三種酸化劑最小殺菌濃度（MBC）的測定

關飛　尤永君　安俊峰

摘 要：酸化劑具有調節動物腸道的pH值，激活消化酶，改善營養物質的消化和吸收，以及增強機體免疫力等作用。本文就三種酸化劑產品對大腸桿菌、金黃色葡萄球菌和黃曲霉菌的最小殺菌濃度進行了試驗觀察，試驗結果表明：三種酸化劑產品在一定濃度內對三種病原微生物都具有殺滅作用，具有替代某些抗生素的潛能。

關鍵詞：酸化劑；細菌；霉菌；最小殺菌濃度

Abstract：Acidifier can regulate animal intestinal pH， activate digestive enzyme， improve digestion and absorption of nutrients and enhance the body immunity. In this paper， the author have observed experimentally the minimum bactericidal concentration of three acidifier products on escherichia coli， staphylococcus aureus and aspergillus flavus. The results showed that： three kinds of acidifier products have killed three kinds of pathogenic microorganisms within a certain concentration range， having some potential alternativ eantibiotics.

Keywords： acidifier； bacteria； mold； minimum bactericidal concentration.

隨著人們對食品安全日益重視，動物性食品的抗生素藥物殘留問題亟待解決，國內外正尋求能夠替代抗生素的飼料添加劑。目前，在畜牧生產中應用酸化劑已得到了迅速的發展，經研究報道平[1-6]酸化劑對調節動物腸道pH值，提高動物機體內消化酶的活性，提高飼料利用率，改善腸道正常菌群，殺滅或抑制有害菌的生長繁殖，促進動物生長等方面有重要作用。

本文就酸化劑的殺菌、抑菌作用做了相關實驗，旨在說明酸化劑對某些有害菌具有殺滅和抑制作用，為酸化劑在生產實際的應用提供一定理論依據。

1 實驗材料

A酸化劑：維樂欣（主要成分：乙酸、甲酸、丙酸、丁酸、檸檬酸、蘋果酸、乳酸及其鹽，批號：津飼預字[2010]009924號）；B酸化劑（主要成分：甲酸、乙酸、甲酸胺）、C酸化劑（主要成分：丙酸、蘋果酸、甲酸、富馬酸）為普通酸化劑，無批號；pH測定儀（TP210精密便攜式pH計，購自北京時代新維測控設備有限公司），大腸桿菌標準株、金黃色葡萄球菌標準（購自廣東環凱微生物科技有限公司）、黃曲霉菌分離株；滅菌瓊脂培養基、普通自來水、滅菌蒸餾水、滅菌肉體培養基、滅菌孟加拉紅培養基。由于在臨床養殖過程中A酸化劑維樂欣建議使用濃度有0.05%、0.1%、0.2%三種，所以在做抑菌試驗的時候將三種酸化劑分別稀釋成0.05%、0.1%、0.2%三個濃度梯度，以便觀察其抑菌效果。

2 實驗方法與步驟

2.1 不同時間不同濃度的pH測定

1）將A，B，C號三種酸化劑產品分別以相應量加入到自來水中分別配制成0.3%、0.2%和0.1%比例濃度。

2）配好后各種比例濃度在室溫下于0 h、6 h、24 h分別測定pH值。

2.2 三種酸化劑對大腸桿菌、金黃色葡萄球菌的最小殺菌濃度（MBC）的測定

1）將三種過濾后的酸化劑用滅菌后的培養基按梯度稀釋配成終濃度為0.05%、0.1%、0.2%的固體培養基，倒好平皿。

2）復蘇大腸桿菌，金黃色葡菌球液，使菌液濃度為105 CFU/mL。

3）分別將1 μL大腸桿菌，金黃色葡菌球菌液加入配制好的不同濃度的培養皿上。每一個樣品同時做一個重復實驗。

4）37 ℃，過夜培養。觀察，拍照并記錄結果。

2.3三種酸化劑對黃曲霉菌的最小殺菌濃度值得測定

1）用滅菌肉湯培養基將三種酸化劑按梯度稀釋配成終濃度為0.05%、0.1%、0.2%的溶液，并分裝入試管，9.5 mL/管。

2）同時用滅菌蒸餾水將三種酸化劑按梯度稀釋配成終濃度為0.05%、0.1%、0.2%的溶液，并分裝入試管，9.5 mL/管。

3）復蘇霉菌，使菌液濃度為107 CFU/mL。

4）分別將500 μL菌液加入配制好的不同濃度的試管中。每一個樣品同時做一個重復實驗。

5）37℃，130 r/min搖菌，培養48 h。

6）從每一個實驗管里取100 μL均勻地涂在孟加拉紅培養基上。每一個樣品做一個重復實驗。

7）37℃，培養48～72 h，每隔24 h觀察菌落生長狀況。

3 實驗結果

3.1不同時間不同濃度酸化劑的pH測定值

本文分別對三種酸化劑產品原液及0.3%、0.2%、0.1%四個濃度在不同時間的pH值進行測定，并分析各種酸化劑在不同濃度不同時間點的pH穩定性，具體數據見下表1：

A酸化劑原液pH 3.23；B酸化劑原液pH 2.99；C酸化劑原液pH 3.35；實驗結果可以看出各種酸化劑在不同濃度不同時間點的pH穩定性較好，說明酸化劑的緩沖體系良好。

3.2三種酸化劑對大腸桿菌、金黃色葡萄球菌的最小殺菌濃度（MBC）的測定

3.2.1 大腸桿菌組

從大腸桿菌抑菌試驗結果（表2）可以得出：三種酸化劑對大腸桿菌均具有抑制殺滅作用，A酸化劑（維樂欣）和B酸化劑對大腸桿菌的MBC值為0.1%，C酸化劑對大腸桿菌的MBC值為0.2%。

3.2.2 金黃色葡萄球菌組

從金黃色葡萄球菌抑菌試驗結果（表3）可以得出：三種酸化劑對葡萄球菌均具有抑制殺滅作用，A酸化劑（維樂欣）和B酸化劑對金黃色葡萄球菌的MBC值為0.1%；C酸化劑對金黃色葡萄球菌的MBC值為0.2%。

3.3 三種酸化劑對黃曲霉菌的最小殺菌濃度（MBC）的測定

3.3.1 用肉湯培養基作為稀釋液

用營養肉湯做稀釋液的實驗中（表4），A、C酸化劑對霉菌的抑菌濃度為0.2%；B酸化劑對霉菌的抑菌濃度>0.2%。

3.3.2 用水為稀釋液

用蒸餾水做稀釋液的實驗中（表5），A酸化劑對霉菌的抑菌濃度為0.1%；B、C酸化劑對霉菌的抑菌濃度為0.2%。

用營養肉湯做稀釋液比用蒸餾水做稀釋液，能給霉菌的生長提供更多的營養，但不論是用營養肉湯或是水為稀釋液時，對霉菌的抑制效果方面A酸化劑優于其它兩種酸化劑。

通過以上實驗和實驗結果表明復合酸化劑對大腸桿菌、金黃色葡萄球菌、黃曲霉菌在一定濃度下是有殺滅和抑制作用的，這也和之前報道[7-9]過的酸化劑具有殺滅有害菌或抑制有害菌生長繁殖的作用是相符的。A酸化劑（維樂欣）抑菌殺菌作用優于其它兩種酸化劑，可能是由于維樂欣中有機酸的配比更加合理，有機酸分子進入細胞內發揮強大的抗菌作用。但酸化劑應用到臨床養殖上到底對養殖水平起多大作用，能產生多大的效益還需進一步地研究確認。

（編輯：狄慧）

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