姬松茸多糖對輻射損傷大鼠的免疫調節作用

周國清，藍蕾，姜穎，劉劍英

基礎醫學

姬松茸多糖對輻射損傷大鼠的免疫調節作用

周國清，藍蕾，姜穎，劉劍英＊

姬松茸多糖；輻射損傷；大鼠；免疫調節

輻射可引起機體物質代謝紊亂、造成機體免疫系統損傷，還會引起機體多種器官的氧化損傷，使體內防御系統被嚴重破壞［1］。目前一些效果明顯抗輻射藥物往往因其不良反應較大無法廣泛應用［2］，研究利用純天然植物中的活性成分提高機體抗輻射能力，預防和減輕輻射對機體的損害逐漸成為新的研究熱點。

姬松茸（A garicus blazei m urill，APM）原產于巴西，故又名巴西蘑菇。該菌鮮香脆嫩，營養價值豐富，其含有的多糖類成分具有提高機體免疫力、防癌抗癌、降糖降脂、抗炎、抗動脈硬化等多種生物學活性［3-5］。但迄今為止，尚未見對其抗輻射損傷的免疫調節作用研究報告，本文主要研究姬松茸多糖對輻射損傷大鼠淋巴細胞增殖活性和紅細胞溶血度的影響。

1　材料與方法

1.1原料及試劑

1.1.1姬松茸多糖購自西安森冉生物工程有限公司，多糖濃度為50%，產品批號：SR20140416。

1.1.2主要試劑淋巴細胞增殖活性（MTT）試劑盒、大鼠淋巴細胞分離液、PBS、1640培養基、紅細胞裂解液、D-Hanks液，上述試劑均由青島渝邑祥科貿有限公司提供。水合氯醛，由天津化學試劑一廠生產。

1.1.3實驗動物實驗動選擇清潔級SD健康雄性大鼠40只，周齡6周，體重（140±20）g，于實驗室適應性喂養1周。

1.1.4主要儀器紫外線分光光度計（美國Bechmann DU640型）、電子天平（BL121SS北京Sartorius）、離心機（德國Eppendorf 5801型）、酶標儀（美國Bio-Rad550型）、CO2培養箱（上海躍進醫療器械廠）等。

1.2輻射損傷大鼠模型建立

1.2.1實驗動物及分組采用完全隨機分組的方法將40只實驗大鼠隨機分為4組，正常對照組、模型對照組、姬松茸多糖低劑量組（100mg/kg·d）、姬松茸多糖高劑量組（200mg/ kg·d），每組10只，分籠飼養，自然晝夜，節律光照，飼養溫度（20±5）℃，相對濕度為40%～60%。

1.2.2建立動物模型4組大鼠普通飼料適應性喂養7 d后開始造模，給予直線加速器X射線照射，皮源距100 cm，劑量率100 cGy/分，全身輻射，輻射劑量為5.0Gy。見表1。

表1　實驗動物模型建立對照表

1.3實驗內容

1.3.1體重測量用電子天平每日上午9點稱量實驗大鼠的體重，選取實驗前、造模后、實驗結束三次統計體重，進行分析。

1.3.2樣品采集造模后灌胃飼養14 d，末次給藥后24 h稱重，腹腔注射10%水合氯醛給予麻醉（0.3m l/100 g），腹主動脈取血4m l。

1.3.3實驗方法

1.3.3.1淋巴細胞增殖活性分離淋巴細胞懸液，接種于96孔板中，100μl/孔，每孔細胞數>100個。將培養板在培養箱（37℃，5%CO2）預培養。做細胞數目測定時，向每孔加入10μl的CCK-8溶液。在CO2培養箱內孵育2 h。用酶標儀測定在450～490 nm處的吸光度。

1.3.3.2紅細胞溶解度取新鮮抗凝全血2ml，經生理鹽水洗滌、離心配制成體積分數為1%的紅細胞懸液，取4m l分裝為A、B兩管備用。A管加入2m l的過氧化氫，B管加入2ml的蒸餾水，于37℃水浴恒溫箱溫浴30min，后離心取其上清液用分光光度計在540 nm波長比色。

1.4實驗數據處理采用SPSS19.0軟件進行分析，數據以±s表示，采用t檢驗比較實驗各組差別有無顯著性。

2　結果

2.1一般情況造模前，4組實驗大鼠體重無明顯差異（P＞0.05），說明動物分組合理。造模后各組動物的體重較造模前均有所增加，模型對照組和姬松茸多糖高、低劑量組動物體重增加均顯著低于正常對照組（P＜0.05）；干預后，姬松茸多糖高、低劑量組大鼠的體重較模型對照組均顯著增加（P＜0.05）。見表2。

表2　實驗大鼠造模前后體重變化

2.2姬松茸多糖對輻射損傷大鼠淋巴細胞增殖活性和紅細胞溶解度的影響與正常對照組相比，模型對照組淋巴細胞增殖活性下降，差異有顯著性（P＜0.05）；與模型對照組相比，姬松茸多糖高、低劑量組淋巴細胞增殖活性升高，差異有顯著性（P＜0.05）；與姬松茸多糖低劑量相比，姬松茸多糖高劑量組淋巴細胞增殖活性差異不顯著（P＞0.05）。

與正常對照組相比，模型對照組組紅細胞溶血度下降，差異有顯著性（P＜0.05）；與模型對照組相比，姬松茸多糖低劑量組紅細胞溶解度差異無顯著性（P＞0.05），姬松茸多糖高劑量組紅細胞溶解度升高，差異有顯著性（P＜0.05）；與姬松茸多糖低劑量組相比，姬松茸多糖高劑量組紅細胞溶血度升高，差異有顯著性（P＞0.05）。見表3。

表3　姬松茸多糖對輻射損傷大鼠淋巴細胞增殖活性和紅細胞溶解度的影響

3　討論

隨著工業信息技術的不斷發展，電腦、微波爐、手機等電子設備的普及，生活中接觸到的輻射越來越多，長時間接觸輻射會對人體產生一定的危害。另外，接受放射治療的癌癥患者，以及輻射相關職業從業人員也會受到一定程度輻射損害，因此，輻射損傷逐漸受到人們的關注［6］。輻射損傷的主要危害之一是損傷機體免疫系統，降低淋巴細胞增殖活性以及紅細胞溶血度等一系列免疫學指標，導致免疫力低下，引發各種病癥。除此之外，輻射損傷還會對內分泌系統、神經系統、消化系統以及機體其他組織器官等各方面產生不同程度的危害。同時會引起記憶力衰退、視力下降、渾身無力、染色體畸變率升高以及細胞微核率升高等主要表現［7-9］。

在機體免疫系統中，淋巴細胞的增殖是人體對非己抗原刺激而產生免疫應答過程中的重要表現。機體經非己抗原刺激促進淋巴細胞增殖產生效應淋巴細胞，進而吞噬非己抗原，最終達到維護人體內環境穩定的目的。淋巴細胞增殖的效果直接影響效應淋巴細胞產生的數量，產生效應淋巴細胞的數量決定了人體免疫應答反應的強度，從而反映了人體細胞免疫的狀態。因此，淋巴細胞增殖活性是衡量細胞免疫的一個檢測指標［10］。本次實驗結果表明輻射損傷后大鼠的淋巴細胞增殖活性明顯下降，姬松茸多糖干預后淋巴細胞增殖活性較模型對照組明顯上升，說明姬松茸多糖能顯著提升輻射損傷大鼠的淋巴細胞增殖活性。

紅細胞免疫是脊椎動物非特異性免疫系統的重要組成部分，其免疫活性與生物進化水平、環境因素、藥物等密切相關。RBC免疫功能對環境和藥物因素的改變較為敏感，是檢測機體健康狀況的一個重要指標［11］。本次實驗結果表明輻射損傷后大鼠的紅細胞溶血度明顯下降，姬松茸多糖干預后紅細胞溶血度較模型對照組明顯上升，姬松茸多糖高劑量組的差異更顯著，說明姬松茸多糖能顯著提升輻射損傷大鼠的紅細胞溶血度。

綜上所述，姬松茸多糖可顯著提高輻射損傷大鼠的淋巴細胞增殖活性和紅細胞溶血度，對輻射損傷大鼠的免疫調節具有一定的保護作用。

［1］韓笑，董華進，崔承彬，等.雙奇顆粒對小鼠抗輻射作用的初步研究［J］.軍事醫學，2011，35（5）：400-401.

［2］郭劍平，張偉，李燕玲.多糖輻射損傷防護的研究進展［J］.輻射防護通訊，2006，26（5）：28-30.

［3］田庚元.中藥免疫調節劑的研究和開發［J］.中國新藥雜志，1999，8（11）：793-799.

［4］鄭亞鳳，黃志偉，陳瑞慶，等.姬松茸多糖的抗腫瘤活性［J］.福建農業大學學報，2010，39（4）：409-412.

［5］聶偉，張永祥.多糖的免疫調節作用及其作用機制研究進展［J］.中國藥理學通報，1999，15（6）：484-487.

［6］Lee KY，Lee MH，Chang IY.Macrophage activationg by polysacccha-ride fraction isolated from salicornia herbarra［J］.J Ethnopharmacol，2006，103（3）：372-378.

［7］牛英才，趙學梅，張春，等.低分子姬松茸多糖對荷瘤小鼠腫瘤組織CD44mRNA表達的影響［J］.遼寧中醫雜志，2008，35（10）：1482-1484.

［8］牛英才，趙學梅，張春，等.低分子姬松茸多糖對Bel-7402細胞端粒酶-RNA mRMA表達的影響［J］.時珍國醫國藥，2008，19（11）：2630-2632.

［9］張春，隋薇，王慧榮，等.低分子量姬松茸多糖對HT-29細胞與內皮細胞遷移、黏附的影響［J］.醫學研究雜志，2009，38（7）：32-34，135.

［10］張卉，孫麗霞，陶明明.姬松茸胞外多糖AbEXP1-α免疫調節活性研究［J］.生養化工學院報，2007，6（2）：102-104.

［11］張卉，劉長江.姬松茸生理活性物質的研究進展［J］.沈陽農業大學學報，2003，34（1）：59-62.

［2015-06-18收稿，2015-07-17修回］

［本文編輯：吳蓉］

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