舌質辨證治療對膿毒性休克兔腸系膜微循環及炎癥因子的影響*

范開亮　辛雪飛　田正云　周春利　郝浩孔立△代洪彬

（1.山東中醫藥大學附屬醫院，山東濟南250001；2.山東省萊州市中醫醫院，山東萊州261499；3.山東中醫藥大學，山東濟南250355；4.山東省濟寧市中醫院，山東濟寧370800）

·研究報告·

舌質辨證治療對膿毒性休克兔腸系膜微循環及炎癥因子的影響*

范開亮1辛雪飛2田正云3周春利4郝浩1孔立1△代洪彬3

（1.山東中醫藥大學附屬醫院，山東濟南250001；2.山東省萊州市中醫醫院，山東萊州261499；3.山東中醫藥大學，山東濟南250355；4.山東省濟寧市中醫院，山東濟寧370800）

目的觀察舌質舌苔辨證診療對膿毒性休克新西蘭大白兔模型微循環的影響。方法80只新西蘭大白兔按隨機數字表法隨機分為正常對照組及造模組，正常對照組10只，造模組70只。采用兔耳緣靜脈注射脂多糖（LPS）制作大白兔膿毒癥休克模型。根據舌質辨證分型，將同證型家兔隨機分為治療組和實驗對照組，造模后1 h，治療組給予相應中藥灌胃治療，正常對照組及實驗對照組給予灌胃等量蒸餾水。監測0、3、6 h平均動脈血壓、心率、血清乳酸（Lac）、腫瘤壞死因子-α（TNF-α）、內皮素-1（ET-1）水平變化。通過BI-2000醫學圖像分析系統觀察3、6 h新西蘭大白兔膿毒癥休克腸系膜微動靜脈管徑、流速、流態、毛細血管網交點開放數，觀察根據家兔舌質使用中藥辨證治療后各項指標的變化。結果根據家兔舌質使用中藥辨證治療能明顯改善各治療組膿毒癥休克新西蘭大白兔模型平均動脈壓、心率、血清乳酸、血清TNF-α、血清ET-1水平及腸系膜微循環動靜脈管徑、流速、流態、毛細血管網交點開放數，與各造模實驗對照組比較，差異均有統計學意義（均P＜0.05）。結論應用舌質辨證治療可以改善膿毒性休克動物模型的微循環狀況。

膿毒性休克微循環舌質辨證TNF-αET-1

膿毒癥存在著發病率高、病死率高、治療費用高的“三高”現象，嚴重威脅人類健康。中醫藥在治療膿毒癥方面取得了良好療效。本研究結合膿毒癥病機，通過觀察膿毒癥動物模型舌質，運用中藥辨證治療，比較治療前后各項指標變化，觀察根據舌質辨證診療對膿毒性休克微循環的影響。現報告如下。

1　材料與方法

1.1動物新西蘭大白兔80只，由山東省實驗動物中心提供，雌雄不限，體質量2.0～2.5 kg，于動物實驗室適應性飼養1周后禁食12 h，可自由飲水。

1.2試藥與儀器中藥由筆者所在醫院科室具有豐富經驗的中醫專家開具，根據每組家兔的舌質利用中醫理論、辨證論治選擇方藥，通過鼻飼給藥。參附湯（人參45 g，炮附子18 g，甘草12 g）、清營湯合生脈散（水牛角15 g，生地黃15 g，玄參12 g，竹葉6 g，麥冬15 g，丹參12 g，人參18 g，五味子9 g）、桃紅四物湯加味（當歸12 g，川芎12 g，白芍12 g，生地黃15 g，桃仁12 g，紅花6 g，人參18 g，黃芪30 g）。濃煎100 mL，質量濃度為平均含生藥量為2.3 g/mL。大腸桿菌內毒素（LPS）：購自美國Sigma公司。10%水合氯醛：山東中醫藥大學動物實驗中心提供。腫瘤壞死因子-α（TNF-α）、內皮素-1（ET-1）酶聯免疫分析試劑盒：購自上海逸峰生物科技有限公司。BI-2000醫學圖像分析系統（成都泰盟科技有限公司），羅氏cobas b123血氣分析儀。

1.3分組與造模80只新西蘭大白兔適應性飼養1周，按隨機數字表法隨機分為正常對照組10只及造模組70只。造模組采用兔耳緣靜脈注射脂多糖2 mg/kg制備膿毒癥休克模型［1］，觀察其體溫、心率、呼吸頻率變化。實驗動物麻醉后，進行頸動脈置管，并將插管連接頸內動脈監測儀器，持續心率、平均動脈壓監測。注射LPS后平均動脈壓（MAP）逐漸下降，下降至基礎值的60%表明造模成功。造模成功后根據舌質情況進行分組，A組22例（舌質淡）、B組24例（舌質紅絳）、C組20例（舌質紫暗），結合膿毒癥病機分別辨證為陽氣暴脫證、毒熱內盛證、瘀血阻滯證［2］，另有3例為其他舌質，無法達到統計分組最小樣本量，不進入分組統計，另有1例造模不成功，亦不進入分組統計。A、B、C組再隨機分為中藥治療組（A2組、B2組、C2組）、實驗對照組（A1組、B1組、C1組）。

1.4給藥方法造模1 h后給藥，各中藥治療組給予中藥（10 mL/kg）灌胃治療，陽氣暴脫證應用參附湯治療，毒熱內盛證應用清營湯合生脈散治療，瘀血阻滯證應用桃紅四物湯加味治療。正常對照組及各實驗對照組給予等量蒸餾水灌胃。

1.5標本采集及檢測1）腸系膜微血管管徑、流速及交叉網點數測定。造模后3 h在腹中線做長約10 cm切口，暴露兔腸道，輕輕拉出回盲部一段腸系膜，將腸系膜輕輕平鋪于盛有恒溫0.9%氯化鈉注射液（溫度38℃左右）的臺式灌流槽的觀察臺上，通過顯微鏡及BI-2000微循環圖像分析系統，測量選定區域3 h、6 h腸系膜微血管管徑、流速、流態、毛細血管網交點開放數。2）心率、平均動脈壓監測。3）TNF-α、ET-1檢測。于動物實驗0 h、3 h、6 h在頸動脈置管處抽取動脈血1 mL做血氣分析，檢測乳酸，股靜脈抽取靜脈血1.5 mL離心20 min后凍存用于TNF-α、ET-1檢測。

1.6統計學處理采用SPSS 20.0統計學軟件。計量資料以（±s）表示；組間采用方差分析t檢驗。P＜0.05為差異有統計學意義。

2　結果

2.1各組心率、平均動脈壓、乳酸、TNF-α、ET-1的比較見表1。與正常對照組比較，造模組心率、乳酸、TNF-α、ET-1值明顯升高，血壓顯著下降，差異有統計學意義（均P＜0.01）。治療6 h后，治療組心率、乳酸、TNF-α、ET-1較治療前明顯下降，血壓升高，與實驗對照組比較，差異有統計學意義（均P＜0.01）。

表1　各組不同時間點指標比較±s）

表1　各組不同時間點指標比較±s）

與A1組比較，△P＜0.05，△△P＜0.01；與B1組比較，*P＜0.05，**P＜0.01；與C1組比較，▲P＜0.05，▲▲P＜0.01。下同。

TNF-α（pg/mL）ET-1（pg/mL）91.73±6.1660.23±6.63 94.37±4.9862.42±7.97 95.36±5.5468.53±8.82 A1組0h56.80±2.55249.36±7.234.80±0.26166.25±6.59132.13±4.97（n=11）3h55.82±3.14266.64±7.214.85±0.26246.69±7.27167.99±3.76 6h55.10±3.03271.18±7.195.24±0.32348.42±12.13197.10±4.31 A2組0h55.82±3.05250.01±7.194.81±0.16165.98±6.01133.86±5.03（n=11）3h62.51±3.49△257.09±7.31△4.55±0.14△245.25±7.37153.45±3.27△6h73.01±4.50△△243.18±6.59△△3.95±0.17△△202.45±10.41△△128.75±4.18△△B1組0h57.02±2.88249.08±6.924.64±0.23163.46±5.84133.39±4.54（n=12）3h56.50±2.84265.42±6.614.75±0.22243.98±9.43169.33±5.00 6h56.19±2.81270.17±5.975.10±0.24342.78±10.99197.48±5.84 B2組0h56.37±3.02250.17±5.804.71±0.19162.72±4.70131.86±4.96（n=12）3h63.71±3.67*256.75±5.99*4.43±0.18*241.73±4.69151.53±5.55*6h74.33±4.01**243.33±5.61**3.85±0.27**200.81±4.98**125.58±5.63**C1組0h56.46±3.49248.00±8.714.82±0.13164.85±8.64130.47±10.41（n=10）3h54.78±3.42265.70±9.434.99±0.33245.95±6.80168.42±7.59 6h54.96±3.92269.10±6.195.36±0.28364.71±19.32196.79±8.99 C2組0h57.41±1.78248.80±7.004.84±0.42159.39±8.59135.73±11.68（n=10）3h64.23±3.66▲255.50±9.71▲4.51±0.40▲251.49±8.23155.68±7.09▲6h75.62±2.84▲▲240.8±11.29▲▲4.00±0.30▲▲204.62±12.91▲▲129.99±6.91▲▲組別時間正常對照組0h（n=10）3h 6h MAP（mmHg）HR（次/min）Lac（mmol/L）99.73±2.62206.60±7.561.83±0.09 100.35±2.78207.90±7.501.86±0.12 100.64±2.73209.60±6.591.87±0.13

2.2各組腸系膜微靜脈及微動脈管徑、速度及交叉網點開放數比較見表2。與正常對照組比較，造模組微靜脈及微動脈管徑收縮、血流速度顯著減慢，毛細血管交叉網點開放數明顯減少（均P＜0.01）。與實驗對照組比較，6 h時，治療組微靜脈及微動脈管徑擴張，血流速度增快，毛細血管交叉網點開放數增多（均P＜0.01）。

表2　各組腸系膜微血管管徑、流速及交叉網點數比較（±s）

表2　各組腸系膜微血管管徑、流速及交叉網點數比較（±s）

交叉網點開放數504.10±20.357.00±1.05 505.60±23.647.10±0.99 A1組3h 29.54±0.39369.49±17.9715.76±0.84458.18±24.454.36±0.92（n=11）6h 29.57±0.35317.20±21.4316.18±0.67370.91±16.433.91±0.70 A2組3h 29.59±0.44378.32±17.8416.31±0.44459.27±26.584.64±0.92（n=11）6h 30.18±0.48△△395.42±15.13△△18.22±0.67△△483.36±21.99△△5.73±0.79△△B1組3h 29.53±0.45376.26±16.9615.83±0.60456.67±20.594.25±0.75（n=12）6h 29.56±0.45325.42±10.7616.22±0.55369.33±13.143.75±0.62 B2組3h 29.60±0.34386.88±15.9716.36±0.42457.17±22.144.50±0.90（n=12）6h 30.35±0.37**403.30±17.48**18.18±0.49**482.42±19.82**5.75±0.75**C1組3h 29.55±0.43373.62±17.9915.53±0.89453.00±29.264.30±0.95（n=10）6h 29.66±0.30321.82±22.3716.04±0.52366.40±21.963.90±0.74 C2組3h 29.69±0.56384.60±22.0316.17±1.02455.00±26.364.70±1.06（n=10）6h 30.43±0.41▲▲401.61±19.41▲▲18.06±0.93▲▲482.40±20.96▲▲5.80±0.92▲▲組別時間微靜脈管徑（μm）微靜脈流速（μm/s）微動脈流速（μm/s）正常對照組3h（n=10）6h微動脈管徑（μm）33.30±0.74457.30±19.8021.83±0.87 33.27±0.71460.13±23.7521.75±1.54

2.3各組微循環血液流態比較與正常對照組比較，正常對照組微血管流速大多為線流，造模組微血管血流顯著減慢，可出現線粒流、粒緩流，甚至血流出現淤滯狀態。與相應實驗對照組比較，6 h時，各治療組微血管流態較3 h時改善，差異有統計學意義（P＜0.05）。

3　討論

膿毒性休克早期即可出現微循環變化［3-5］，表現為微循環血流量下降，毛細血管通透性升高，血流速度減慢，微血栓形成，組織缺氧，乳酸增高，造成多器官功能衰竭。膿毒癥休克常導致循環障礙，很多均與嚴重炎性反應有關，而TNF-α是炎癥反應過程中急性早期促炎性因子［6-7］。TNF-α分泌可誘發IL-1、IL-6以及繼發性炎癥介質釋放，同時能夠增加內皮細胞通透性，引起循環血容量的降低、血液濃縮及組織低灌注，加重臟器損傷。ET-1由全身多種組織細胞合成，是一種具有強烈縮血管作用的生物活性多肽，可導致微循環損害、組織損傷和炎癥反應［8-9］。

舌診是中醫重要診斷方法，具有悠久歷史，隨著疾病的發展變化，舌質舌苔也隨之發生相應的變化，其猶如內臟的一面鏡子。五臟系于舌，無脈不通于舌，舌診為中醫辨證提供了客觀依據，膿毒癥導致的微循環障礙在舌診上有較好體現［10］。實驗證實，中藥辨證治療能有效拮抗內毒素、下調促炎介質水平、調節免疫反應，并通過保護受損內皮改善微循環、避免內毒素攻擊所致組織損傷［11-12］。

本研究通過耳緣靜脈注射脂多糖制作新西蘭大白兔膿毒癥休克模型后，根據大白兔舌質進行分組，運用中醫藥辨證治療。結果示治療組家兔血乳酸、血清TNF-α、ET-1濃度明顯降低，各時相點腸系膜微循環管徑變粗，血流增快，膿毒癥休克模型的微循環障礙明顯改善，表明運用中醫藥辨證治療膿毒癥休克具有良好療效，為臨床運用中藥辨證治療膿毒癥休克提供了有效的依據。

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Effects of the Treatment Based on Tongue Syndrome Differentiation to Septic Shock in Rabbit Mesenteric Microcirculation

FAN Kailiang，XIN Xuefei，TIAN Zhengyun，et al.The Affiliated Hospital of Shandong University of Traditional Chinese Medicine，Shandong，Jinan 250001，China

Objective：To study on the effect of diagnosis and treatment of tongue fur for septic shock on the microcirculation of New Zealand white rabbits.Methods：Septic shock model was made by injecting lipopolysaccharide（LPS）to the ear vein of New Zealand rabbits through rabbit.80 New Zealand white rabbits were randomly divided into the normal control group and the model group，10 rats in the normal control group，70 rats in the model group.According to the tongue differentiation，rabbits with the same syndrome were randomly divided into the treatment group and the experimental control group.1h after the model was made，rabbits in the treatment group were given herbs gavage treatment，the normal control group and experimental control group gavaged by distilled water.The following items were monitored-the change of mean arterial pressure，heart rate，serum lactic acid（Lac），tumor necrosis factor（TNF-α），ET-1 level at 0 h，3 h，6 h.The opening number of mesenteric artery vein diameter，velocity，flow pattern，junction of capillary network of New Zealand white rabbits with septic shock were observed at 3 h，6 h with BI-2000 image analysis system，and the changes in each index were observed after rabbits were treated with traditional Chinese medicine dialectical therapy.Results：The use of traditional Chinese medicine dialectical treatment based on rabbit tongue can significantly improve the mean arterial pressure，heart rate，serum lactate，serum TNF-α，serum ET-1 levels and the mesenteric microcirculation of arteriovenous diameter，velocity，flow pattern，junction of capillary network opening number in treatment group with septic shock in New Zealand white rabbits，which were significantly different among these groups（P＜0.05）.Conclusion：Treatment based on tongue fur dialectical therapy can improve the microcirculation of patients with septic shock.

Septic shock；Microcirculation；Tongue nature；Discriminate；TNF-α；ET-1

R285.5

A

1004-745X（2015）09-1522-03

10.3969/j.issn.1004-745X.2015.09.006

2015-04-15）

山東省中醫藥科技發展計劃項目（2011-095；2013-080）；山東省科技發展計劃項目（2012YD19011）；山東省醫藥科技發展計劃項目（2013WS0250）

（電子郵箱：konglizy2@163.com）