新城疫活疫苗（lasota株）溶解在不同溫度水中病毒含量變化情況

龔美光 郎應仁

摘 要：通過試驗檢測雞場常用的高端和低端兩種新城疫（lasota株）活疫苗初始病毒含量（EID50/羽份），并模擬飲水免疫，將兩種疫苗稀釋后分別放在10 ℃、20 ℃和30 ℃溫度中水浴中1 h、2 h和3 h，檢測在不同溫度、不同水浴時間下疫苗病毒含量（EID50/羽份）的變化，為生產中飲水免疫提供理論依據。結果表明：高端和低端新城疫活疫苗初始病毒含量分別為106.5 EID50/羽份和106.0 EID50/羽份，高端疫苗病毒含量高于國家標準（106.0 EID50/羽份）3.2倍，低端疫苗和國家標準一致；放置在水浴中的疫苗病毒含量隨著時間增加呈下降趨勢，水溫越高下降越快；高端疫苗在10 ℃ 3 h、20 ℃ 2 h和30 ℃ 1 h條件下可以保證病毒含量（EID50/羽份）不低于國家標準，而低端疫苗無論溶解在哪個溫度的水中后，進行免疫的病毒含量（EID50/羽份）都低于國家標準。

關鍵詞：新城疫；病毒含量；飲水免疫

中圖分類號：S852.4+3 文獻標識碼：A 文章編號：1001-0769（2015）11-0048-02

新城疫（Newcastle Disease，ND）是由新城疫病毒（Newcastle Disease Virus，NDV）引起的家禽重要傳染病，可導致多種禽類發生高死亡率[1]。該病嚴重危害養雞業的發展，常給養雞業帶來巨大的經濟損失，被國際獸疫局（OIE）列為必須通報的重要疫病之一。疫苗在ND的控制上起到了重要的作用，當前疫苗免疫效力的評價指標主要為臨床死亡率，由于ND疫苗的廣泛使用，ND的死亡率得到了較好的控制，但免疫雞群中非典型ND的發生現象卻比較普遍[2]，飲水免疫新城疫活疫苗是防控新城疫過程中重要的免疫方式。然而，很多養殖戶對飲水免疫時的時間和飲水溫度對疫苗效價的影響沒有明確的認識。免疫操作時，常出現水溫太高或飲水時間太長，結果導致疫苗病毒效價損失，從而影響免疫效果，引發非典型新城疫的發生。本試驗通過檢測新城疫疫苗溶解在不同溫度的水中和不同的飲水時間下效價損失情況，來指導現場飲水免疫時根據水溫確定飲水免疫的時間。

1 材料與方法

1.1 試驗材料

1.1.1 疫苗

雞新城疫（lasota株）活疫苗（高端和低端各一瓶），購自于濟南有疫苗經營許可證的經銷商處，生產批號分別為：20150508、20150519，都是最新批次疫苗。

1.2 2SPF雞胚

11日齡SPF雞胚，購自山東農科院濟南家禽研究所。

1.3 試驗方法

新城疫疫苗置于不同溫度的水中和不同飲水時間下病毒含量（EID50/羽份）測定：將一瓶新城疫活疫苗（1 000羽份）用生理鹽水稀釋成1羽份/0.1 mL，平均分成3份，分別置于在10 ℃、20 ℃和30 ℃水浴中，每組在0 h、1 h、2 h和3 h時吸取0.1 mL，進行10倍稀釋，每個稀釋度尿囊腔接種10日齡SPF雞胚5枚，每枚雞胚接種0.1 mL，置37 ℃繼續孵育120 h，48 h內死亡的雞胚棄去不計；在48 h～120 h內死亡的雞胚，隨時取出，收獲雞胚尿囊液，將同一稀釋度的雞胚尿囊液等量混合，分別測定紅細胞凝集價。至120 h，取出所有活胚，逐個收獲雞胚尿囊液，分別測定紅細胞凝集價，凝集價不低于1∶160（微量法1∶128）者判定感染，計算EID50。每羽份病毒含量應該不低于106.0EID50[3]。

2 結果與分析

2.1 高端新城疫活疫苗檢測結果

從表1可以看出高端新城疫活疫苗初始病毒含量為106.5 EID50/羽份，在10 ℃水溫下3 h時病毒含量還可以達到106.17 EID50，仍高于國家標準106.0 EID50/羽份； 20 ℃水溫下2 h病毒含量就已經下降到國家的標準線106.0 EID50/羽份；在30 ℃水溫下1 h疫苗病毒含量就下降到國家標準線106.0 EID50/羽份。

2.2 低端新城疫活疫苗檢測結果

從表2可以看出低端疫苗初始病毒含量為106.0 EID50/羽份，符合國家標準，但是放在10 ℃、20 ℃和30 ℃三個不同溫度的水浴鍋內各1 h內抗原含量都降到國家標準以下，水溫越高效價損失越嚴重。

3 討論

從表1可以看出高端新城疫活疫苗初始病毒含量為106.5 EID50/羽份，是國家標準要求106.0的3.2倍（通過計算得知），在10 ℃水溫下3 h時病毒含量還可以達到106.17 EID50，如果按照正常計量免疫，10 ℃水溫中飲水免疫時間達到3 h也可以達到正常的免疫效果；20 ℃水溫下2 h病毒含量就已經下降到國家的標準線106.0 EID50/羽份，說明在20 ℃水溫中飲水免疫時間不能超過2 h；在30 ℃水溫下1 h疫苗病毒含量就下降到國家標準線，說明在30 ℃水溫中飲水免疫時間不能超過1 h。在養殖生產中，絕大多數飲水免疫用水的溫度都超過20 ℃以上，甚至在炎熱的夏季飲水免疫用水的溫度要超過30 ℃，如果飲水免疫的時間沒有嚴格的限制就會導致免疫效果差，甚至引起免疫失敗。除了水溫和飲水的時間對抗原含量的影響，還受其他多方面的因素影響，比如：水中的重金屬含量、是否含有消毒劑、水線的清潔程度等[4]，所以要想使飲水免疫能達到我們預期的效果首先要保證免疫用水的溫度和免疫時間，水溫達到20 ℃時保證2 h內飲完，水溫達到30 ℃以上時要保證1 h內飲完疫苗。根據作者的臨床經驗，最好采用2次飲水免疫法，即每次所使用的疫苗分成兩次免疫，每次免疫的時間不超過1 h，這樣既能避免水溫對疫苗效價的影響，又能使雞群飲水免疫更均勻。

本試驗選擇的低端新城疫活疫苗出廠時，新城疫病毒效價符合國家標準（106.0 EID50/羽份），但無論溶解在哪個溫度水中，在進行免疫時疫苗的病毒效價都低于國家標準，如在20 ℃水溫中1 h效價變為105.6=4×105=0.4×106 ，所以，免疫時至少加2.5倍量才能使1 h內達到應有的免疫效果。但有些低端疫苗經過多次運輸、長時間保存或儲存不當，在使用前疫苗病毒效價已經低于國家標準。如果養殖戶還按要求計量免疫，就可能達不到正常的免疫效果，所以就需要加大計量去免疫。但是，具體加多少倍量才能達到有效計量，很難去估量，也就出現了部分養殖戶在使用低端疫苗時盲目加大計量的現象。相反，一些高端優質疫苗在生產時，廠家考慮到各種因素導致的疫苗效價損失[5]，疫苗出廠時抗原含量超出國家標準幾倍（本試驗測得的數值為3.2倍），只要雞群健康、疫苗儲存和免疫操作得當，就會達到良好的免疫效果。建議各位養殖朋友盡量選擇優質的新城疫活疫苗，利用科學的免疫操作方式，保證雞群新城疫的防控效果。

參考文獻：（5篇，略）