楚雄地區(qū)幾種傳統(tǒng)中藥提取物的生物活性初探

張明 鄒云川 丁重帥 夏龍

摘要 [目的]研究幾種楚雄地區(qū)常見中藥材提取物的抑菌活性。[方法]選取了云南省楚雄地區(qū)4種常見中藥材，采用不同溶劑，選用回流提取，測定提取物抑菌活性。[結(jié)果]山藿香、水金鳳、繡球防風(fēng)、透骨草這4種藥用植物采用50%乙醇加熱回流提取3次所得產(chǎn)物抑菌效果最好，對4種細菌和2種真菌均有不同程度的抑制作用。[結(jié)論]這幾種藥材來源廣、提取方便、抑菌效果好，可為進一步開發(fā)提供理論依據(jù)。

關(guān)鍵詞 藥用植物；提取物；抑菌活性

中圖分類號 S567 文獻標識碼 A 文章編號 0517-6611（2015）34-166-02

云南省是世界上藥用植物資源分布最多的區(qū)域之一，楚雄彝族自治州地處云南省中部，楚雄州境內(nèi)氣候?qū)賮啛釒Ъ撅L(fēng)氣候，但由于山高谷深，氣候垂直變化明顯。因為獨特的地理位置和氣候條件，楚雄州的動植物資源豐富，楚雄州有林地面積11.54萬hm2，森林面積10.89萬hm2，森林覆蓋率達39.5%。楚雄州的植物種類有6 000多種，主要是森林、中草藥、野生食用菌等，其中藥用植物資源豐富，近年來逐漸成為經(jīng)濟發(fā)展熱門產(chǎn)業(yè)[1-2]。

山藿香、水金鳳、繡球防風(fēng)、透骨草這幾種藥用植物在楚雄州內(nèi)大部分地區(qū)都有生長，一直作為地方性傳統(tǒng)藥材使用，前人多從藥用角度進行研究，也有一些藥理作用文獻報道[3-5]，但對這幾類藥材的抑菌活性等研究未見報道，因此筆者采用帶藥平板涂布法和菌絲生長速率法分別測定了這幾種藥材對病原微生物的生物活性，為這些傳統(tǒng)藥用植物進一步綜合開發(fā)利用提供科學(xué)依據(jù)。

1 材料與方法

1.1 材料

1.1.1 藥材。山藿香Teucrium viscidum Bl.var.viscidum；水金鳳Impatiens nolitangere L.；繡球防風(fēng) Leucas ciliata Benth.；透骨草 Phryma leptostachya L.subsp.asiatica（Hara）Kitamura；所有藥材均采自楚雄周邊地區(qū)，自然曬干，全株粉碎。

1.1.2 菌種。細菌：大腸埃希菌、金黃色葡萄球菌、枯草芽孢桿菌、變形桿菌；真菌：白色念珠菌、星狀石膏樣毛癬菌、紅色毛癬菌。

1.1.3 培養(yǎng)基。細菌培養(yǎng)基為營養(yǎng)瓊脂培養(yǎng)基，真菌培養(yǎng)基為沙氏培養(yǎng)基。

1.1.4 儀器。恒溫干燥箱、植物粉碎機、超聲波清洗儀、恒溫電熱套、旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀、手持壓力滅菌鍋、雙人單面無菌操作臺、恒溫培養(yǎng)箱。

1.2 方法

1.2.1 供試品處理。分別稱取山藿香、水金鳳、繡球防風(fēng)和透骨草各3份，每份48 g，編號1#～12#，裝入圓底燒瓶；1#、4#、7#、10#加入35%乙醇，2#、5#、8#、11#加入50%乙醇，3#、6#、9#、12#加入蒸餾水，加熱回流提取3次，3次回流固液比分別為1∶12、1∶10、1∶8，回收3次溶液，濃縮提取液，轉(zhuǎn)移至容量瓶，定容至100 ml，最終得3份山藿香提取液（1#、2#、3#）、3份水金鳳提取液（4#、5#、6#）、3份繡球防風(fēng)提取液（7#、8#、9#）、3份透骨草提取液（10#、11#、12#），測抑菌情況。

1.2.2 藥材提取液對致病細菌抑菌效果測定。采用帶藥平板涂布法[6]進行測定。

1.2.2.1 帶藥平板制備。將供試菌種在營養(yǎng)瓊脂平板培養(yǎng)基上擴大培養(yǎng)，備用。將藥材提取液滅菌，備用。無菌條件下，吸取1 ml提取液（對照組用無菌水代替）與9 ml熱熔的培養(yǎng)基混勻，使供試培養(yǎng)基藥液濃度為相當于投藥量0.048 g/ml；倒入直徑為9 cm的玻璃培養(yǎng)皿中，制成薄厚均勻的帶藥平板培養(yǎng)基備用。

1.2.2.2 接種。用接種環(huán)挑取少量供試菌到50 ml的無菌水中，制成濃度約106～107 cfu/ml的菌懸液。吸取100 μl菌懸液至對照及帶藥平板培養(yǎng)基，用滅菌的涂布棒將菌液涂布均勻，每個處理設(shè)3個重復(fù)。

1.2.2.3 培養(yǎng)觀察。置于27±1 ℃恒溫培養(yǎng)箱中培養(yǎng)，分別于24、48 h觀察結(jié)果，平板上只要有菌落生長，無論菌落大小均用“﹢”表示，平板上完全沒有菌落生長，用“﹣”表示。

1.2.3 藥材提取液對真菌抑菌效果測定。白色念珠菌抑菌情況測定，培養(yǎng)基改為沙氏培養(yǎng)基，其余方法與細菌抑菌活性測定相同方法。星狀石膏樣毛癬菌、紅色毛癬菌采用菌絲生長速率法[7]進行測定。

1.2.3.1 帶藥平板制備。將供試菌種在沙氏培養(yǎng)基平板上擴大培養(yǎng)，備用。將藥材提取液滅菌，備用。無菌條件下，吸取1 ml藥液（對照組用無菌水代替）與9 ml熱熔的培養(yǎng)基混勻，使供試培養(yǎng)基藥液濃度為相當于投藥量0.048 g/ml；倒入直徑為9 cm的玻璃培養(yǎng)皿中，制成薄厚均勻的帶藥平板培養(yǎng)基備用。

1.2.3.2 接種。用直徑為0.4 cm的打孔器在已擴大培養(yǎng)的供試菌落邊緣切取菌餅，將菌餅接入帶藥培養(yǎng)基上，使有菌絲的一面朝下，每皿接3個菌餅，呈品字形分布，每個處理設(shè)3個重復(fù)。

1.2.3.3 培養(yǎng)觀察。置27±1 ℃的恒溫培養(yǎng)箱中培養(yǎng)，用十字交叉法測量培養(yǎng)120 h（星狀石膏樣毛癬菌）、148 h（紅毛癬菌）后的菌落直徑，根據(jù)下式求出抑制率：菌落直徑（cm）= 測量直徑-0.4、抑制率=（對照菌落直徑-處理菌落直徑）/對照菌落直徑×100%。

2 結(jié)果與分析

2.1 采用帶藥平板涂布法抑菌情況

從表1可以得出，4種不同的藥材對4種細菌均有抑菌效果，在相當于投料量為0.048 g/ml濃度下，對白色念珠菌無抑菌效果；4種不同的藥材采用不同的溶劑提取，活性有差異；相同條件下，培養(yǎng)24、48 h抑菌效果差異不大，除個別菌抑菌情況有變化，大部分結(jié)果相同。建議采用48 h抑菌效果作為最終結(jié)果判定標準。

2.2 菌絲生長速率法抑菌情況

從表2可以看出，4種不同的藥材對星狀石膏樣毛癬菌和紅毛癬菌這2種真菌均有不同程度的抑制作用；4種藥材采用3種不同的溶劑提取，50%乙醇為溶劑的組別（2#、5#、8#、11#）比采用其他溶劑（35%乙醇、水）提取的組抑菌效果更好。

3 結(jié)論

通過試驗表明，山藿香、水金鳳、繡球防風(fēng)、透骨草這幾種藥用植物采用50%乙醇回流提取3次之后所得提取物生物活性較好，對4種細菌和2種真菌均有不同程度的抑制效果。

這幾種藥材在楚雄州境內(nèi)大部分地區(qū)均有生長，來源穩(wěn)定，提取方法簡便，便于大規(guī)模生產(chǎn)用，而提取物的生物活性明顯，可以進一步研究，并為綜合開發(fā)利用打下良好基礎(chǔ)。

參考文獻

[1] 劉愛忠，裴盛基，陳三陽.云南楚雄彝族植物崇拜的調(diào)查研究[J].生物多樣性，2000（1）：131-137.

[2] 胡鐘勝，龍偉，譚軍，等.楚雄煙區(qū)考煙生態(tài)氣候因子評析[J].中國煙草科學(xué)，2012（1）：71-76.

[3] 馮邦朝，蘇仕林.廣西大王嶺風(fēng)景區(qū)野生藥用維管植物初探[J].福建林業(yè)科技，2013（2）：157-163.

[4] 何淼，李海芯，呂明月，等.水金鳳的研究進展[J].北方園藝，2014（21）：196-199.

[5] 馮筱巍，左國營，王根春，等.28種云南中草藥體外抗菌活性篩選[J].西南國防醫(yī)藥，2011（7）：30-33.

[6] 覃旭，鄧業(yè)成，張明，等.粵蛇葡萄及幾種殺菌藥劑對柑橘潰瘍病菌的抑菌活性[J].農(nóng)藥，2010（8）：78-80.

[7] 玉艷珍，鄧業(yè)成，張明，等.中藥植物金線吊烏龜對植物病原真菌的抗菌活性[J].植物保護，2010，36（2）：123-126.