血清和卵泡液中NGF水平與PCOS的相關性研究

王春艷，樊桂玲，易建平

血清和卵泡液中NGF水平與PCOS的相關性研究

王春艷1，樊桂玲2，易建平2

目的檢測多囊卵巢綜合征（PCOS）患者血清與卵泡液中神經生長因子（NGF）水平，探討NGF水平與PCOS發生的相關性以及對PCOS患者助孕結局的影響。方法收集2011年12月—2012年11月在唐山市婦幼保健院生殖遺傳科行體外受精-胚胎移植（IVF-ET）的PCOS患者65例及同期因輸卵管因素行IVF-ET的非PCOS患者31例作為對照組。采用ELISA檢測96例患者絨毛膜促性腺激素（HCG）注射日血清和取卵日卵泡液中NGF的水平。比較PCOS組與正常對照組妊娠與未妊娠患者血清與卵泡液中NGF的水平。結果PCOS患者血清［（14.38± 0.42）ng/L］及卵泡液［（9.61±0.49）ng/L］中的NGF水平明顯高于正常對照組［（11.39±0.38）ng/L、（7.55±0.40）ng/L］；PCOS患者妊娠組血清［（14.22±0.35）ng/L］和卵泡液［（9.30±0.31）ng/L］中的NGF水平低于未妊娠組［（14.51±0.43）ng/L、（9.86±0.46）ng/L］，差異有統計學意義（均P＜0.01）。結論PCOS患者血清和卵泡液內存在NGF水平高表達，血清和卵泡液內過高的NGF水平可能不利于PCOS患者成功妊娠。

多囊卵巢綜合征；神經生長因子；血清；卵泡液

多囊卵巢綜合征（polycystic ovary syndrome，PCOS）是生育期女性常見的內分泌紊亂性疾病，是引起育齡婦女不孕的重要原因之一。盡管有關PCOS的病因及發病機制的研究已經經歷了60多年，但是目前其具體發病原因臨床仍無定論。自從在卵泡液中檢測到神經生長因子（nerve growth fac?tor，NGF）受體后，各國學者開始研究NGF對卵泡發育和生長的影響，有關NGF對卵巢功能影響的研究報告主要來自動物，人類研究較少。本研究通過檢測體外受精-胚胎移植（IVF-ET）周期PCOS患者血清與卵泡液中NGF水平，從細胞因子水平探討NGF與PCOS發生的相關性以及NGF對PCOS患者助孕結局的影響。

1 對象與方法

1.1 研究對象選擇2011年12月—2012年11月在唐山市婦幼保健院生殖遺傳科就診、行IVF-ET的不孕患者96例，其中符合鹿特丹標準［1］的PCOS患者65例。另選取同期因輸卵管因素行IVF-ET治療的非PCOS患者31例作為對照組。患者年齡23～38歲，平均（29.74±3.17）歲。治療前所有患者夫婦雙方均簽署促排卵藥物治療及方案知情同意書。

1.2 主要儀器及設備人神經生長因子試劑盒（上海永葉），化學發光免疫分析儀（瑞士ROCHE公司），高精度加液器（美國FALCON公司），恒溫培養箱（GNP-9080），超低溫冰箱（SANYO），γ計數器（美國R&D），自動洗板機（北京原子能），低速離心機（科大創新股份），陰道超聲（ALOKA-3500），CO2培養箱（美國FORMA）。

1.3 方法

1.3.1 方案介紹所有患者均采用長方案，即口服去氧孕烯炔雌醇（媽富隆）第10天開始降調節，促性腺激素釋放激素激動劑（GnRH-a，曲普瑞林，廣東麗珠制藥有限公司）0.05～0.1 mg/d，皮下注射，直至注射HCG日。于降調節第20天時檢測血促卵泡生成素（FSH）＜5 IU/L，促黃體生成素（LH）＜5 IU/L，雌二醇（E2）≤50 ng/L及陰道超聲檢查子宮內膜厚度≤5 mm，最大卵泡徑線＜10 mm時認為垂體完全達到降調節，加用促性腺激素（Gn）-福特蒙（瑞士伊伯薩制藥有限公司），起始劑量為150～300 IU/d，根據E2水平和陰道超聲監測卵泡大小調整Gn的使用劑量。

1.3.2 標本采集（1）血清：每例患者經超促排卵后于注射HCG日晨空腹采肘正中靜脈血3 mL，立即送實驗室3 000 r/ min離心10 min，分離上層血清，將血清置-80℃保存待測。（2）卵泡液：在陰道超聲監測下取卵，僅留取卵泡平均直徑在15 mm以上，清亮且無血染的卵泡液10 mL，離心，3 000 r/ min離心10 min，分離上清液，將分離出的上清液置-80℃冰箱中保存待測。

1.3.3 NGF水平檢測采用酶聯免疫吸附（ELISA）法檢測IVF-ET周期中96例患者HCG日血清及取卵日卵泡液內NGF水平。

1.3.4 統計學方法采用SPSS 16.0軟件包進行統計學分析，計量資料采用均數±標準差表示，2組間比較采用t檢驗，以P＜0.05為差異有統計學意義。

2 結果

2.1 PCOS組與對照組血清及卵泡液NGF水平的比較PCOS患者血清及卵泡液內NGF水平明顯高于對照組，差異有統計學意義（P＜0.01），見表1。

Tab.1 Comparison of NGF in serum and follicular fluid between PCOS group and control group表1 PCOS組與對照組血清及卵泡液內NGF水平的比較（ng/L，）

Tab.1 Comparison of NGF in serum and follicular fluid between PCOS group and control group表1 PCOS組與對照組血清及卵泡液內NGF水平的比較（ng/L，）

＊＊P＜0.01

組別PCOS組對照組t n 65 31血清NGF水平14.38±0.42 11.39±0.38 33.819＊＊卵泡液NGF水平9.61±0.49 7.55±0.40 20.597＊＊

2.2 PCOS患者妊娠組與未妊娠組血清及卵泡液中NGF水平比較PCOS患者妊娠組HCG日血清及取卵日卵泡液中NGF水平顯著低于未妊娠組，差異有統計學意義（P＜0.01）。見表2。

Tab.2 Comparison of NGF level in PCOS patients between pregnancy and none-pregnancy groups表2 PCOS患者妊娠組與未妊娠組NGF水平的比較（ng/L，）

Tab.2 Comparison of NGF level in PCOS patients between pregnancy and none-pregnancy groups表2 PCOS患者妊娠組與未妊娠組NGF水平的比較（ng/L，）

＊＊P＜0.01

組別妊娠組未妊娠組t n 29 36血清NGF水平14.22±0.35 14.51±0.43 2.990＊＊卵泡液NGF水平9.30±0.31 9.86±0.46 5.888＊＊

3 討論

PCOS是一種以多毛、肥胖、卵巢多囊樣改變及無排卵為特征的內分泌紊亂及多系統代謝異常性疾病，普遍存在高雄激素血癥和胰島素抵抗，在生育年齡婦女中發病率約為5%～10%［2］，是引起育齡女性不孕的主要原因。目前PCOS發生的確切病因仍不完全清楚，因此對于PCOS病因的研究一直是生殖內分泌領域研究的熱點。

3.1 NGF與卵泡發育的關系有研究認為，卵泡的發育過程復雜，由許多不同來源的細胞因子和內分泌激素在不同時間和不同空間上共同完成［3］。NGF是一種由神經元支配的、靶組織分泌的小分子多肽，由118個氨基酸殘基組成，屬于神經生長因子家族。NGF在人類發育卵泡、成熟卵泡顆粒細胞中均有表達，而其高親和力受體（Trk-A）主要在成熟卵泡表達。NGF除了對卵巢所支配神經的支持營養作用外，對早期卵泡發育和排卵起著直接的調節作用［4］。魏春霞［5］研究表明NGF具有促使人原始卵泡轉化為初級卵泡以及促進其進一步生長發育的作用，是一種調節原始卵泡向初級卵泡轉化和早期卵泡生長發育的促進因子。

3.2 NGF與PCOS患者卵泡發育的關系始基卵泡啟動生長的過程復雜而精細，主要受到旁分泌、自分泌及內分泌機制的調控。Dissen等［6］研究表明PCOS大鼠卵巢中過量的NGF降低卵巢排卵能力，并且導致早期竇卵泡的發育，最顯著的卵巢形態特征是缺乏排卵前大的卵泡，該研究還顯示NGF通過Trk-A，激活酪氨酸激酶信號系統，促進排卵過程，然而過量的NGF則會引起內分泌和非內分泌組織的病理變化。另有PCOS大鼠模型研究發現，卵巢內NGF及其低親和力受體合成增加，大鼠失去動情周期，卵巢內給予對抗NGF及其受體的抗血清后，大鼠能夠恢復動情周期及排卵［7］。陳炳錦等［8］通過研究PCOS患者的成熟與未成熟卵泡的顆粒細胞NGF及其受體的表達，認為PCOS可能存在NGF高表達基礎，NGF可能與卵泡成熟有關。

3.3 NGF與PCOS患者妊娠結局的關系隨著促性腺激素的廣泛應用和IVF-ET技術的發展，PCOS患者經常聯合應用促排卵［9］治療，但在控制性促排卵中常會出現高獲卵量、低胚胎質量等問題，據統計其排卵率可達70%～80%，但妊娠率僅30%左右［10］。有學者認為這可能與PCOS患者的內分泌環境紊亂及代謝異常所致的卵子質量降低有關［11］。Dissen等［6］通過大鼠模型研究認為PCOS組卵巢內NGF生成過量，通過與卵巢內的NGF受體作用，使卵巢發生形態學變化，同時伴隨著促黃體絨素（LH）水平的提高，過量的NGF不但降低卵子的發育潛能，亦可導致較多早期卵泡的同時發育。

本研究發現，卵泡液內NGF水平的高表達可能是PCOS患者早期多卵泡發育、優勢卵泡選擇障礙，并最終導致無排卵的卵巢局部影響因子之一。同時血清和卵泡液內NGF水平的過高表達并不利于卵母細胞的發育，影響卵子質量，降低胚胎發育潛能，從而影響PCOS患者的妊娠結局，這也可部分解釋PCOS患者高獲卵量、低胚胎質量及流產率高的原因。

［1］Rotterdam ESHRE/ASRM-Sponsored PCOS consensus workshop group.Revised 2003 consensus on diagnostic criteria and long term health risks related to polycystic ovary syndrome（PCOS）［J］.Hum Reprod，2004，19（1）：41-47.

［2］Qiao J.Polycystic ovary syndrome［M］.Beijing：Beijing medical uni?versity press，2009.［喬杰.多囊卵巢綜合征［M］.北京：北京大學醫學出版社，2009］.

［3］Huang PX，Li R，Wei JH.Research progress of the folliculogenesis and its regulation［J］.Journal of International Reproductive Health/ Family Planning，2014，33（1）：36-39.［黃品秀，李蓉，韋繼紅.卵泡的發育和調控機制研究進展［J］.國際生殖健康/計劃生育雜志，2014，33（1）：36-39］.

［4］Chen BJ，Cheng LN，Wang YW，et al.Expression of nerve growth factors and its receptors in granulosa cells in polycystic ovarian syn?drome［J］.Chinese Journal of Women and Children Health，2009，24： 1692-1694.［陳炳錦，程利南，王永衛，等.NGF及其受體mRNA在PCOS患者顆粒細胞中的表達［J］.中國婦幼保健，2009，24：1692-1694］.

［5］Wei CX.The effect of nerve growth factor on the development of hu?man primordial follicles in vitro culture［D］.Sun Yat-sen University，2007，6：27-32.［魏春霞.神經生長因子對人原始卵泡體外發育影響的實驗研究［D］.中山大學，2007，6：27-32］.

［6］Dissen GA，Garcia-Rudaz C，Paredes A，et al.Excessive ovarian production of nerve growth factor facilitates development of cystic ovarian morphology in mice and is a feature of polycystic ovarian syndrome in humans［J］.Endocrinology，2009，150（6）：2906-2914. doi：10.1210/en.2008-1575.

［7］Lara HE，Dissen GA，Leyton V，et al.An increased intraovarian syn?thesis of nerve growth factor and its low affinity receptor is a princi?pal component of steroid-induced polycystic ovary in the rat［J］.En?docrinology，2000，141（3）：1059-1072.

［8］Chen BJ，Cheng LN，Wang YW，et al.Expression of nerve growth factors and its receptors in granulosa cells and human ovarian follicle development in polycystic ovarian syndrome［J］.Clinical Medicine of China，2009，25（12）：1314-1316.［陳炳錦，程利南，王永衛，等.神經生長因子及其受體在顆粒細胞中的表達與多囊卵巢綜合征組卵泡發育的研究［J］.中國綜合臨床，2009，25（12）：1314-1316］.

［9］Xiao P，Tan XS.Assisted reproduction treatment progress of Polycys?tic ovary syndrome［J］.Journal of Modern Medicine&Health，2012，28（18）：2804-2806.［肖蓓，譚曉珊.多囊卵巢綜合征助孕治療的進展［J］.現代醫藥衛生，2012，28（18）：2804-2806］.

［10］Li CZ，Yu XY.Progress in study of plasma visfatin and polycystic ovary syndrome［J］.Reproduction&Contraception，2008，28（4）：232-235.［李昌周，于新艷.血漿內脂素和多囊卵巢綜合征關系的研究進展［J］.生殖與避孕，2008，28（4）：232-235］.

［11］Du CS.Medical genetics［M］.Beijing：People′s medical publishing house，1988：54-67［杜傳書.醫學遺傳學基礎［M］.北京：人民衛生出版社，1988：54-67］.

（2014-12-03收稿2015-04-24修回）

（本文編輯李鵬）

The relationship between NGF in serum and follicular fluid and polycystic ovary syndrome

WANG Chunyan1，FAN Guiling2，YI Jianping2
1 Qianan Maternal and Child Health Hospital，Tangshan 064400，China；2 Maternal and Child Health Hospital of Tangshan

ObjectiveTo investigate the relationship of nerve growth factor（NGF）between serum and follicular fluid in patients with polycystic ovary syndrome（PCOS），and its effect on pregnancy outcomes.MethodsFrom December 2011 to November 2012，65 PCOS patients suffered with in vitro fertilization-embryo transfer（IVF-ET）were included in PCOS group and 31 non-PCOS patients with IVF-ET were used as control group.The expressions of NGF in serum and follicular fluid were detected by ELISA on the injection day of chorionic gonadotropin（HCG）.The expression levels of NGF in serum and follicular fluid were compared between PCOS group and control group.ResultsThe NGF levels in serum［（14.38±0.42）ng/L］and follicular fluid［（9.61±0.49）ng/L］were significantly higher in PCOS group than those of control group［（11.39±0.38）ng/L and（7.55±0.40）ng/L］.In PCOS group，NGF levels in serum［（14.22±0.35）ng/L］and follicular fluid［（9.30±0.31）ng/L］were significantly lower in pregnant group than those of non-pregnant group［（14.51±0.43）ng/L，（9.86±0.46）ng/L，P＜0.01］. ConclusionThe increased levels of NGF in serum and follicular fluid of PCOS patients contribute to the pathogenesis of PCOS.The high expression of NGF in serum and follicular fluid may be harmful to pregnancy in PCOS patients.

polycystic ovary syndrome；nerve growth factor；serum；follicular fluid

R711.7

A

10.11958/j.issn.0253-9896.2015.09.015

1河北唐山，遷安市婦幼保健院生殖科（郵編064400）；2唐山市婦幼保健院

王春艷（1979），女，研究生，碩士學位，主治醫師，主要從事生殖內分泌方面研究