高效液相色譜法測(cè)定水產(chǎn)品中甲基睪酮?dú)埩袅康牟淮_定度評(píng)定

張惠峰，綦天華

（長(zhǎng)春市水產(chǎn)品質(zhì)量安全檢測(cè)中心，吉林 長(zhǎng)春 130033）

高效液相色譜法測(cè)定水產(chǎn)品中甲基睪酮?dú)埩袅康牟淮_定度評(píng)定

張惠峰1，綦天華2

（長(zhǎng)春市水產(chǎn)品質(zhì)量安全檢測(cè)中心，吉林 長(zhǎng)春 130033）

依據(jù)JJF1059—2012 《測(cè)量不確定度評(píng)定與表示》和CNAS-GL-06《化學(xué)分析中不確定度的評(píng)估指南》，建立了高效液相色譜法測(cè)定水產(chǎn)品中甲基睪酮?dú)埩舻牟淮_定度評(píng)定的數(shù)學(xué)模型。對(duì)測(cè)量過(guò)程中各不確定度來(lái)源進(jìn)行分析，計(jì)算各不確定度分量，最后給出合成標(biāo)準(zhǔn)不確定度和擴(kuò)展不確定度，評(píng)定結(jié)果表明：不確定度主要來(lái)源于測(cè)試過(guò)程的隨機(jī)效應(yīng)、曲線校準(zhǔn)和樣品處理過(guò)程。

不確定度；甲基睪酮；高效液相色譜法；水產(chǎn)品

甲基睪酮又名甲睪酮、甲基睪丸酮、甲基睪丸素。是一種合成類(lèi)固醇，屬于蛋白同化激素，具有雄性和蛋白同化雙重作用［1-2］。曾作為一種性激素和強(qiáng)壯劑被廣泛用于水產(chǎn)養(yǎng)殖業(yè)中，如羅非魚(yú)、鯉魚(yú)、鰻魚(yú)、鱔魚(yú)、鱒魚(yú)、甲魚(yú)等。甲基睪酮代謝時(shí)間長(zhǎng)，對(duì)人類(lèi)的危害是慢性、遠(yuǎn)期和積累性的，主要干擾體內(nèi)自然激素的平衡，使生理功能紊亂，并且可干擾肝內(nèi)毛細(xì)膽管的排泄功能［3］。目前，高效液相色譜法已廣泛用于水產(chǎn)品中甲基睪酮的定量檢測(cè)，我國(guó)已規(guī)定在水產(chǎn)品中甲基睪酮為不得檢出，因此對(duì)甲基睪酮?dú)埩袅康谋O(jiān)測(cè)已成為一項(xiàng)重要的常規(guī)檢測(cè)項(xiàng)目［4］。

測(cè)量不確定度對(duì)于測(cè)量結(jié)果之間的比較、數(shù)據(jù)解釋、檢測(cè)程序中需要注意的因素、方法的確認(rèn)等都有著十分重要的意義，因此在水產(chǎn)品安全檢測(cè)等各領(lǐng)域越來(lái)越受到重視。學(xué)者曾研究了水產(chǎn)品中孔雀石綠［5-6］、多氯聯(lián)苯［7］、硝基呋喃類(lèi)代謝物［8］、揮發(fā)性鹽基氮［9］、磺胺類(lèi)藥物［10］、喹諾酮類(lèi)藥物［11］等殘留量檢測(cè)方法［12-17］的不確定度評(píng)定，目前國(guó)內(nèi)尚無(wú)甲基睪酮?dú)埩袅繙y(cè)定不確定度評(píng)定的相關(guān)報(bào)道。本實(shí)驗(yàn)依據(jù)不確定度的評(píng)定的基本方法和程序［18-22］，以高效液相色譜法［23］為例，探討水產(chǎn)品中甲基睪酮?dú)埩魷y(cè)定的不確定度的來(lái)源、分析評(píng)定、合成及結(jié)果表述。建立該方法的測(cè)量不確定度模型，分析影響測(cè)定結(jié)果的各主要分量，在實(shí)際操作中可用于指導(dǎo)分析人員進(jìn)行重點(diǎn)控制，從而提高測(cè)定結(jié)果的準(zhǔn)確性和可靠性。

1　材料與方法

1.1材料與試劑

水產(chǎn)品（鱈魚(yú)、鯉魚(yú)、鳙魚(yú)） 長(zhǎng)春東北亞物流有限公司；甲基睪酮標(biāo)準(zhǔn)品（純度99%） 德國(guó)Dr.Ehrenstorfer公司；甲醇（色譜純） 美國(guó)Fisher公司；其余試劑均為國(guó)產(chǎn)分析純。

1.2儀器與設(shè)備

1200高效液相色譜儀（配紫外檢測(cè)器和自動(dòng)進(jìn)樣器） 美國(guó)Agilent公司；XS205分析天平 瑞士Mettler公司；TE212-L電子天平 德國(guó)Sartorius公司；TDL-40B臺(tái)式離心機(jī) 上海安亭科學(xué)儀器廠；R-215旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀 瑞士Büchi公司；Research plus可調(diào)量程移液器 德國(guó)Eppendorf公司。

1.3方法

1.3.1標(biāo)準(zhǔn)溶液的配制

標(biāo)準(zhǔn)儲(chǔ)備液：精密稱(chēng)取甲基睪酮標(biāo)準(zhǔn)品0.010 0 g，用甲醇溶解，定容于500 mL容量瓶中，質(zhì)量濃度為20 μg/mL。

標(biāo)準(zhǔn)中間液：準(zhǔn)確量取上述標(biāo)準(zhǔn)儲(chǔ)備液5 mL用甲醇稀釋并定容至10 mL容量瓶，質(zhì)量濃度為10 μg/mL。

標(biāo)準(zhǔn)工作液：用甲醇將標(biāo)準(zhǔn)中間液逐級(jí)稀釋成質(zhì)量濃度分別為0.05、0.10、0.20、0.50、10.00、5.001.00、 μg/mL的標(biāo)準(zhǔn)工作液，供高效液相色譜分析。

1.3.2樣品提取和凈化

樣品處理采用SC/T 3029—2006《水產(chǎn)品中甲基睪酮?dú)埩袅康臏y(cè)定：液相色譜法》［23］進(jìn)行，方法檢出限10 μg/kg。，具體步驟如下：精確稱(chēng)取5.00 g經(jīng)充分勻漿的魚(yú)肉于50 mL玻璃離心管中，加入20 mL乙醚，旋渦混勻15 min，4 000 r/min離心10 min，所得上清液移至雞心瓶；殘?jiān)尤?5 mL乙醚再提取一次，合并上清液至雞心瓶，在40 ℃左右水浴中減壓旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)至干，殘?jiān)屑尤? mL甲醇溶液（4∶1）清洗，轉(zhuǎn)移至10 mL具塞玻璃離心管中。加入4 mL石油醚至離心管中，加塞旋渦混勻2 min，4 000 r/min離心10 min，棄去上層石油醚層；下層加入4 mL石油醚重復(fù)操作一次。下層甲醇溶液在40 ℃左右水浴中減壓旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)至0.5 mL，轉(zhuǎn)移至10 mL具塞離心管。加入2 mL水清洗瓶壁，合并水溶液，加入4 mL乙醚，旋渦混勻2 min，4 000 r/min離心10 min，取上層乙醚層于雞心瓶中；下層用4 mL乙醚再提取一次，合并上層至雞心瓶中。在40 ℃左右水浴中減壓旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)至干，1 mL流動(dòng)相定容，經(jīng)聚四氟乙烯膜過(guò)濾，待測(cè)。

1.3.3色譜條件

色譜柱：Agilent ZORBAX Eclipse XDB C18柱（250 mm×4.6 mm，5 μm）；流動(dòng)相：甲醇-水（72∶28 ，V/V）；流速：0.8 mL/min；檢測(cè)波長(zhǎng)：254 nm；柱溫：30 ℃；進(jìn)樣量：20 μL。

2　結(jié)果與分析

2.1建立數(shù)學(xué)模型

式中：w為水產(chǎn)樣品中藥物殘留量/（μg/kg）；Cx為提取樣液中藥物質(zhì)量濃度/（μg/mL）；Vx為提取樣液定容體積/mL；m為樣品質(zhì)量/g；為回收率校正因子。

2.2不確定度的來(lái)源分析

2.2.1曲線校準(zhǔn)過(guò)程引入的不確定度

包括標(biāo)準(zhǔn)工作曲線擬合所引入的不確定度、標(biāo)準(zhǔn)溶液稀釋過(guò)程所引入的不確定度。其中標(biāo)準(zhǔn)溶液稀釋過(guò)程中的不確定度由標(biāo)準(zhǔn)品的不確定度、移液管和容量瓶體積的不確定度、校準(zhǔn)和使用溫度不同導(dǎo)致的不確定度組成。

2.2.2樣品質(zhì)量引入的不確定度

由天平的最大允許誤差構(gòu)成。

2.2.3樣品加標(biāo)過(guò)程引入的不確定度

由目標(biāo)樣品在制備過(guò)程中由于加標(biāo)的體積的不確定度構(gòu)成，非加標(biāo)樣品可不考慮該部分。

2.2.4樣品前處理過(guò)程引入的不確定度

測(cè)試樣品的制備過(guò)程非常復(fù)雜，每一步操作均會(huì)引入不確定度，采用檢測(cè)方法確認(rèn)中的回收率對(duì)制樣過(guò)程中引入的不確定度進(jìn)行評(píng)定。

2.2.5體積引入的不確定度

由定容體積和進(jìn)樣體積的不確定度構(gòu)成。

2.2.6儀器引入的不確定度

由液相色譜儀引入的不確定度。

2.2.7測(cè)試過(guò)程隨機(jī)效應(yīng)導(dǎo)致的不確定度

包括樣品的均勻性和代表性、天平的重復(fù)性、體積刻度充滿的重復(fù)性、進(jìn)樣的重復(fù)性、和儀器積分面積重復(fù)性等因素引起的不確定度。

2.3不確定度的分量評(píng)定

根據(jù)不確定度的來(lái)源分別對(duì)校準(zhǔn)過(guò)程、樣品質(zhì)量、樣品加標(biāo)、樣品處理、液相色譜測(cè)試及隨機(jī)過(guò)程中引入的不確定度進(jìn)行單個(gè)分量的量化評(píng)定。

2.3.1曲線校準(zhǔn)過(guò)程引入的不確定度

2.3.1.1標(biāo)準(zhǔn)溶液配制引入的不確定度

原始標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)引入的不確定度：標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)給uprel出的擴(kuò)展不確定度，屬于正態(tài)分布，置信概率p=95%，包含因子k=2，為B類(lèi)評(píng)定，up=0.5/2=0.25uprel=up/ p=0.25/99.0=0.002 5根據(jù)上述計(jì)算公式可求得標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)的相對(duì)不確定度為0.002 5。

標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)稱(chēng)量引入不確定度umxrel標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)的稱(chēng)量質(zhì)量為0.010 0 g，使用XS205電子天平稱(chēng)量，該天平經(jīng)計(jì)量檢定為Ⅰ天平，檢定分度值為0.1 mg，依據(jù)JJG 1036—2008 《電子天平檢定規(guī)程》［24］稱(chēng)量范圍0≤m≤5 g時(shí)最大允許誤差為±0.05 mg（0.5e），按照均勻分布計(jì)算，為B類(lèi)評(píng)定。則其不確定度為相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)不確定度為：umxrel=umx/mx=0.002 9。

標(biāo)準(zhǔn)儲(chǔ)備溶液定容引入的不確定度uVsrel：按照J(rèn)JG 196—2006《常用玻璃量器檢定規(guī)程》［25］，20 ℃時(shí)，500 mL容量瓶（A級(jí)）最大允許誤差為±0.25，滿足均勻分布，k=，為B類(lèi)評(píng)定。由量器校準(zhǔn)引入的不確定度為：uml=0.25/=0.144 mL，相對(duì)不確定度為umlrel=uml/m=0.144/500=0.000 3容量瓶在20 ℃條件下檢定校準(zhǔn)，因溶劑體積受溫度變化的影響遠(yuǎn)大于各量器自身，因此僅考慮前者。標(biāo)準(zhǔn)儲(chǔ)備液在（20±2）℃條件下配制，溶劑為甲醇，20 ℃時(shí)甲醇體積膨脹系數(shù)為α=0.2×10-3℃-1。按照均勻分布，則因溫度變化引起溶劑體積改變的標(biāo)準(zhǔn)不確定度為uV=ΔV/，ΔV=V×ΔT×α，溫度對(duì)體積影響引入的標(biāo)準(zhǔn)不確定度為1.2/=0.692，相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)不確定度為uTrel=0.692/500=0.001 4。標(biāo)儲(chǔ)溶液定容過(guò)程相對(duì)不確定度合成為

標(biāo)準(zhǔn)溶液稀釋引入的不確定度uVWrel，由量器校準(zhǔn)和環(huán)境溫度變化引起溶劑體積改變引入不確定度組成：（1）量器校準(zhǔn)引入的相對(duì)不確定度uVWlrel

標(biāo)液稀釋過(guò)程中所使用量器見(jiàn)表1，參考JJG196—2006［25］和JJG 646—2006《移液器檢定規(guī)程》［26］要求，依據(jù)相應(yīng)最大允許誤差，計(jì)算得每次定容量器校準(zhǔn)的相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)不確定度見(jiàn)表1，具體步驟同umlrel，則合成相對(duì)不確定度為：

表1　量器校準(zhǔn)引入的不確定度Table 1 Uncertainties caused by container calibration

（2）環(huán)境溫度變化引起溶劑體積改變引入的相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)不確定度uV2rel

標(biāo)液稀釋過(guò)程中所用溶劑為甲醇，實(shí)驗(yàn)溫度為（2 0±2）℃，計(jì)算過(guò)程同uTrel，各相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)不確定度見(jiàn)表2，則合成相對(duì)不確定度為：

標(biāo)準(zhǔn)溶液配制過(guò)程中由原始標(biāo)物、標(biāo)物稱(chēng)量、標(biāo)儲(chǔ)定容、標(biāo)液稀釋引入的相對(duì)不確定度合成為：

表2　環(huán)境溫度變化引入的不確定度Table 2 Uncertainties caused by environmental temperature changes

2.3.1.2標(biāo)準(zhǔn)工作曲線擬合引入的不確定度u（xpred）rel

配制甲基睪酮的7 個(gè)不同質(zhì)量濃度標(biāo)準(zhǔn)溶液（0.05、0.1、0.5、1、2、5、10 μg/mL），對(duì)標(biāo)準(zhǔn)溶液和被測(cè)溶液分別用液相色譜測(cè)試1 次，得到相應(yīng)的峰面積A，采用最小二乘法擬合，得到標(biāo)準(zhǔn)工作曲線的線性回歸方程Y=aX+b（b為截距，a為斜率）和方程的線性相關(guān)系數(shù)如表3所示。

表3　甲基睪酮標(biāo)準(zhǔn)曲線測(cè)定結(jié)果Table 3 Standard curves of methyltestosterone

依據(jù)校準(zhǔn)數(shù)據(jù)，結(jié)合由用來(lái)導(dǎo)出校準(zhǔn)曲線的軟件提供的出殘余標(biāo)準(zhǔn)誤差s，由y的（隨機(jī)）變化性，預(yù)估計(jì)值xpred的不確定度可計(jì)算得，由標(biāo)準(zhǔn)工作曲線擬合引入的相對(duì)不確定度為0.000 02，為A類(lèi)評(píng)定。

式中：s為由軟件給出的殘余標(biāo)準(zhǔn)誤差；xpred為被測(cè)溶液的估計(jì)值，用被測(cè)溶液的平均值表示；為繪制工作曲線的全部x值的平均值；p為對(duì)被測(cè)溶液質(zhì)量濃度進(jìn)行的測(cè)定次數(shù)；n為對(duì)標(biāo)準(zhǔn)溶液質(zhì)量濃度進(jìn)行測(cè)定的次數(shù)。

2.3.1.3曲線校準(zhǔn)過(guò)程引入的不確定度u（cal）rel

曲線校準(zhǔn)過(guò)程中由標(biāo)準(zhǔn)溶液配制和標(biāo)準(zhǔn)工作曲線擬合引入的相對(duì)不確定度合成為：

2.3.2樣品質(zhì)量引入的不確定度umrel

樣品的稱(chēng)量質(zhì)量為5.00 g，使用賽多利斯TE212-L電子天平稱(chēng)量，該天平經(jīng)計(jì)量檢定為Ⅲ級(jí)天平，依據(jù)檢定證書(shū)和JJG 1036—2008《電子天平檢定規(guī)程》［24］，該天平檢定分度值為0.1 g，稱(chēng)量范圍0.2 g≤m≤5 g時(shí)最大允許誤差為按照均勻分布計(jì)算，為B相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)不確定度為：

2.3.3樣品加標(biāo)過(guò)程引入的不確定度ualrel

目標(biāo)樣品用10～1 000 μL移液器向鱈魚(yú)空白基質(zhì)樣品中加入1 000 μL質(zhì)量濃度為4 μg/mL的標(biāo)準(zhǔn)工作液制備而成，實(shí)驗(yàn)溫度為（20±2）℃，計(jì)算過(guò)程同uVsrel，為B類(lèi)評(píng)定。由此產(chǎn)生的標(biāo)準(zhǔn)不確定度為ual=5.773 7 μL，相對(duì)不確定度為ualrel=5.773 7/1 000=0.005 8。

樣品前處理過(guò)程中產(chǎn)生的不確定度屬于A類(lèi)評(píng)定，采用回收率6 個(gè)平行樣品（鱈魚(yú)、鯉魚(yú)、鳙魚(yú)樣品各2份）添加回收率的相關(guān)數(shù)據(jù)進(jìn)行計(jì)算。回收率分別為 79.3%、77.6%、79.7%、75.7%、76.3%、75.5%。根據(jù)回收率平均值（ec）的標(biāo)準(zhǔn)差的相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)不確定度采用平均值的相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差：

平行樣品提取樣液中藥物質(zhì)量濃度分別為3.39、3.18 μg/mL，提取樣液定容體積1.00 mL，樣品質(zhì)量5.00 g，檢測(cè)結(jié)果分別為678、636 μg/kg，平均值回收率校正因子校正，樣品中甲基睪酮?dú)埩袅繖z測(cè)結(jié)果分別為877、823 μg/kg，平均值

2.3.5由定容體積引起的不確定度uVrel

樣品使用1 mL移液器加入1.0 mL流動(dòng)相定容。流動(dòng)相的主要組成為甲醇，實(shí)驗(yàn)在（20±2）℃條件下進(jìn)行，為B類(lèi)評(píng)定，計(jì)算過(guò)程同uVsrel，樣品定容引人的相對(duì)不確定度為uVrel=0.006 0。

2.3.6由液相色譜儀引入的不確定度uuvwrel

根據(jù)儀器檢定證書(shū)，整機(jī)定量重復(fù)性RSD6=0.12%，為B類(lèi)評(píng)定。

測(cè)試過(guò)程隨機(jī)效應(yīng)通過(guò)樣品的重復(fù)測(cè)定進(jìn)行不確定度評(píng)定，屬于A類(lèi)評(píng)定。測(cè)定樣品中甲基睪酮?dú)埩袅浚瑱z測(cè)結(jié)果分別為678、636 μg/kg，平均值按照矩形分布處理，則測(cè)試過(guò)程隨機(jī)效應(yīng)導(dǎo)致的標(biāo)準(zhǔn)不確定度和相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)不確定度分別為：

2.4合成不確定度及擴(kuò)展

合成不確定度采用方和根法，即將各個(gè)標(biāo)準(zhǔn)不確定度分量平方后求其和再開(kāi)根。因不確定度分量較多且其大小也比較接近時(shí)，估計(jì)為正態(tài)分布，選95%的包含概率時(shí)，包含因子取k=2，對(duì)不確定度進(jìn)行擴(kuò)展。

2.4.1合成相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)不確定度urel

將測(cè)試過(guò)程中由曲線校準(zhǔn)、稱(chēng)量質(zhì)量、樣品加標(biāo)、定容體積、樣品前處理過(guò)程、液相色譜儀、隨機(jī)效應(yīng)引入的相對(duì)不確定度合成為：w=（850±79）μg/kg；k=2。

2.4.2合成相對(duì)擴(kuò)展不確定度Urel

在95%置信水平下，k=2時(shí)，試樣甲基睪酮含量測(cè)定的相對(duì)擴(kuò)展不確定度為：Urel=k×urel由實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)的平均值計(jì)算試樣中甲基睪酮含量w=（850±79）μg/kg，故其標(biāo)準(zhǔn)不確定度為擴(kuò)展標(biāo)準(zhǔn)不確定度為U=k×u=0.093 0×850=79.0 μg/kg。

2.5測(cè)量結(jié)果報(bào)告

目標(biāo)樣品甲基睪酮含量測(cè)試結(jié)果表示為w=（850±79）μg/kg；k=2。無(wú)論是給出擴(kuò)展不確定度還是標(biāo)準(zhǔn)不確定度，通常不確定度的有效數(shù)字不多于兩位。測(cè)試結(jié)果應(yīng)根據(jù)所給出的不確定度進(jìn)行修約。

2.6各影響因素的不確定結(jié)果

各影響因素的不確定結(jié)果見(jiàn)表4。

表4　各影響因素的不確定度結(jié)果Table 4 Uncertainty evaluation for the determination

3　結(jié) 論

對(duì)實(shí)驗(yàn)結(jié)果進(jìn)行不確定度評(píng)定時(shí)要考慮試驗(yàn)過(guò)程的每個(gè)環(huán)節(jié)，但不是所有不確定度的來(lái)源都有評(píng)估其不確定度所需的數(shù)據(jù)，且這些來(lái)源也不一定是獨(dú)立的，如抽樣方法、樣品的均一性、樣品的儲(chǔ)存條件、樣品的影響、空白修正、方法的偏差等，可依據(jù)實(shí)際情況篩選進(jìn)行取舍。當(dāng)被測(cè)量值在法規(guī)給出規(guī)定限值時(shí)，應(yīng)當(dāng)關(guān)注限值中是否給出不確定度的允許量，并在評(píng)價(jià)符合性時(shí)依據(jù)不同情況考慮分析結(jié)果的不確定度。根據(jù)t檢驗(yàn)判斷平均回收率與1.0有顯著性差異，檢測(cè)結(jié)果必須經(jīng)過(guò)校正。通過(guò)對(duì)試驗(yàn)過(guò)程中各相對(duì)不確定度分量分析可知，試驗(yàn)過(guò)程中不確定度的主要來(lái)源為測(cè)試過(guò)程的隨機(jī)效應(yīng)，其次為標(biāo)準(zhǔn)校準(zhǔn)過(guò)程，以及樣品的處理過(guò)程。因此建議在實(shí)際操作過(guò)程中增加平行樣的測(cè)定次數(shù)，不斷熟悉樣品處理過(guò)程以提高回收率，并且應(yīng)盡量減少標(biāo)準(zhǔn)溶液稀釋倍數(shù)。此外，實(shí)驗(yàn)室建立良好的實(shí)驗(yàn)環(huán)境條件、使用高精密度和穩(wěn)定性的儀器設(shè)備并定期進(jìn)行檢定/校準(zhǔn)，使用高純度的有證標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)、開(kāi)展新檢測(cè)項(xiàng)目時(shí)進(jìn)行方法確認(rèn)并選用性能參數(shù)較好的檢測(cè)方法等都將有利于提高檢測(cè)結(jié)果的準(zhǔn)確性和可靠性。

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Uncertainty Evaluation for Determination of Methyltestosterone Residue in Aquatic Products by High Performance Liquid Chromatography

ZHANG Huifeng1， QI Tianhua2
（Changchun Inspection Center for Aquatic Products Safety and Quality， Changchun 130033， China）

According to the basic methods for uncertainty evaluation from Evaluation and Expression of Uncertainty in Measurement （JJF1059-2012） and Guidance on Evaluating the Uncertainty in Chemical Analysis （CNAS-GL-06） a mathematical model of uncertainty evaluation for the determination of methyltestosterone residue in aquatic products by HPLC was established. The sources of determination uncertainty were analyzed and each component of uncertainty was quantified. The combined standard uncertainty and expanded uncertainty were finally obtained. The major uncertainty sources were the random effects in testing process， curve calibration and sample pretreatment.

uncertainty； methyltestosterone ； high performance liquid chromatography （HPLC）； aquatic products

TS207.3

A

1002-6630（2015）18-0199-05

10.7506/spkx1002-6630-201518037

2014-12-19

長(zhǎng)春市水產(chǎn)品質(zhì)量安全風(fēng)險(xiǎn)評(píng)估專(zhuān)項(xiàng)（2014-1485）

張惠峰（1982—），女，副研究員，碩士，主要從事水產(chǎn)品質(zhì)量安全及水環(huán)境研究。 E-mail：xiaoqiutong@126.com