腫瘤相關(guān)基因檢測(cè)方法及研究進(jìn)展

魏敏

【摘 要】腫瘤是危害人類健康最嚴(yán)重的疾病之一，人們與之斗爭(zhēng)了許多年，但收效甚微。目前腫瘤治療中亟待解決得問題就是早期診斷和腫瘤轉(zhuǎn)移，隨著分子生物學(xué)的飛速發(fā)展，腫瘤學(xué)研究已進(jìn)入到基因與分子水平，發(fā)現(xiàn)了許多與腫瘤發(fā)生、發(fā)展、演變相關(guān)的基因變化，包括癌基因、抑癌基因、腫瘤轉(zhuǎn)移基因、腫瘤轉(zhuǎn)移抑制基因、腫瘤相關(guān)病毒基因等，越來越多的實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明，許多癌細(xì)胞的基因組DNA有癌基因或抑癌基因的缺失或點(diǎn)突變等改變，這些改變可作為某些腫瘤早期檢測(cè)的基因標(biāo)志[1]。另外還發(fā)現(xiàn)與腫瘤轉(zhuǎn)移過程有關(guān)的腫瘤轉(zhuǎn)移基因、腫瘤轉(zhuǎn)移抑制基因，也可作為基因檢測(cè)的標(biāo)志物。應(yīng)用分子生物學(xué)技術(shù)，對(duì)這些基因進(jìn)行檢測(cè)，是目前腫瘤基因診斷的一個(gè)重要方式。本文對(duì)腫瘤相關(guān)的基因和檢測(cè)方法進(jìn)行了綜述。

【關(guān)鍵詞】腫瘤 基因 檢測(cè)方法

1腫瘤相關(guān)基因

1.1癌基因

癌基因是指在自然條件下，具有潛在的誘導(dǎo)細(xì)胞惡性轉(zhuǎn)化的基因。癌基因主要是促進(jìn)細(xì)胞生長和繁殖，并且阻止其發(fā)生終末分化傾向。在研究逆轉(zhuǎn)錄病毒時(shí)發(fā)現(xiàn)，將某些逆轉(zhuǎn)錄病毒的基因片段潛入細(xì)胞基因中，并使這些基因迅速地表達(dá)，結(jié)果是被嵌入的細(xì)胞呈惡性轉(zhuǎn)變，特別是如果這些逆轉(zhuǎn)錄病毒進(jìn)入正常細(xì)胞染色體DNA的特定部位，就能很快地改變這些連接部位的基因表達(dá)，而使細(xì)胞癌變。

1.2抑癌基因

機(jī)體中有一類對(duì)正常細(xì)胞增殖起負(fù)調(diào)節(jié)作用的基因稱為抑癌基因，當(dāng)這類基因丟失、失活或變異時(shí)，往往會(huì)促使細(xì)胞失控而呈惡性生長[2]。

1.3腫瘤轉(zhuǎn)移相關(guān)基因和轉(zhuǎn)移抑制相關(guān)基因

近年來，在腫瘤轉(zhuǎn)移機(jī)制研究中的重要進(jìn)展，就是發(fā)現(xiàn)了一些與腫瘤轉(zhuǎn)移呈正負(fù)相關(guān)的腫瘤轉(zhuǎn)移相關(guān)基因和轉(zhuǎn)移抑制相關(guān)基因。在這里，我們把腫瘤轉(zhuǎn)移相關(guān)基因定義為一個(gè)廣義的概念，就是指與腫瘤的轉(zhuǎn)移呈正相關(guān)，即其基因的改變和表達(dá)能促進(jìn)或?qū)е履[瘤轉(zhuǎn)移的基因。我們把對(duì)腫瘤轉(zhuǎn)移起負(fù)調(diào)控作用，即抑制腫瘤轉(zhuǎn)移發(fā)生、形成的基因定義為腫瘤轉(zhuǎn)移抑制相關(guān)基因，其主要作用是抑制腫瘤細(xì)胞的轉(zhuǎn)移表型。

2腫瘤相關(guān)基因檢測(cè)

腫瘤相關(guān)基因檢測(cè)是指利用現(xiàn)代分子生物學(xué)的方法檢測(cè)那些和腫瘤相關(guān)的基因的突變及表達(dá)異常。這些方法有很多，包括Southern印跡雜交、Northern印跡雜交、斑點(diǎn)雜交、印跡雜交、原位雜交，以及各種PCR技術(shù)和基于PCR技術(shù)的RFLP和SSCP。另外基因診斷中最直接、最準(zhǔn)確的方法就是直接測(cè)序，由于自動(dòng)測(cè)序技術(shù)的發(fā)展及商業(yè)化，DNA測(cè)序技術(shù)有望應(yīng)用于臨床。

DNA芯片技術(shù)是近年來發(fā)展較為迅速的一種新技術(shù)，它是在固定相上合成大量標(biāo)記的探針，然后和待測(cè)基因雜交，通過檢測(cè)雜交信號(hào)來對(duì)基因進(jìn)行分析，不僅能夠檢測(cè)出突變和多態(tài)性，而且具有高效、快速、敏感和自動(dòng)化等特點(diǎn)將成為最有潛力的新一代基因診斷技術(shù)。Hacia等用基因芯片檢測(cè)遺傳性乳腺癌和卵巢癌基因BRCA1突變體，檢測(cè)了35例患者樣本，發(fā)現(xiàn)其中14例有基因突變，檢測(cè)準(zhǔn)確率達(dá)到99%。Ficarra研制一種基因芯片用于監(jiān)測(cè)與腫瘤相關(guān)的p53基因全長編碼序列，一般認(rèn)為50%以上的腫瘤患者該基因會(huì)發(fā)生突變。Prix利用芯片研究，發(fā)現(xiàn)結(jié)腸癌患者糞便中存在K-ras基因的突變[4]。Ollins研制一種基因芯片來獲取瘤細(xì)胞生長相關(guān)基因的表達(dá)模式，從而為人類對(duì)腫瘤疾病的發(fā)病機(jī)制及診斷作出重要貢獻(xiàn)[3]。目前已制備有集成p53基因正常序列及幾百個(gè)已知突變的特異探針的基因芯片，將在癌癥的診斷、分期、分類中發(fā)揮重要的作用。

3 結(jié)語

腫瘤基因的檢測(cè)雖然取得了重大進(jìn)展，但是由于癌癥的發(fā)病是多因素的，基因診斷應(yīng)用于腫瘤的診斷存在一定的局限性。另外，癌基因和抑癌基因的突變多是后天的，基因的改變只限于腫瘤組織的DNA，因此基因檢測(cè)的標(biāo)本應(yīng)應(yīng)取自腫瘤組織，而不能采用外周血或其他組織細(xì)胞，但是如果是發(fā)現(xiàn)了腫瘤早期診斷就失去了意義，引人注目的是，Sidransky和Tada已首次從大腸癌患者糞便以及胰腺癌病人胃抽吸液及糞便中成功地檢出了K-ras基因突變。Hardingham等建立了檢測(cè)血液中結(jié)、直腸癌細(xì)胞ras基因突變的方法，陽性率為33%（9/27），其中7人由于復(fù)發(fā)、轉(zhuǎn)移而死亡，血液檢測(cè)結(jié)果與生存期顯著相關(guān)[5]。當(dāng)然，這種無創(chuàng)傷性基因早期診斷的新途徑還有待于進(jìn)一步研究。此外，癌基因的活化或抑癌基因的失活，都只是發(fā)生腫瘤的原因之一，而且同一種基因改變?cè)谕N腫瘤病例中的檢出率亦有所差別。所以有時(shí)僅靠基因檢測(cè)是不行的，往往需要結(jié)合其他手段檢測(cè)。盡管如此，基因檢測(cè)對(duì)腫瘤的診斷、鑒別診斷、療效檢測(cè)、預(yù)后判斷等具有重要的參考價(jià)值，隨著對(duì)腫瘤發(fā)病機(jī)制的深入研究，腫瘤的基因檢測(cè)必將取得重大突破。

參考文獻(xiàn)：

[1]劉向陽.腫瘤的基因診斷和基因治療[J].中國醫(yī)刊，1999，34（4）：58.

[2]馬文麗，鄭文嶺.分子腫瘤學(xué)[M].2003.

[3]劉濤，王春友，張錦輝.胰腺癌患者血漿k-ras基因與腫瘤標(biāo)志物聯(lián)合檢測(cè)及其意義[J]臨床消化病雜志，2002（14）2：54.

[4]劉同華.基因芯片技術(shù)及其在腫瘤研究中的應(yīng)用[J].重慶醫(yī)學(xué)，2003，32（9）1266～1267.

[5]喬玉歡，陳瑞川.腫瘤轉(zhuǎn)移檢測(cè)標(biāo)志基因研究進(jìn)展[J].國外醫(yī)學(xué)腫瘤學(xué)分冊(cè)，2000.（1）27：56～57.