乙肝病毒血清學檢測方法進展與比較

羅婉霞 楊光

【中圖分類號】R93.1 【文獻標識碼】B【文章編號】1004-4949（2015）03-0658-01

乙型病毒性肝炎是由乙型肝炎病毒（HBV）感染所導致的一種在全球廣泛流行的傳染病，全世界HBsAg攜帶者有3.5億人。據世界衛生組織報道，全球每年約有100萬人死于HBV感染所致的肝衰竭、肝硬化和原發性肝細胞癌。我國屬HBV感染高流行區，流行病學調查，一般人群的HBsAg陽性率為7.18%[1]，因此乙型肝炎病毒的檢出對于乙肝的各項防治工作至關重要。

目前臨床用于乙型肝炎病毒血清免疫學標志物檢測的方法、試劑很多，各具特點，如用于定性的膠體金方法（GICA）和酶聯免疫吸附測定法（ELISA）；用于定量的則有化學發光法（CLIA）、時間分辨熒光免疫分析法（TRFIA）等。本文就乙肝病毒血清學檢測方法介紹及對比綜述如下：

一乙肝病毒血清血檢測方法研究進展

1、GICA

GICA，全稱是膠體金免疫層析法（gold immuno chromatographic Assay），其優點是快速、不需儀器設備、單份測試成本低，但由于其只能進行定性檢測且靈敏度較低，比較適合急診和基層醫療機構作檢測診斷。

2、ELISA

ELISA，全稱是酶聯免疫吸附測定法（enzyme linked immunosor-bent assay），主要優點是經濟，成批檢測時間短，檢測率高、不需要特殊儀器而且操作簡單試劑容易保存，在我國被廣大基層醫院普遍應用。但由于它只能進行定性測定或半定量測定，且特異性不強、線性范圍小、易產生鉤狀現象，故ELISA在對敏感性要求極高的血站及手術室等不適用。

3、TRFIA

TRFIA，全稱是時間分辨熒光免疫分析法（time resolved fluoroim-munoassay），它是近年來發展起來的一種無污染、高靈敏度的免疫標記技術，以三價稀土離子作為示蹤物，應用時間延遲技術消除標本中的非特異性熒光以提高靈敏度，再加上其特有的熒光解離增強技術使有效熒光增強，使其適用于生物學及醫學的超微量分析度。但由于其檢測時間較長，標本消耗量大，只適用于成批檢測，不適于單份樣本操作[3]。

4、CLIA

CLIA，全稱是化學發光法（chemiluminescence immunoassay），它主要是使用固相性載體為順磁性微粒，該種微粒直徑為2.8μm，因微粒體積小，和相同體積的塑料珠相比其表面積增大，所以擴大了反應面積。同時因標志物循環利用，增強了發光的強度和時間，提高了檢測的靈敏度。其優點是檢測時間短，靈敏度與特異性高，逐漸在我國大、中型綜合性醫院中開展。CLIA因需配套的儀器設備與試劑，其檢測成本高，難以在基層醫院開展。

二乙肝病毒血清學檢測方法比較

1、精密度和靈敏度

GICA 檢測線的顯色速度及強度與HBsAg的含量成正比。強陽性樣品5分鐘內即可顯色。弱陽性樣品10分鐘內也可顯色，靜置30分鐘可保證達到最高靈敏度。在國外較好的金標試紙在檢測HBsAg靈敏度可接近ELISA。

ELISA半定量的精密度為批內變異≤8.23%，最大日間變異≤16.69%；其靈敏度在檢測HBsAg時為：0.5ng/ml。

TRFIA在檢測乙肝兩對半時靈敏度如下：HBsAg ：0.2ng/ml；HBsAb：40mIU/ml；HBeAg ：0.5 NCU /ml；HBeAb：4 NCU /ml ；HBcAb：0.2 NCU /ml。TRFIA批內變異系數均小于10%。

CLIA最后測定的是光子的量，其敏感度在檢測乙肝兩對半時如下： HBsAg ：0.05ng/ml；HBsAb：0.5 mIU/ml；HBeAg ：0.3 NCU /ml；HBeAb：1.3NCU/ml ；HBcAb：0.06 NCU /ml。國內有文獻報道采用化學發光法檢測乙肝病毒學5種血清血標志物最小批內精密度為2.90%，最小批間精密度為6.04%[8]。

2、線性范圍

CGIV 只能進行定性檢測，不能測出線性范圍；ELISA半定量檢測方法線性范圍比較窄，其檢測HBsAg的線性范圍是0.5～4.0ng/ml； TRFIA的線性范圍在檢測HBsAg時為0.2-300ng/ml。CLIA的線性范圍為最寬，在檢測HBsAg時為0.05-1000ng/ml，可以較為準確地反映HBsAg在血清中的含量。

三各種檢測單位的解讀

乙肝病毒血清學檢測方法中TRFIA 、CLIA可用于定量檢測，但因檢測采用的單位不同，給臨床醫生和患者正確解讀檢驗報告并將檢驗報告結果用于診療帶來困難。常用的單位包括ng/ml、mIU/ml、NCU/ml、PEIU/ml、S/CO值等。

ng/ml表示每毫升中含有的納克數，常在檢測HBsAg的濃度時使用。因HBsAg為抗原，在HBsAg定量檢測時只有國際單位IU/ml和ng/ml等單位可以與其轉換，其轉換關系是1IU=0.5ng。

mIU/ml表示每毫升中含有的毫單位數，常在檢測HBsAb的濃度時使用。

NCU/ml 英文全稱是national clinical unit，是國家衛生部臨檢中心單位（Nation health laboratory center units），定義是使用國際上公認的一流公司的試劑盒檢出原血清中某物質的最低含量稱為1NCU/ml。常在檢測HBeAg和HBeAb等濃度時使用。它與質量濃度單位ng/ml并沒有直接的換算關系，也不能與國際單位IU/ml換算。

PEIU/ml是基于Paul-Ehrlich-Institute標準（聯邦血清與疫苗管理局標準），是德國制定的一個國家標準，常在檢測HBeAg和HBeAb等濃度時使用。

S/CO值中的S表示樣本（sample），CO表示臨界值（cut off）。臨界值CO一般定在陰性對照物的2.1倍，即CO = N×2.1，如果陰性光密度值為0.05，CO = 0.05×2.1=0.105。S/CO≥1判為陽性，S/CO<1判為陰性。在定量檢測中S/CO值的大小表示超出臨界值的倍數，例如S/CO值為356，即陽性值大于臨界值356倍。

NCU/ml、PEIU/ml、mIU/ml均為相對定量單位，且它們之間因受檢測試劑的影響，所以它們之間不存在換算關系。

綜上所述，我們發現不同的乙肝病毒檢測方法各有其優缺點，如傳統的ELISA在檢測乙肝血清病毒時存在靈敏度欠佳，線性范圍窄、對低濃度乙肝血清病毒檢測存在漏診情況，所以如何針對病人情況選擇最好的乙肝血清病毒檢測方法至關重要；其次不同乙肝病毒檢測方法間的單位無明確換算關系，有時對于低濃度乙肝血清病毒病人仍需多種檢測方法同時進行以綜合判斷病人病情 。

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