HPLC法測定復方丹參滴丸中丹參素的含量

張 琴

（湖南省中醫藥大學附一醫院藥劑科，湖南 長沙 410000）

HPLC法測定復方丹參滴丸中丹參素的含量

張 琴

（湖南省中醫藥大學附一醫院藥劑科，湖南 長沙 410000）

目的 建立高效液相色譜法（HPLC）快速測定復方丹參滴丸中丹參素的含量。方法色譜柱為Hypersil C18（4.6 mm×250 mm，5μm）；流動相為甲醇-水-冰醋酸（20∶80∶0.5），柱溫為室溫；流速為0.9 mL/min；檢測波長為281 nm。結果丹參素對照品在0.01～0.10 mg/mL范圍內呈良好線性關系，r<0.9997， 含量丹參素平均回收率為99.6%，RSD為0.89%。所測復方丹參滴丸中丹參素的平均含量為8.034 mg/g，符合2010年版藥典對其含量的要求。結論HPLC法測定復方丹參滴丸中丹參素的含量方法操作流程簡單、快速、準確，可用于該制劑的質量控制中大力推廣使用。

HPLC法；復方丹參滴丸；丹參素；含量

復方丹參滴丸是由丹參、三七及冰片等藥味組成的復方制劑，具有活血化瘀、理氣止痛的功效［1］。現質量標準收載在《中國藥典》2005年版一部檢測的內容中。復方丹參滴丸存在質量控制方法簡單，產品質量不易控制的缺點，從而將影響產品的生產和保證質量［2］。本研究建立高效液相色譜法（HPLC）快速測定復方丹參滴丸中丹參素的含量，結果準確性高，現將操作步驟總結如下。

1　材　料

1.1儀器：Shimadzu 2010高效液相色譜系統（日本島津公司），Agilent HPll00 LC-DAD色譜系統（安捷倫科技公司），Thermo Finnigan Surveyor LC-TSQ Quanturn Ulna AM液相色譜串聯質譜系統（美國菲尼根質譜公司）。連續式移液器（美國熱電儀器有限公司）。102-3遠紅外快速干燥箱（北京興爭儀器設備廠）。

1.2試劑：丹參素鈉對照品（中國藥品生物制品檢定所提供，批號：100018-200908）。復方丹參滴丸（天津天士力制藥股份有限公司提供，批號為100904、101002、100919）。三重蒸餾水自制。甲醇、乙腈為美國進口色譜純，水為純凈水，其他試劑均為分析純。

2　方　法

2.1色譜條件：STI2000高效液相色譜儀，Vertex C18色譜柱為Hypersil C18（4.6 mm×250 mm，5 μm），UV501紫外檢測器。流流動相為甲醇-水-冰醋酸（20∶80∶0.5），柱溫為室溫；流速為0.9 mL/min，20 μL定量管進樣，檢測波長為281 nm。理論塔板數按照丹參素色譜峰計＞5000。

2.2溶液的制備

2.1丹參素鈉對照品溶液的配制：精密稱取10.0 mg丹參素對照品于10 mL容量瓶中，加甲醇稀釋到刻度，搖勻，過濾。取續濾液用0.45 μm微孔濾膜過濾，作為對照品溶液備用。

2.2樣品溶液的制備：精密稱取復方丹參滴丸12粒，研成細粉后精確稱量，置25 mL量瓶中。加入甲醇約20 mL，超聲處理30 min使溶解，放冷至室溫，加甲醇至刻度搖勻即得樣品溶液，離心5 min，進樣前用

0.45μm濾膜濾過，即得復方丹參滴丸的供溶液試品溶液。

3　方法考察

3.1可行性考察：按處方比例及工藝自制不含丹參的空白樣品。吸取復方丹參滴丸及其空白樣品適量。按樣品測定項下方法分別進行測定，結果見圖1（A、B），由圖1（B）看出其他藥材和輔料不干擾丹參素測定。同時吸取丹參素對照品溶液適量進行測定，結果見圖1（C）。

3.2線性關系考察：精密吸取丹參素鈉照品溶液0.5、1.0、2.0、3.0、5.0 mL于5個10 mL容量瓶中，加甲醇定容，搖勻后即得對照品溶液，用0.45 μm微孔濾膜過濾，分別精密吸取20 μL進樣，按上述色譜條件分別測定其峰面積，以色譜峰面積為縱坐標，以溶液中丹參素的濃度為橫坐標，按上述條件測定峰面積。結果丹參素對照品在0.01～0.10 mg/mL范圍內呈良好線性關系，回歸方程為Y<0.711C-1.861，r<0.9997（n<5）。見表1。

表1　丹參素的對照品標準曲線

表2　復方丹參滴丸成分含量測定

圖1　復方丹參滴丸 HPLC 圖譜（A供試品；B空白樣品；C丹參素）

3.3精密度試驗：精密取用對照品溶液4.0 mL于10.00 mL容量瓶中，精密加入內標溶液1.0 mL，用1%醋酸溶液稀釋到刻度。重復進樣5次，每次20 μL，分別測定峰面積，RSD丹參素為0.59%。試驗結果表明精密度良好。

3.4重現性試驗：精密稱取丹參滴丸樣品5份，按本文方法處理和測定，每份進樣3次，每次進樣20 μL，以外標法分別測定峰面積。5份復方丹參滴丸中丹參素的平均含量為7.9776 mg/g，RSD為1.24%。

3.5穩定性試驗：取樣品溶液，分別于1、2、6、10、24、72 h進樣，每次20 μL，分別測定峰面積。結果丹參素與內標物的峰面積比的RSD為0.71%。

3.6回收率實驗：精密量取復方丹參滴丸供試品溶液4.0 mL，置于5個含0.5、1.0、2.0、3.0、4.0 mL對照品溶液的10 mL容量瓶中，用甲醇稀釋至刻度，搖勻，取續濾液用0.45 μm微孔濾膜過濾，20 μL注入高效液相色譜儀，按樣品測定項下操作，計算回收率。測得結果含量丹參素平均回收率為99.6%，RSD為0.89%。試驗結果表明，加樣回收率良好。

3.7樣品含量測定：取三個不同批號的復方丹參滴丸樣品，每批3份，按樣品溶液制備方法制備供試品溶液，進樣前用0.45 μm濾膜濾過，棄去初濾液，分別進樣，進樣量為20 μL，分別測定峰面積。結果見表2。

4　討　論

復方丹參滴丸處方為丹參、三七、冰片。臨床上廣泛用于冠心病、心絞痛的預防、治療、急救。具有劑量小、服用方便、溶出速度快、起效迅速等特點。其中丹參為君藥，其有效有丹參酮ⅡA、丹酚酸B、丹酚酸B鎂鹽、丹參素、丹參總酮、隱丹參酮、原兒茶醛等，丹參素可抑制血小板合成、提高心肌耐缺氧能力，保護心肌，增加冠脈流量［3-4］。是復方丹參滴丸治療冠心病、心肌缺血的主要機制。復方丹參滴丸現在已經成為國內心血管市場上的最主要藥物和品牌。中藥復方丹參滴丸由多味中藥、多種成分組成，很難作到每味藥都進行含量測定［5-6］。臨床測定復方丹參滴丸中丹參素含量方法較多。本研究所采用HPLC法快速測定復方丹參滴丸中丹參素的含量。高效液相色譜用甲醇-水-冰醋酸為（20∶80∶0.5）流動相，出峰時間以及峰型較佳，保留時間適宜［7］。在測定復方丹參滴丸中丹參素的含量時，其他藥物成分均無干擾［8-9］。高效液相色譜法中流動相為液體，流經色譜柱時，受到的阻力較大，為了能迅速通過色譜柱，必須對載液加高壓［10］。其特點為分離效能高。特別是高沸點、大分子、強極性、熱穩定性差化合物的分離分析，顯示出優勢。而且分析速度快、載液流速快。此外高效液相色譜還有色譜柱可反復使用、樣品不被破壞、易回收等優點［11］。本研究建立HPLC快速測定復方丹參滴丸中丹參素的含量。結果顯示丹參素對照品在0.01～0.10 mg/mL范圍內呈良好線性關系，r<0.997，含量丹參素平均回收率為100.15%，RSD為4.19%。所測復方丹參滴丸中丹參素的平均含量為8.034 mg/g，符合2010 版藥典對其含量的要求。提示HPLC法測定復方丹參滴丸中丹參素的含量方法操作流程簡單、快速、準確，可用于該制劑的質量控制中大力推廣使用。

由于丹參素鈉穩定性欠佳，因此對照品溶液需避光，低溫保存，最好臨用現配，以保證準確性。

［1］國家藥典委員會.中國藥典（2010年版一部）［M］.北京:化學工業出版社，2011.

［2］游勇基，陳銘輝.高效液相色譜法測定丹參中丹酚酸B等3種有效成分［J］.中國藥學雜志，2011，38（12）:950-952.

［3］楊廣德，賀浪沖，李永茂.丹參有效部位指紋圖譜定性和有效成分定量分析方法研究［J］.藥物分析雜志，2011，23（6）:409-413.

［4］Chu Y，Zhang L，Wang XY，et al.The effect of Compound Danshen Dripping Pills，a Chinese herb medicine，on the pharmacokinetics and pharmacodynamics of warfarin in rats［J］.J Ethnopharmacol，2011，137（3）:1457-1461.

［5］Ng CS，Wang SP.Systematic review and meta -analysis of randomized controlled trials comparing Chinese patent medicines Compound Danshen Dripping Pills and Di'ao Xinxuekang in treating angina pectoris［J］.Zhong Xi Yi Jie He Xue Bao，2012，10（1）:25-34.

［6］袁琦，趙輝.HPLC法測定復方丹參滴丸中丹參素的含量［J］.河南大學學報:醫學版，2008，27（2）:31-32.

［7］靳榮.復方丹參滴丸臨床新用近況［J］.實用中醫藥雜志，2012，28（7）: 610-611.

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［9］呂東，劉亞蓉.復方丹參膠囊質量控制標準研究［J］.西北藥學雜志，2010，15（6）:254.

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［11］張翠蓮，張偉琪，楊秀斌，等.復方丹參注射液的質量考察［J］.中國藥學雜志，2011，38（1）:56-58.

Determination of Danshensu in Compound Danshen dripping pill by HPLC

ZHANG Qin
（Department of Pharmacy， the First Hospital of Hunan University of Chinese Medicine， Changsha 410000， China）

Objective To establish a HPLC method for content determination （HPLC） of Danshensu in Compound Danshen dropping pill. Methods The chromatographic column was Hypersil C18（4.6 mm×250 mm， 5 μm）； the mobile phase of methanol-water-acetic acid （20∶80∶0.5）， the column temperature was room temperature； the flow rate was 0.9 mL/min； the detection wavelength was 281 nm. Results Danshensu control sample showed good linear relationship in the range of 0.01-0.10 mg/mL r<0.997， Danshensu content， the average recovery was 99.6%， RSD 0.89%. The average content of pigment compound danshendropping pill for 8.034mg/g， consistent with the 2010 edition of Pharmacopoeia requirements for its content. Conclusion The HPLC method for the determination of content of Danshensu in Compound Danshen Dropping Pill operation is simple， fast， accurate， and can be used for the quality control of the preparation in vigorously promoting the use of.

HPLC； Compound Danshen dripping pills； Danshensu； Content

R282.710.3

B

1671-8194（2015）19-0062-02