金絲桃苷對(duì)免疫抑制小鼠抗氧化能力和免疫功能的影響

胡小艷 李博文

摘要 [目的]觀察金絲桃苷對(duì)小鼠抗氧化能力和免疫功能的影響。[方法] 將BALB/c小鼠隨機(jī)分成5組：空白對(duì)照組、免疫抑制組、給藥組（包括低劑量給藥組和高劑量給藥組）和陽(yáng)性對(duì)照組，測(cè)定胸腺指數(shù)和脾臟指數(shù)，機(jī)體過氧化物MDA、H2O2水平，總抗氧化能力TAOC及其酶TSOD，以及MPO、XOD、GSHPX和POD等與抗氧化能力相關(guān)酶的活性。[結(jié)果] 與空白對(duì)照組相比，免疫抑制組的胸腺指數(shù)、脾臟指數(shù)、TAOC、TSOD、MPO、GSHPX及POD活性顯著降低， MDA、H2O2和XOD活性顯著升高。給予金絲桃苷治療后，與免疫抑制組相比，胸腺指數(shù)、脾臟指數(shù)、TAOC、TSOD、MPO、GSHPX及POD的活性顯著升高， MDA、H2O2和XOD活性顯著降低。[結(jié)論] 金絲桃苷能通過提高免疫抑制小鼠體內(nèi)胸腺指數(shù)、脾臟指數(shù)，降低機(jī)體過氧化物MDA、H2O2，提高TAOC、TSOD、GSHPX及POD活性來清除機(jī)體過氧化物，降低XOD活性來減少過氧化物的產(chǎn)生，以此提高小鼠抗氧化能力，增加機(jī)體免疫功能。

關(guān)鍵詞 金絲桃苷；免疫抑制；抗氧化能力；免疫功能

中圖分類號(hào) S567 文獻(xiàn)標(biāo)識(shí)碼

A 文章編號(hào) 0517-6611（2015）34-170-03

金絲桃苷（Hyperoside）是從藤黃科（Clusiaceae）植物貫葉連翹（Hypericum perforatum Linn.）中提取的一種黃酮醇苷類化合物，不僅對(duì)神經(jīng)[1]和心血管系統(tǒng)[2]具有保護(hù)作用，還具有保護(hù)肝臟[3]、降低血脂的作用[4]。

目前，對(duì)金絲桃苷的研究集中在提取、分離及純化方面，以及對(duì)心腦血管、神經(jīng)系統(tǒng)等藥理活性方面，關(guān)于對(duì)機(jī)體抗氧化作用方面的研究很少。筆者將金絲桃苷給予免疫力低下的小鼠，通過測(cè)定小鼠脾臟指數(shù)和胸腺指數(shù)及與自由基產(chǎn)生和清除相關(guān)的6種酶活性，來探討金絲桃苷對(duì)免疫抑制小鼠抗氧化能力的影響。該研究將有助于在分子水平闡明藥物對(duì)機(jī)體抗氧化及提高免疫功能的機(jī)理，具有非常重要的理論和實(shí)用意義。

1 材料與方法

1.1 材料

1.1.1 試驗(yàn)動(dòng)物。BALB/c小鼠，體重18～22 g，雌雄各半，購(gòu)自徐州醫(yī)學(xué)院實(shí)驗(yàn)動(dòng)物有限公司。

1.1.2 藥物及試劑。金絲桃苷（純度為95.5%），提取于貫葉連翹，臨用時(shí)配制成滅菌水溶液；環(huán)磷酰胺，上海華聯(lián)制藥有限公司；黃芪多糖，成都市騰飛動(dòng)物藥業(yè)有限公司，臨用時(shí)配制成滅菌水溶液。

丙二醛（MDA）試劑盒、過氧化氫（H2O2）試劑盒、總超氧化物歧化酶（T-SOD）試劑盒、總抗氧化力（TAOC）試劑盒、髓過氧化物酶（MPO）試劑盒、黃嘌呤氧化酶（XOD）試劑盒、谷胱甘肽過氧化物酶（GSHPX）試劑盒、組織過氧化物酶（POD）試劑盒，購(gòu)于南京建成生物工程研究所。

1.2 方法

1.2.1 動(dòng)物分組與處理。將60只BALB/c小鼠隨機(jī)分成5組，雌雄各半，分籠飼喂。Ⅰ組為空白對(duì)照組，分別于第1、3、5天腹腔注射1 ml生理鹽水。Ⅱ組為免疫抑制（模型）組，分別于第1、3、5天腹腔注射1 ml環(huán)磷酰胺。Ⅲ、Ⅳ組為藥物組（其中Ⅲ為低劑量藥物組，Ⅳ為高劑量藥物組），分別于第1、3、5天腹腔注射1 ml環(huán)磷酰胺，第1～7天分別以150和300 mg/kg金絲桃苷混懸液灌胃。Ⅴ組為陽(yáng)性對(duì)照組，分別于第1、3、5天腹腔注射1 ml環(huán)磷酰胺，第1～7天以0.2 mg/kg黃芪多糖水溶液灌胃。

1.2.2 檢測(cè)項(xiàng)目及方法。將處理7 d后的供試小鼠眼靜脈采血，分離血清，按照試劑盒使用說明測(cè)定血清中MDA、H2O2、NO水平。

頸椎脫臼處死，用生理鹽水將所取胸腺和脾臟漂洗并用濾紙濾干，計(jì)算脾臟指數(shù)和胸腺指數(shù)，其方法：

胸腺（或脾臟）指數(shù)=胸腺（或脾臟）重量/小鼠體重

將小鼠肝臟組織取出，0 ℃制成勻漿，3 000 r/min離心15 min，收集上清液，按照試劑盒使用說明測(cè)定肝臟組織中小鼠體內(nèi)總抗氧化能力TAOC及其相關(guān)酶TSOD活性，以及與自由基清除有關(guān)的酶MPO、POD、GSHPX及自由基產(chǎn)生相關(guān)酶XOD活性。

2 結(jié)果與分析

2.1 金絲桃苷對(duì)小鼠脾臟指數(shù)和胸腺指數(shù)的影響

小鼠注射環(huán)磷酰胺進(jìn)行免疫抑制以及給予藥物治療后，胸腺指數(shù)和脾臟指數(shù)見表1。

由表1可知，小鼠注射環(huán)磷酰胺后，與空白對(duì)照組相比，免疫抑制模型組胸腺指數(shù)和脾臟指數(shù)顯著降低（P<0.05），說明免疫抑制小鼠造模成功。給予免疫抑制小鼠高低2個(gè)劑量金絲桃苷治療后，小鼠體內(nèi)胸腺指數(shù)較免疫抑制模型組顯著升高，脾臟指數(shù)高劑量組較免疫抑制模型組顯著升高，高劑量組甚至比空白對(duì)照組還高。金絲桃苷對(duì)脾臟指數(shù)的影響存在劑量依賴關(guān)系，高劑量組在提高胸腺指數(shù)和脾臟指數(shù)作用方面與黃芪多糖的作用相當(dāng)。

2.2 金絲桃苷對(duì)免疫抑制小鼠體內(nèi)MDA及H2O2的影響 小鼠注射環(huán)磷酰胺進(jìn)行免疫抑制以及給予藥物治療后，體內(nèi)過氧化物MDA及H2O2水平見表2。

注：a表示與空白對(duì)照組有顯著差異（P<0.05），A表示與空白對(duì)照組有極顯著差異（P<0.01）；b表示與免疫抑制組有顯著差異（P<0.05），B表示與免疫抑制組有極顯著差異（P <0.01）。

由表2可知，小鼠注射環(huán)磷酰胺后，與空白對(duì)照組相比，免疫抑制模型組MDA及H2O2顯著升高（P < 0.05），說明免疫抑制小鼠造模成功。給予免疫抑制小鼠高低2個(gè)劑量金絲桃苷治療后，小鼠體內(nèi)MDA及H2O2較免疫抑制模型組均顯著降低。金絲桃苷對(duì)H2O2的影響存在劑量依賴關(guān)系，高劑量組在降低MDA和H2O2活性作用方面與黃芪多糖的作用相當(dāng)。

2.3 金絲桃苷對(duì)小鼠體內(nèi)總抗氧化能力TAOC及其相關(guān)酶TSOD活性的影響 小鼠注射環(huán)磷酰胺進(jìn)行免疫抑制以及給予藥物治療后，體內(nèi)TSOD和TAOC活性水平見表3。

由表3可知，小鼠注射環(huán)磷酰胺后，與空白對(duì)照組相比，免疫抑制模型組總抗氧化能力TAOC及其酶TSOD活性顯著降低，說明免疫抑制小鼠造模成功。給予免疫抑制小鼠高低2個(gè)劑量金絲桃苷治療后，小鼠體內(nèi)TAOC和TSOD較免疫抑制模型組均顯著升高，高劑量組甚至比空白對(duì)照組還高。金絲桃苷對(duì)TAOC和TSOD的影響存在劑量依賴關(guān)系，高劑量組在提高TSOD活性作用方面與黃芪多糖的作用相當(dāng)。

2.4 金絲桃苷對(duì)小鼠體內(nèi)與自由基清除有關(guān)的酶MPO、POD、GSHPX及自由基產(chǎn)生相關(guān)酶XOD活性的影響 小鼠注射環(huán)磷酰胺進(jìn)行免疫抑制以及給予藥物治療后，體內(nèi)MPO、XOD、GSHPX及POD活性水平見表4。

免疫抑制模型組MPO、GSHPX和POD活性極顯著降低（P

<0.01），而XOD活性極顯著升高（P<0.01），說明免疫抑制小鼠造模成功。給予免疫抑制小鼠高低2個(gè)劑量金絲桃苷治療后，小鼠體內(nèi)XOD活性較免疫抑制模型組均極顯著降低（P<0.01），高低2個(gè)劑量組治療作用相當(dāng)，不存在劑量依賴關(guān)系，且均與黃芪多糖組的治療作用相當(dāng)。相比之下，高低2個(gè)劑量的金絲桃苷治療后小鼠體內(nèi)GSHPX和POD活性顯著升高，且都存在劑量依賴關(guān)系，其治療作用均與黃芪多糖組相當(dāng)。而金絲桃苷對(duì)MPO活性無(wú)顯著影響。

3 結(jié)論與討論

3.1 金絲桃苷對(duì)小鼠脾臟指數(shù)和胸腺指數(shù)的影響

小鼠注射環(huán)磷酰胺后，體內(nèi)脾臟指數(shù)和胸腺指數(shù)顯著降低，給予金絲桃苷治療后，小鼠體內(nèi)脾臟指數(shù)和胸腺指數(shù)顯著升高。脾臟和胸腺均是機(jī)體內(nèi)的免疫器官，脾臟含有大量的淋巴細(xì)胞及巨噬細(xì)胞，是細(xì)胞免疫及體液免疫的中心，胸腺則具有能夠調(diào)節(jié)機(jī)體免疫的功能，是重要的中樞免疫器官。在該研究中，小鼠處于免疫低下（免疫抑制）時(shí)，體內(nèi)脾臟指數(shù)和胸腺指數(shù)顯著降低，給予金絲桃苷治療后，二者均升高，表明金絲桃苷能提高脾臟指數(shù)和胸腺指數(shù)。

3.2 金絲桃苷對(duì)免疫抑制小鼠體內(nèi)MDA及H2O2的影響

小鼠注射環(huán)磷酰胺后，體內(nèi)MDA及H2O2顯著升高，給予金絲桃苷治療后，小鼠體內(nèi)MDA及H2O2顯著降低。MDA和H2O2均是機(jī)體內(nèi)的過氧化物，MDA為脂質(zhì)過氧化物，它能夠引起細(xì)胞損傷，其量的多少能夠間接反映出細(xì)胞受損傷的程度。MDA還可能誘發(fā)癌癥或是自身免疫疾病的基礎(chǔ)[5]。而H2O2對(duì)心肌細(xì)胞具有損傷作用[6]。在該研究中，小鼠處于免疫低下（免疫抑制）時(shí)，體內(nèi)MDA及H2O2顯著升高，給予金絲桃苷治療后，二者活性均降低，表明金絲桃苷能夠通過降低機(jī)體內(nèi)的過氧化物，增加機(jī)體免疫功能。

3.3 金絲桃苷對(duì)小鼠體內(nèi)總抗氧化能力TAOC及其相關(guān)酶TSOD活性的影響

小鼠注射環(huán)磷酰胺后，體內(nèi)TAOC和TSOD活性顯著降低。給予金絲桃苷進(jìn)行治療后，免疫抑制小鼠體內(nèi)TAOC和TSOD活性顯著升高。TAOC表明體內(nèi)總抗氧化能力的強(qiáng)弱。而SOD能夠調(diào)節(jié)機(jī)體內(nèi)活性氧和NO的水平[7]，平衡機(jī)體的氧化與抗氧化作用，是機(jī)體內(nèi)最重要的抗氧化酶。在該研究中，小鼠處于免疫低下（免疫抑制）時(shí)，體內(nèi)TAOC和TSOD活性降低，給予金絲桃苷治療后，二者活性均升高，表明機(jī)體抗氧化能力增強(qiáng)。表明金絲桃苷能通過提高機(jī)體抗氧化能力而增加機(jī)體免疫功能。

3.4 金絲桃苷對(duì)小鼠體內(nèi)與自由基清除有關(guān)的酶MPO、POD、GSHPX及自由基產(chǎn)生相關(guān)酶XOD活性的影響

小鼠注射環(huán)磷酰胺后，體內(nèi)MPO、GSHPX和POD活性顯著降低，XOD活性顯著升高。MPO能消耗過氧化氫，同時(shí)將氯化物離子催化為次氯酸。XOD可以催化次黃嘌呤和黃嘌呤生成尿酸，同時(shí)傳遞電子產(chǎn)生大量活性氧和H2O2[8]。機(jī)體的自由基可損傷機(jī)體細(xì)胞，致使細(xì)胞老化，降低細(xì)胞合成酶活力，導(dǎo)致各種疾病的發(fā)生，而GSHPX能協(xié)同SOD清除體內(nèi)自由基，分解H2O2，阻斷脂質(zhì)過氧化反應(yīng)，保護(hù)細(xì)胞膜結(jié)構(gòu)和功能的完整性。POD能夠催化H2O2反應(yīng)，清除體內(nèi)過多的H2O2，保護(hù)機(jī)體免受損傷。該研究中，經(jīng)金絲桃苷治療后，XOD活性降低，減少了過氧化物的產(chǎn)生。與此同時(shí)，GSHPX和POD活性升高，則有利于機(jī)體內(nèi)過氧化物的清除。

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