DNA條形碼技術在口岸媒介生物種類鑒定中的應用

張 勤 劉亞風 王曉夢 張 芳 王 凱 高 潔

(河南出入境檢驗檢疫局， 鄭州 450003)

隨著國際貿易往來的增加，媒介生物及其攜帶的病原體隨交通工具、貨物、行李等物件傳入我國的風險也隨之增加，對其進行準確的鑒定和病原體監測是疫病預防和控制的核心步驟。然而目前對媒介生物種類物種鑒定仍以形態學鑒定為主，但以傳統的形態學鑒定存在樣本發育狀態、肢體完整性、專家依賴性等局限性，此外由于媒介生物種類繁多、近似種難以區分以及數據共享性差等因素，在實際工作中常常難以快速鑒別。自Hebert等(2003)在前人工作基礎上提出以線粒體細胞色素c氧化酶亞基I基因(COⅠ)為標準基因的DNA條形碼技術，隨后有關DNA條形碼 (DNA Barcoding) 的研究在世界各地開展，目前已成功應用于多個生物類群中。COⅠ基因比其他線粒體基因擁有更多的系統發育信號，其密碼子的第3位核苷酸表現出很高的堿基置換率，這使得COⅠ基因在分子進化速率方面超出12S rDNA和16S rDNA兩倍之多(Pereiraetal., 2010)。近年來，隨著分子生物學技術的發展，分子鑒定以其特有的優勢成為形態學鑒定的有力補充。

本研究應用DNA 條形碼技術對河南口岸入境截獲和本底調查中難以通過形態學鑒定的媒介生物進行了DNA條形碼擴增和序列比對，解決了在實際工作中的難題，充分顯示了DNA條形碼技術對傳統形態學鑒定補充作用。

1 材料與方法

1.1 材料

本研究所用的樣本為鄭州東站口岸截獲的1只形態不完整的蚊(孟加拉)和5只蜱(澳大利亞)、鄭州機場口岸本底調查中2只形態殘缺的蠅。……