川芎嗪對高糖致大鼠腹膜間皮細胞Bim表達的影響

田婷　甘平

【摘要】 目的 觀察川芎嗪對高糖致大鼠腹膜間皮細胞Bim表達的影響。方法 將36只健康雄性SD大鼠按隨機數字表達分成3組：對照組（n=12）：腹腔每天注射生理鹽水25ml；模型組（n=12，HGC組）：腹腔每天注射4.25%葡萄糖腹透液25ml，實驗第8、10、12、22、24、26天注射加有脂多糖6mg/L的4.25%葡萄糖腹透液；治療組（n=12，HGM組）：腹腔每天注射4.25%葡萄糖腹透液25ml+2%鹽酸川芎嗪溶液（40mg/L），實驗第8、10、12、22、24、26天注射加有脂多糖6mg/L的4.25%葡萄糖腹膜液。8周后分別處死各組大鼠，取腹膜組織及SABC免疫組化學法檢測腹膜間皮細胞內Bim的表達。結果 與對照組比較，HGC組和HGM組腹膜間皮細胞Bim表達上調（P〈0.05），且HGC組顯著高于HGM組（P〈0.05）。結論 川芎嗪能夠促進高糖致大鼠腹膜間皮細胞Bim表達下調，可能存在減輕腹膜纖維化的機制。

【關鍵詞】川芎嗪；脂多糖；腹膜間皮細胞；Bim

【中圖分類號】R446.61 【文獻標識碼】B【文章編號】1004-4949（2015）02-0123-01

前言：持續性不臥床腹膜透析（continuous ambulatory peritoneal dialysis，CAPD）是終末期腎病患者腎臟替代治療的手段之一，而腹膜纖維化所致超濾下降是影響患者長期有效透析的重要因素[1] ，目前研究表明腹膜透析時腹膜炎癥的反復發生和腹膜透析液的生物不相容性是導致腹膜纖維化的主要因素，其病理改變主要表現為腹膜壁層單核巨噬細胞侵潤和腹膜外基質的沉積[2] 。Bim是Bcl-2家族的促凋亡因子，是誘導細胞凋亡的，多項研究證明它可以誘導多種細胞的凋亡。川芎嗪是中藥川芎中提取的有效成分，研究證實低劑量川芎嗪有提高腹膜透析凈超量，細胞保護及抗炎作用[3] 。本文觀察川芎嗪對高糖致大鼠腹膜間皮細胞Bim表達的影響，討論其CAPD時腹膜慢性炎癥發病機制中的可能機制。

材料與方法

1.1 試劑和藥物

4.25%葡萄糖腹膜透析液（百特醫療公司出品），注射用鹽酸川芎嗪（上海源葉生物技術有限公司）。兔抗鼠 Bim抗體，即用型SABC 免疫組化染色試劑盒， 5% BSA 封閉液，DAB 顯色試劑盒，紅細胞裂解液。

1.2 動物分組和實驗方法

36只健康雄性SD大鼠按隨機數字表達分成3組：對照組（n=12）：腹腔每天注射生理鹽水25ml；模型組（n=12，HGC組）：腹腔每天注射4.25%葡萄糖腹透液25ml，實驗第8、10、12、22、24、26天注射加含脂多糖6mg/L的4.25%葡萄糖腹膜透液；治療組（n=12，HGM組）：腹腔每天注射4.25%葡萄糖腹透液25ml+2%鹽酸川芎嗪溶液（40mg/L），實驗第8、10、12、22、24、26天注射加含脂多糖6mg/L的4.25%葡萄糖腹透液。

1.3 標本取材

8周后分別處死各組大鼠，取腹膜組織及SABC免疫組化學法檢測腹膜間皮細胞內Bim的表達，并行腹膜組織HE及Masson染色病理學檢查。取石蠟包埋的壁腹膜組織，作5μm 切片，常規方法 HE 染色， 光鏡下觀察病理改變。

1.4 統計學方法

采取SPSS 19.0軟件數據包對于收集的數據進行統計學分析和比較，計量性資料采取均數加減標準差的形式表示，組間比較采取t檢驗，計數性資料采取X2檢驗。當P<0.05時，可以認為差異具有統計學意義。

2.結果

與對照組比較，HGC組和HGM組腹膜間皮細胞Bim表達上調（P〈0.05），且HGC組顯著高于HGM組（P〈0.05）。HE染色后光鏡下HGC組和HGM組可見腹膜間皮細胞由扁平變成圓形、柱形，間皮細胞肥大脫落，間皮下結締組織明顯增厚，可見血管生成及纖維素物質沉積，還可見纖維細胞及單核巨噬細胞侵潤，HGC組表現尤為明顯。

3.討論

臨床治療終末期腎衰竭的主要替代治療之一是采取CAPD，因此腹膜功能和機構的穩定性是CAPD治療的物質基礎。在CAPD諸多的并發癥中，腹膜纖維化是其中最為常見的一種，該并發癥的形成和發展直接導致了腹膜的結構和功能性的變化，從而導致了透析治療的失敗，超濾失敗是大部分終末期腎衰竭患者退出治療的主要原因。在臨床的治療上，由于治療技術的不斷提高，由感染引起的急性腹膜炎病例數明顯下降，而慢性腹膜炎持續存在。傳統的腹透液主要選擇葡萄糖作為滲透性物質，在加熱過程中形成的葡萄糖降解產物對腹膜間皮細胞具有明顯的細胞毒性作用，并對損傷后的細胞復修存在一定的抑制作用，造成了間皮細胞的死亡和剝落，死亡細胞的空隙則由膠原蛋白結締組織進行補充，最后形成了纖維化腹膜。因此可以認為腹膜的纖維化是導致透析治療效果下降的主要元兇。

川芎嗪是中藥川芎中提取的有效成分，研究證實低劑量川芎嗪有提高腹膜透析凈超量，細胞保護及抗炎作用。有研究表明，川芎嗪對于透析液所造成的慢性腹膜炎癥反應和纖維化反應具有較好的抑制作用，其主要機理是川芎嗪能夠抑制由于透析液所誘發的P65、NF-KB、PMC等炎癥因子的高表達。從而起到抗炎的作用，但是過往的研究對于機理沒有進一步的闡述。Bim是Bcl-2家族的促凋亡因子，是誘導細胞凋亡的，多項研究證明它可以誘導多種細胞的凋亡。本文的研究表明，川芎嗪對于Bim的表達具有下調作用。Bim的下調對于腹膜間皮細胞的凋亡具有一定的拮抗作用，在Bim的調解下，腹膜間皮細胞受損進入程序性凋亡，并啟動正常的修復機制，能夠有效抑制由于細胞壞死所釋放出來的大量炎癥因子，從有可能抑制腹膜炎癥的發生和蔓延，減少了腹膜變性和纖維化的幾率。提升了對腹膜的保護作用，至于川芎嗪和Bim下調的具體機制和作用機理，還需要進一步采取研究證實。綜上所述，川芎嗪能夠促進高糖和脂多糖致大鼠腹膜間皮細胞Bim表達下調，有減輕腹膜慢性炎癥。

參考文獻

[1] 伍軍，陽曉等.腹膜透析與血液透析：哪種透析治療方式具有更好的生存率？[J].中華腎臟病雜志，2008，24（12）

[2]陽 曉，葉任高等.川芎嗪對大鼠腹膜超濾功能影響的實驗研究.中國中西醫結合雜志2000；20（9）

[3]劉杰，闞丹，劉立思. IKK/IκB/NF-κB信號通路阻斷及臨床應用[J]. 實用醫學雜志. 2008（23）