ERK5在結直腸癌肝轉移組織中的表達及意義

劉婷

【摘要】目的 探討結直腸癌肝轉移患者原發灶ERK5蛋白表達及其臨床意義。 方法 通過免疫組織化學SP方法檢測ERK5蛋白在30例結直腸癌肝轉移原發灶及癌旁正常黏膜組織的表達，分析其表達水平的差異。結果 ERK5蛋白在結直腸癌肝轉移原發灶中的表達高于癌旁正常黏膜的表達，ERK5蛋白在淋巴結轉移中的表達差異有統計學意義（P<0.05），與性別、年齡、分化程度及浸潤深度無明顯差異。結論 ERK5蛋白在結直腸癌肝轉移患者原發灶中高表達，其可能參與結直腸癌肝轉移的發生，對評價結直腸癌肝轉移患者預后具有一定臨床意義。

【關鍵詞】 ERK5蛋白；結直腸癌肝轉移；腫瘤轉移

【中圖分類號】R722.12 【文獻標識碼】B【文章編號】1004-4949（2015）03-0131-01

結直腸癌是消化系統常見的惡性腫瘤，腫瘤復發和轉移是導致患者生存率低的主要原因，肝臟是最常見的轉移器官，在初次確診的結直腸癌患者中有少部分并發肝轉移，因此，如何早期預測結腸癌肝轉移是非常重要的。細胞外信號調節激酶5（ERK5）是最新發現的MAPKs家族中的一個重要的一級激酶，他通過Thr218/Tyr220雙位點的磷酸化激活后進一步激活下游的癌基因，近期研究發現，ERK5通過促進血管的形成和血管內環境的穩定對維持腫瘤的生長起重要作用[1]。我們應用免疫組化技術檢測ERK5蛋白在結直腸癌肝轉移組織中的表達情況，探討其在腫瘤轉移中的作用及其臨床意義。

資料與方法

1.1 研究對象

收集北京市平谷區醫院病理科2009年1月至2012年6月30例結直腸癌肝轉移患者，均經臨床病理明確證實，男性19例，女性11例，年齡35-70歲，中位年齡60歲，術中收集手術切除的結直腸癌肝轉移原發灶癌旁正常黏膜，距離原發灶邊緣10厘米處，所有患者術前均未作化療或放療等抗腫瘤治療。

1.2 免疫組化檢測： ERK5兔抗人多克隆抗體（sc-5626，Santa Cruz），其余免疫組化試劑盒均購自福建邁新生物技術公司。采用免疫組織化學SP法，操作步驟嚴格要求說明書進行。用已知陽性片作陽性對照，以PBS代替一抗作陰性對照。ERK5蛋白染色陽性表達為細胞漿染色，主要表現為胞漿內非均勻棕黃色顆粒。由2個獨立和有經驗的病理科醫生判讀。結果判讀采用半定量積分分級，積分=染色強度×染色細胞比例。染色強度：0分為陰性（無色），1分為淺灰色，2分為淡黃色，3分為黃色，4分為棕黃色；染色細胞比例：0分為無陽性細胞，1分為1%-25%，2分為26—50%，3分為51-75%，4分為76-100%。兩者相乘為總的分數，0-11分納入低表達組，12-16分被納入到高表達組。

1.3 統計學方法

采用SPSS19.0統計分析軟件進行數據處理，比較采用X2檢驗，以P<0.05為差異有統計學意義。

2 結果

2.1 結直腸癌肝轉移原發灶與正常黏膜組織ERK5水平比較

對30例結直腸癌肝轉移患者術后，利用免疫組化檢測ERK5在原發灶和癌旁正常黏膜組織中的含量，并比較顯示：ERK5蛋白在結直腸癌肝轉移組原發灶中的高表達率為73.3%（22/30），ERK5蛋白在癌旁正常黏膜中的高表達率為33.33%（10/30），ERK5在結直腸癌肝轉移原發灶中的高表達率明顯高于癌旁正常黏膜組織，差異具有統計學意義（P<0.05）；

2.2 伴有肝轉移的結直腸癌原發灶組織中ERK5蛋白的表達與臨床病理特征的關系：結直腸癌肝轉移原發灶中ERK5蛋白在淋巴結轉移中的高表達率為80.00%，在無淋巴結轉移組中ERK5蛋白的高表達率為30.00%，ERK5蛋白在有淋巴結轉移組中比無淋巴結轉移組中的陽性表達率升高，差異有統計學意義（P<0.05）。而原發灶中ERK5蛋白表達在性別、年齡、分化程度及浸潤深度無明顯差異（P>0.05）。

討論

結直腸癌是較常見的惡性消化道腫瘤，發病率呈逐年增高的趨勢，對人們造成的危害日趨嚴重，尤其是結直腸癌肝轉移，嚴重影響患者生存。判斷結直腸癌肝轉移風險的因素較多，目前仍未有較高靈敏性及特異性的指標。

ERK5蛋白被報道在多個腫瘤的轉移過程中有重要作用，其通過調控粘著斑激酶信號促進整合素介導的細胞粘附和增強癌細胞活力；同時，ERK5的激活可以促進Src蛋白相關的浸潤粘附因子形成進而限制Rho蛋白的活性。以往研究表明與良性前列腺組織相比， ERK5上游激酶MEK5在前列腺癌細胞中表達增加，前列腺癌細胞的骨轉移與MEK5的過高表達有關，MEK5的轉染實驗也證實它確實可以誘導前列腺癌細胞增殖、增強癌細胞活性并促進癌細胞轉移。Ramsay[2]等的最新實驗證實，ERK5介導的信號對前列腺原位轉移癌模型有顯著地促進形成作用，且在轉移性前列腺癌細胞核中ERK5的表達較良性前列腺增生、原發性前列腺癌顯著增高。Castro等[3]的研究提出，在乳腺腫瘤中，乳腺腫瘤激酶可在ERK5介導下被激活發生遷移，促進乳腺癌細胞的轉移。Zen等[4]研究提示，ERK5過度表達后可通過調節細胞的有絲分裂促進肝癌細胞的生長，有報道ERK5的表達與口腔鱗狀細胞癌的淋巴結轉移有關。這些研究都表明ERK5信號通路在腫瘤侵襲和轉移過程中起傳遞和放大信號的作用。

本研究發現，ERK5在結直腸癌肝轉移原發灶中的的高表達率為73.3%，ERK5蛋白在癌旁正常黏膜中的高表達率為33.33%，在原發灶中的表達較正常結直腸黏膜組織明顯升高，差異具有統計學意義。ERK5蛋白在結直腸癌肝轉移原發灶中的表達與淋巴結轉移有關，在有淋巴結轉移的結直腸癌中，ERK5蛋白的表達量增加。一些研究結果[5]也已經證實了ERK5的過表達的惡性腫瘤具有更強的侵襲轉移能力。其可能的原因是在外界因素的持續刺激下，ERK5在結直腸癌組織中的含量持續增加，這些ERK5可以通過與其下游底物如c-fos、AP-1、c-myc的結合介導細胞的異常增殖從而導致癌癥的發展。與此同時，ERK5可以與一些因子如血管內皮生長因子（VEGF）、表皮生長因子（EGF）、粘附素等結合而使癌癥細胞更具有侵襲力，而VEGF作為唯一受c-fos調控的促血管生成因子促進營養癌癥細胞的血管異常增殖而使結直腸癌細胞更具有侵襲力。

綜上所述，ERK5蛋白在結直腸癌肝轉移患者的原發灶組織中高表達，其可能參與結直腸癌肝轉移的發生，對評鑒結直腸癌肝轉移患者預后具有一定臨床意義。但對ERK5蛋白在結直腸癌進展過程中的分子機制尚不十分清楚，還需要進一步深入研究。

參考文獻

[1] Hayashi M，Kim SW，Imanaka-Yoshida K， et al. Targeted deletion of BMK1/ERK5 in adult mice perturbs vascular integrity and leads to endothelial failure [J].J Clin Invest ，2004，113（8）：1138-1148.

[2] Ramsay AK， McCracken SR， Soofi M， et al. ERK5 signalling in prostate cancer promotes an invasive phenotype [J ]. Br Cancer， 2011， 104（4） ： 664-672.

[3] Castro NE， Lange CA. Breast tumor kinase and extracellular signalregulated kinase 5 mediate Met receptor signaling to cell migration in breast cancer cells [J]. Breast CancerRes， 2010，12（4）： R60.

[4] Zen K，Yasui K，Nakajima T，et al . MEK5 overexpression is associated with metastatic prostate cancer， and stimulates proliferation， MMP-9 expression and invasion，Oncogene（2003）22，1381-1389.

[5] Testa U，Pannitteri G，Condorelli.Vascular endothelial growth factors in cardiovascular medicine[J]. J Cardiovasc Med，2008，9（12）：1190-1221.

表1 結直腸癌肝轉移患者原發灶與正常黏膜組織ERK5表達量比較

組織類型 例數 ERK5 表達 低表達 高表達癌旁正常黏膜 30 20 10原發灶 30 822表2 ERK5蛋白在結直腸癌肝轉移患者原發灶中的表達及臨床指標

臨床指數 例數 原發灶中ERK5的表達 X2值 P值 低表達 高表達 性別男 19 6 13 0.354 >0.05女 11 5 6 年齡≤55 16 10 6 0.374 >0.05>55 14 7 7 分化程度高分化 8 6 2 中分化 15 10 5 0.142 >0.05

低分化 7 2 5 浸潤深度漿膜內 18 10 8 0.590 >0.05漿膜外 12 7 5 淋巴結轉移（-） 20 14 6 0.013 <0.05（+） 10 2 ERK5在結直腸癌肝轉移原發灶有淋巴結轉移中的表達（SP ×200）

ERK5在結直腸癌肝轉移原發灶無淋巴結轉移中的表達（SP×200）