旋毛蟲Hsp70與Ts87融合蛋白的構建表達及鑒定*

孫 靚 孫 青 房 磊 楊 靜 顧 園 畢 闊 諸欣平

(首都醫科大學基礎醫學院人體寄生蟲學教研室，北京 100069)

旋毛蟲病是一種人獸共患的寄生蟲病，人或動物通過生食或半生食含旋毛蟲囊包幼蟲的豬肉或其他肉類而感染。旋毛蟲病呈世界性分布，在歐洲、北美洲、阿根廷、老撾、中國等地都有流行(Pozio, 2007；Murrelletal., 2011; Feidasetal., 2014)。我國是世界上受旋毛蟲病危害較嚴重的國家之一，近年來由于生食、涮、烤等食肉方式的多樣化，加之人們越來越多地嘗試食用野生動物肉類，使得我國旋毛蟲病發病率呈上升趨勢(Murreletal., 2011; 魚艷榮等，2013； 劉明遠等，2014)。因此預防和控制旋毛蟲病的傳播和流行是一個亟待解決的問題，而目前尚無十分有效的預防旋毛蟲病的疫苗問世。

本課題組的前期研究發現，從旋毛蟲成蟲cDNA表達文庫中篩選得到的排泄分泌蛋白rTs87有著較好的免疫原性。通過肌注rTs87蛋白與佐劑的混合物可誘小鼠體產生體液和細胞免疫反應，通過灌胃的方式可誘導產生粘膜免疫反應，并且以其制備DNA疫苗的肌幼蟲減蟲率可達40%以上(Yangetal., 2010; Yangetal., 2013)。旋毛蟲熱休克蛋白70(Ts-Hsp70)是我們從旋毛蟲成蟲cDNA表達文庫中克隆表達的另一種蛋白，我們的前期研究也發現該蛋白為可溶蛋白，可以通過活化樹突狀細胞(DC)誘導機體產生較強的抗旋毛蟲感染的免疫保護作用(Wangetal., 2009; Fangetal., 2014)。然而，單一蛋白免疫的效果并不十分理想。

融合蛋白是將兩個或多個基因通過DNA重組的技術相連接，獲得具有多種蛋白質功能的表達產物(Schmidt, 2013)。由于其相對分子質量較大，抗原表位多，更容易誘導較強烈的免疫反應(Chengetal., 2014; Pieczykolanetal., 2014)。……