ELISA法和膠體金免疫層析法檢測乙肝表面抗原結(jié)果分析

李小云

【摘要】目的：分別采用酶聯(lián)免疫吸附試驗（ELISA）法和膠體金免疫層析（GICA）法檢測乙型肝炎病毒表面抗原（HBsAg），對比結(jié)果，探討兩種方法檢測乙肝表面抗原的應(yīng)用價值。方法：分別采用酶聯(lián)免疫吸附試驗（ELISA）法和膠體金免疫層析（GICA）法檢測768份18～65歲人群血清標(biāo)本，對比乙型肝炎病毒表面抗原（HBsAg）檢測結(jié)果。結(jié)果：膠體金免疫層析法檢測出HBsAg陽性標(biāo)本42份，陽性率5.47%。ELISA法檢測出HBsAg陽性標(biāo)本46份，陽性率為5.98%，兩種方法陽性檢出率差異無統(tǒng)計學(xué)意義（P>0.05）。兩種方法檢測的符合率為97.39%。膠體金免疫層析法的靈敏度為69.57%，特異度為98.61%。結(jié)論：膠體金免疫層析法操作簡便、快速，檢測的特異度較高，但其靈敏度有限，有待提高。

【關(guān)鍵詞】酶聯(lián)免疫吸附試驗法；膠體金免疫層析法；乙肝表面抗原

【中圖分類號】R722.12 【文獻標(biāo)識碼】B【文章編號】1004-4949（2015）03-0225-01

乙型病毒性肝炎，簡稱乙肝，是一種由乙型肝炎病毒（HBV）感染機體后所引起的疾病，是當(dāng)前嚴(yán)重危害人類身體健康的傳染病。乙型病毒肝炎表面抗原（HBsAg）陽性是感染乙肝病毒的重要指標(biāo)。酶聯(lián)免疫吸附試驗（ELISA）法是目前我國檢測乙肝HBsAg最為普及的方法，應(yīng)用時間較早，而膠體金免疫層析法是近年來采用的免疫學(xué)檢測方法。本組研究資料采用酶聯(lián)免疫吸附試驗（ELISA）法和膠體金免疫層析（GICA）法對768份18～65歲人群血清進行HBsAg檢測，并對比檢測結(jié)果。現(xiàn)報告如下：

1材料與方法

1.1標(biāo)本來源

抽取18～65歲人群血清768份，采集無溶血、無脂濁的靜脈血標(biāo)本3～5ml，室溫靜置30min后，4000r∕min離心5min，充分分離血清待檢。

1.2儀器與試劑

乙肝五項膠體金快速檢測板由上海科華生物科技有限公司提供，HBsAg試紙條由藍十字生物藥業(yè)有限公司提供；ELISA檢測試劑由珠海麗珠生物科技有限公司公司提供；TDL-42A低速離心機；Unto-FLiudo全自動酶標(biāo)洗板機；Unto-2010酶標(biāo)儀。

1.3方法

1.3.1膠體金免疫層析法 將GICA試紙條浸入待測標(biāo)本，標(biāo)本不可浸沒標(biāo)志線，浸入時間約為10分鐘，根據(jù)對照線位置出現(xiàn)的紅線條數(shù)判定結(jié)果。如對照線與檢測線間位置出現(xiàn)1條紅線為陰性，對照線與檢測線間位置出現(xiàn)2條紅線為陽性。

1.3.2酶聯(lián)免疫吸附試驗（ELISA）法 于相應(yīng)孔中用加樣器分別加入質(zhì)控品、待檢標(biāo)本及陽性、陰性對照血清，并做好標(biāo)記，然后往每個孔中加入酶標(biāo)抗體，混勻，置于37°C條件下1h，嚴(yán)格按照說明書經(jīng)洗版、添加底物，并在37°C條件下避光15min，加終止液停止反應(yīng)。使用酶標(biāo)儀檢測OD值，并計算S∕CO值。若S∕CO≥1.0則表示實驗結(jié)果為陽性，若S∕CO<1.0則表示實驗結(jié)果為陰性。

1.4統(tǒng)計學(xué)方法

采用SPSS 17.0統(tǒng)計軟件分析，計數(shù)資料采用百分率表示，行χ2 檢驗，P<0.05為差異有統(tǒng)計學(xué)意義。

2結(jié)果

兩組方法檢測HBsAg的陽性率比較：共檢測768份血清標(biāo)本， 兩種方法檢測HBsAg均陰性的712份，均陽性的32份，兩種方法檢測的符合率為97.39%。膠體金免疫層析法檢測出HBsAg陽性標(biāo)本42份，HBsAg陽性率5.47%（42∕768）。ELISA 法檢測出HBsAg陽性標(biāo)本46份，HBsAg陽性率為5.98%（46∕768），兩種方法陽性檢出率差異無統(tǒng)計學(xué)意義（P>0.05）。根據(jù)特異度、靈敏度計算公式，靈敏度= A / （ A + C ）×100%；特異度= D/ （ B + D）×100%。A-真陽性數(shù)，B-假陽性數(shù)，C-假陰性數(shù)，D-真陰性數(shù)。得出：膠體金免疫層析法的靈敏度為69.57%，特異度為98.61%。

ELISA法和膠體金免疫層析法檢測結(jié)果

膠體金免疫層析法 ELISA法 合計 陽性+ 陰性﹣ 陽性+ 32 10 42陰性﹣ 14 712 726合計 46 722 7683討論

乙肝病毒性肝炎是嚴(yán)重危害人體健康的一種病毒性肝炎，由乙型肝炎病毒（HBV）感染引起，血液、性接觸、日常生活接觸和母-嬰垂直傳播是HBV傳播的主要方式。1965年Biumberg等首次發(fā)現(xiàn)乙型肝炎病毒（HBV）的表面抗原（HBsAg），其現(xiàn)已成為HBV感染的重要標(biāo)志，可作為乙肝病毒性肝炎的重要診斷依據(jù)。目前實驗室檢測乙肝HBsAg的方法有很多，如化學(xué)發(fā)光微粒子免疫分析法（CMIA）、熒光定量聚合酶鏈反應(yīng)法（FQ-PCR）、酶聯(lián)免疫吸附試驗（ELISA）、膠體金免疫層析（GICA）法等。酶聯(lián)免疫吸附試驗（ELISA）法是目前我國檢測乙肝HBsAg最為普及的方法，其主要是在液相中經(jīng)擴散作用，逐漸與固相表面的抗體結(jié)合，同時標(biāo)記抗體也需要此過程形成抗體-抗原-標(biāo)記抗體復(fù)合物，此外還需要洗滌過程和顯色反應(yīng)[1]。其靈敏性和特異性較高，結(jié)果可靠，但其操作程序較繁瑣復(fù)雜，檢測所需要的時間較長。膠體金免疫層析法是近年來出現(xiàn)的一種免疫學(xué)標(biāo)記物檢測新技術(shù)，這種檢測技術(shù)不需要儀器，高濃度的抗體集中固定在纖維素的微孔中，待測抗原流經(jīng)微孔與固定的抗原接觸很快完成反應(yīng)，檢測所需要的時間較短，操作簡單便捷，有較高的特異度，尤其適用于基層醫(yī)療衛(wèi)生單位。但由于反應(yīng)時間短，會造成弱陽性的漏檢。本組研究資料分別采用酶聯(lián)免疫吸附試驗法和膠體金免疫層析法檢測乙肝表面抗原，兩種方法檢測出的HBsAg陽性率分別為5.98%、5.47%，差異無統(tǒng)計學(xué)意義（P>0.05）。膠體金免疫層析法的靈敏度和特異度分別為69.57%、98.61%。綜上所述，膠體金免疫層析法檢測乙肝表面抗原操作簡便快捷，檢測的特異度高，但其靈敏度還有待提高。

參考文獻

[1]高麗，付鴻，李慧，等.膠體金試紙法與酶聯(lián)免疫吸附試驗檢測乙型肝炎病毒表面抗原的比較[J].中國計劃免疫.2007，13（1）：51-53