J]. Mol Cancer Ther，2007，6（4）：1440-1449.

[7] 李蓉，黎小兵，李明勇，等.PDTC和順鉑對(duì)人鼻咽癌細(xì)胞株CNE1、CNE-GL、CNE2Z的聯(lián)合作用[J].廣東醫(yī)學(xué)院學(xué)報(bào)，2010，28（6）：607-610.

[8] Wang SC. PCNA：a silent housekeeper or a potential therapeutic target？[J]. Trends Pharmacol Sci，2014，35（4）：178-186.

[9] 李旭濤，田芳.COX-2、PCNA表達(dá)與乳腺癌術(shù)后用生血湯聯(lián)合新輔助化療療效的關(guān)系[J].中國(guó)醫(yī)藥導(dǎo)刊，2015， 17（1）：96-98.

[10] Zhang X，Wu M，Jiang H，et al. Angiotensin Ⅱ Upregulates endothelial lipase expression via the NF-Kappa B and MAPK signaling pathways [J]. Plos One，2014，9（9）：e107634.

[11] 江從軍，用艷梅，張汝芝，等.NF-κB抑制劑PDTC對(duì)人黑素瘤A375細(xì)胞增殖的影響[J].齊齊哈爾醫(yī)學(xué)院學(xué)報(bào)，2012，33（18）：2445-2446.

[12] Gao P，Gao Y，Liang H. Effect of NF-κB inhibitor PDTC on VEGF and endostatin expression of mice with Lewis lung cancer [J]. Asian Pacific Journal of Tropical Medicine，2015，20（3）：220-224.

[13] Li P，Li Z. Effects of NF-κB and hypoxia on the biological behavior of Y79 retinoblastoma cells [J]. Int J Clin Exp Pathol，2015，8（2）：1725-1730.

[14] Zheng X，Lv J，Shen Q，et al. Synergistic effect of pyrrolidine dithiocarbamate and cisplatin in human cervical carcinoma [J]. Reprod Sci，2014，21（10）：1319-1325.

[15] 羅娜，何松，湯為學(xué)，等.二硫代氨基甲酸吡咯烷聯(lián)合苦參堿對(duì)人肝癌裸鼠移植瘤生長(zhǎng)的抑制作用[J].中華肝臟病雜志，2011，19（4）：275-280.

[16] 康苧心，胡國(guó)華，吳蔚，等.PDTC對(duì)喉癌裸鼠模型中循環(huán)腫瘤細(xì)胞的影響[J].臨床耳鼻咽喉頭頸外科雜志，2011，25（9）：419-422.

[17] 夏秀麗，張志廣，李熳，等.塞來昔布聯(lián)合PDTC對(duì)人胃癌細(xì)胞株SGC-7901生長(zhǎng)的抑制作用[J].天津醫(yī)藥，2011，39（10）：907-910.

[18] 張純，崔國(guó)惠，劉芳，等.NF-κB抑制劑PDTC抗白血病細(xì)胞增殖的實(shí)驗(yàn)研究[J].中國(guó)病理生理雜志，2009，25（12）：2349-2352.

[19] 吳靜，閏亞妮，張穎，等.抗氧化劑PDTC對(duì)卡鉑誘導(dǎo)宮頸癌HeLa細(xì)胞增殖和凋亡的影響[J].腫瘤，2010，30（11）：908-912.

[20] Sun W，Guo MM，Han P，et al. Id-1 and the p65 subunit of NF-κB promote migration of nasopharyngeal carcinoma cells and are correlated with poorprognosis [J]. Carcinogenesis，2012，33（4）：810-817.

（收稿日期：2015-05-18 本文編輯：蘇 暢）