隋國香
1胚胎因素
胚胎采集。采胚方法可選擇輸卵管采集法和子宮采集法。輸卵管采集法一般是在供體母羊受精后前4天使用,盡管具有很高的回收率,但術后非常容易導致卵巢和輸卵管傘出現黏連,從而使卵子以后的接收和運行過程受到影響,如果出現雙側同時黏連的現象,甚至可能使其終生無法受孕。目前,通常采用子宮采集法收集胚胎,通常在受精后的第6天進行,雖然這種方式的回收率比輸卵管回收略低,但收集胚胎的胚齡稍大,同時經過子宮環境的自然選擇,即使有一些胚胎可能發生退化,但移植存活的胚胎后能夠使受體母羊具有很高的妊娠率。
胚胎形態。正常胚胎的形態是透明帶完整、外觀飽滿,卵間隙較小,卵裂球界限清晰、大小均勻,同時細胞質也很均勻,沒有明顯的顆粒狀物。如果胚胎發育不正常,其透明帶發生變形,外觀不圓整,卵間隙較大,卵裂球界限不清楚,細胞質比較渾濁,存在破碎的塊狀物。通常來說,胚胎具有正常的形態和發育時期,移植后具有較大的可能性發育成活。但是并不是指形態稍差的胚胎完全不能夠用于移植胚胎,這是由于胚胎早期的調整性較大,一些小的缺陷能夠在之后發育過程中進行彌補,然后再繼續發育。因此,只要胚胎具有形態基本正常的卵裂球,即使形態存在一些其他問題,也能夠用于移植,常常也能夠使受體母羊受孕。
胚胎移植的部位。在胚胎移植過程中,移植的部位要根據胚胎的實際日齡以及采集前所在的部位來確定。通常來說,胚胎移植部位要與采集胚胎的部位相對應。在輸卵管內移入胚胎時,在其深部移入具有較高的受胎率。在子宮角移入胚胎時,在子宮角項部也就是輸卵管一側的子宮角接合處附近移入5~6日齡的胚胎的存活率要高于移入到子宮角中部,之后隨著胚胎日齡的增長,胚胎的移植部位也要相應的朝子宮角基部移動。一般來說,母羊發情后的第7天卵巢靜脈內的孕酮濃度達到最高,并且能夠相對恒定地持續到第15天,因此使母羊發情期的后段,受體與供體將有可能存在一段幅度較大的同步時間,這樣能夠保證移植成功率較大。
2受體母羊
對受體母羊進行選擇時,以選細毛綿羊為最好,這是由于細毛綿羊具有較強的季節性發情。胚胎移植通常選擇在9~12月份進行,此時細毛綿羊機體正處于體質健壯、精力旺盛的階段,能夠使移植妊娠率較高。而其他品種母羊具有較差的同期發情性,因此導致黃體形成不一致的成熟度。另外,受體母羊最好選擇已經生產一胎以上的經產母羊,年齡是2~4歲。如果受體母羊年齡較大,大部分會由于子宮內膜發生損傷、體質較差等原因而導致移植受胎率受到影響。另外,受體母羊在進行胚胎移植的前后必須加強飼養管理,這是由于受體母羊飼養管理的好壞直接與受胎率存在關系,也就是受體母羊胚胎移植前后的營養狀況是否適宜會對整個生殖過程產生直接影響。如果受體母羊膘情良好,大多數胚胎著床后都能夠正常發育成活。但如果營養條件較差,不利于胚胎著床和羔羊產出后的生長,使受體胚胎移植效果明顯降低。
3移植操作
移植胚胎時可采取手術法或者非手術法。采取手術法移植胚胎能夠損傷供體母羊,導致卵巢、子宮以及周圍組織出現黏連,從而使優良種母羊重復使用的次數減少,不過采取腹腔鏡技術進行非手術移植能夠將這些缺點克服。據報道,當供、受體母羊的非同期發情時間在8h以內,采取腹腔鏡移植胚胎的妊娠率基本上與正規手術法移植相同。但是要在生產實踐中推廣非手術法胚胎移植,還需要對操作技術進一步熟練,使用的儀器設備還要不斷改進,如此才能使妊娠率提高效率。供體和受體母羊術后必須進行精心護理,盡可能防止發生應激反應。供體母羊術后發情屬于正常現象,但受體母羊正好與之相反,如果術后出現發情,說明沒有成功妊娠,也就是移植失敗,這可能是由于胚胎在移植過程中丟失或移植后死亡造成。
4應激因素
在胚胎移植過程中,受體母羊如果改變飼養管理,或者氣候溫度發生改變,或者手術前的處于饑餓狀態等,這些應激因素都能夠導致機體出現非特異性應答反應,引起其體內的黃體出現退化,進而對胚胎的正常著床和發育產生影響。如果受體母羊處于持續的應激情況下,機體內的胎盤激素、褪黑素會失去活性,進而影響黃體狀態,最終使胚胎的生存受到影響。另外,如果溫度過高,能夠使受體母羊減少分泌孕酮及促乳素,造成胚胎遲緩發育,甚至可能中止妊娠。因此,胚胎移植最好不要在7~9月份溫度過高的階段進行。