血漿miR—155在急性心肌梗死伴高血壓患者中的表達(dá)水平及臨床意義

楊占甲

【摘? 要】本文通過探討血漿microRNA-155（miR-155）在急性心肌梗死伴高血壓中的表達(dá)變化及臨床意義得到以下結(jié)論：血漿miR-155在急性心肌梗死伴高血壓患者血漿中表達(dá)升高且表達(dá)水平與冠狀動(dòng)脈狹窄程度相關(guān)，提示血漿miR-155可能作為生物標(biāo)志物用于臨床診斷及治療評(píng)價(jià)。

【關(guān)鍵詞】急性心肌梗死伴高血壓;血漿微小155;實(shí)時(shí)熒光定量PCR

Abstract：This paper discusses the plasma mirna - 155（miR - 155）in acute myocardial infarction with hypertension expression changes and clinical significance of get the following conclusion：The plasma miR - 155 in patients with acute myocardial infarction with hypertension expression increased in plasma and the expression level and the degree of the coronary artery stenosis，prompt plasma miR - 155 May be used as biomarkers in clinical diagnosis and treatment of evaluation.

Key words：acute myocardial infarction with hypertension Plasma tiny 155 Real-time fluorescent quantitative PCR

miRNA是一類生物進(jìn)化高度保守、長(zhǎng)度為21-26核苷酸的小分子非編碼單鏈RNA，通過對(duì)其靶基因的降解或轉(zhuǎn)錄后抑制調(diào)節(jié)基因表達(dá)，與生物個(gè)體發(fā)育、細(xì)胞分化增殖及腫瘤發(fā)生發(fā)展等生理病理方面具有重要生物學(xué)功能^[1]。

本實(shí)驗(yàn)應(yīng)用熒光定量PCR技術(shù)檢測(cè)急性心肌梗死伴高血壓患者血漿miR-155的表達(dá)水平，同時(shí)通過Gensini評(píng)分系統(tǒng)評(píng)價(jià)冠狀動(dòng)脈狹窄程度，分析急性心肌梗死伴高血壓患者血漿miR-155與狹窄程度關(guān)系，探討血漿miR-155作為急性心肌梗死伴高血壓診斷和預(yù)后生物學(xué)標(biāo)記物的可能性。

1材料與方法

1.1標(biāo)本收集

選取2011年2月至2011年9月鄭州大學(xué)第一附屬醫(yī)院心內(nèi)科急性心肌梗死伴高血壓患者30例為測(cè)定組，其中男性20例，女性10例，平均年齡60±5.87歲，AMI組及健康者為對(duì)照組，其中AMI組男性17例，女性13例，平均年齡59.05±6.94;健康對(duì)照組，男性9例，女性7例，平均年齡58.81±5.63。所以入選病人參照2010年ACC/AHA發(fā)布的心血管診療指南標(biāo)準(zhǔn)診斷。所有患者均簽署知情同意書，并獲得所在醫(yī)院倫理委員會(huì)批準(zhǔn)。

1.2主要試劑及儀器

TRI REAGENTBD購(gòu)自美國(guó)MRC Gene公司;RT反轉(zhuǎn)錄試劑盒購(gòu)自日本TAKARA公司;熒光定量PCR試劑盒購(gòu)自日本TAKARA公司;引物由廣州銳博生物有限公司合成。普通PCR儀采用美國(guó)Bio-Rad公司;NanoDrop2000c紫外分光光度計(jì)采用美國(guó)賽默飛世爾公司;Lightcycler1.5熒光定量PCR儀采用瑞士羅氏公司。

2.方法

2.1 總RNA提取：TRI REAGENTBD試劑從200ul血清中提取總RNA，實(shí)驗(yàn)步驟嚴(yán)格按照實(shí)際說明書進(jìn)行。NanoDrop2000c紫外分光光度計(jì)測(cè)定RNA的濃度和純度。選取A260/A280比值在1.8-2.1之間的樣品用于實(shí)驗(yàn)。

2.2 逆轉(zhuǎn)錄（RT）：按照逆轉(zhuǎn)錄試劑盒說明書配20ul反應(yīng)體系，反應(yīng)條件為42 ℃ 15 min，85 ℃ 5 s，轉(zhuǎn)錄得到cDNA用于qRT-PCR反應(yīng)。

2.3 實(shí)時(shí)熒光定量PCR（real-time quantitative PCR，RT-qPCR）：反應(yīng)體積為合成cDNA作為模板，按照qRT-PCR試劑盒說明書進(jìn)行操作，反應(yīng)條件為95℃30sec，1個(gè)循環(huán);95℃5sec，60℃20sec為40個(gè)循環(huán)。反應(yīng)結(jié)束后計(jì)算機(jī)自動(dòng)得出各毛細(xì)管Ct值。

2.4 相對(duì)表達(dá)量計(jì)算：血漿miR-155的相對(duì)表達(dá)量采用2^-ΔΔCt方法計(jì)算，使用均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差（±s）表示。

2.5 統(tǒng)計(jì)學(xué)分析：SPSS 17.0軟件采用Kruskal-Wallis秩和檢驗(yàn)及AVONA方差分析對(duì)實(shí)驗(yàn)結(jié)果進(jìn)行統(tǒng)計(jì)處理，以P<0.05有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

3.結(jié)果

3.1血漿miR-155在ACS組與對(duì)照組血漿中的表達(dá)：在qRT-PCR結(jié)果中，miR-328，miR155與U6均顯示出可靠的Ct值。結(jié)果如下：

（1）急性心肌梗死伴高血壓組血漿miR-155表達(dá)水平為（16.34±6.26），急性心肌梗死組血漿miR-155表達(dá)水平為（2.61±1.53），健康組血漿miR-155表達(dá)水平為（1.00±0.00）。三組間采用Kruskal-Wallis秩和檢驗(yàn)進(jìn)行分析顯示，血漿miR-155在急性心肌梗死伴高血壓組的表達(dá)高于對(duì)照組（P <0.05）。

3.2 血漿miR-155表達(dá)水平與冠狀動(dòng)脈狹窄程度的關(guān)系

利用Gensini評(píng)分系統(tǒng)對(duì)冠狀動(dòng)脈危險(xiǎn)程度分為三組，A組表達(dá)量為（14.03±1.37），B組表達(dá)量為（16.57±0.73），C組表達(dá)量為（19.20±1.51），血漿miR-155在高積分組的表達(dá)量高于低積分組（P<0.05）。

4 討論

miRNAs是一類長(zhǎng)度介于19-25個(gè)核苷酸的單鏈非編碼RNA，通過特異性與靶基因mRNA的3非編碼區(qū)結(jié)合^[2]，抑制靶基因的翻譯或促進(jìn)靶基因降解，進(jìn)而調(diào)控靶基因的表達(dá)，在細(xì)胞的增殖、分化、凋亡等方面發(fā)揮著重要作用。

急性心肌梗死發(fā)病率日益上升，具有發(fā)病率和死亡率高的特點(diǎn)。高血壓是導(dǎo)致AMI的危險(xiǎn)因素之一，急性心肌梗死患者往往伴隨高血壓。本實(shí)驗(yàn)血漿miR-155在急性心肌梗死伴高血壓患者血漿中表達(dá)升高且表達(dá)水平與冠狀動(dòng)脈狹窄程度相關(guān)，提示血漿miR-155可能作為生物標(biāo)志物用于臨床診斷及治療評(píng)。

miRNA主要通過與靶基因的非編碼區(qū)結(jié)合抑制翻譯來調(diào)控基因的表達(dá)，目前miRNA參與發(fā)病機(jī)制中的具體靶基因仍不清楚，我們將進(jìn)一步的探索miR155在AMI伴隨高血壓病理生理調(diào)控網(wǎng)絡(luò)中的作用機(jī)制。

參考文獻(xiàn)：

[1]He L，Hannon GJ.MicroRNAs：small RNAs with a big role in gene regulation.Nat Rev Genet，2004，5（7）：522-531.

[2]Bartel DP.MicroRNAs：genomics，biogenesis，mechanism，and function.Cell，2004，116（2）：281-297.