金線蘭灰霉病發生初報

章淑玲，林谷園，歐高政*

(1. 福建農業職業技術學院園藝園林系，福州 350119; 2.福建出入境檢驗檢疫局, 福州 350001)

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金線蘭灰霉病發生初報

章淑玲1，林谷園2，歐高政1*

(1. 福建農業職業技術學院園藝園林系，福州 350119; 2.福建出入境檢驗檢疫局, 福州 350001)

灰霉病是金線蘭生產中出現的一種新的重要病害，本研究對該病癥狀進行了觀察，并通過病原形態鑒定、rDNA-ITS序列分析及致病性測定鑒定其致病菌為灰葡萄孢(BotrytiscinereaPers.)。針對該病的發生危害特點，提出了相應的防治措施。

金線蘭； 灰霉病； 病原鑒定； 病害調查； 防治

金線蘭[Anoectochilusroxburghii(Wall.)Lindl]又名花葉開唇蘭，屬蘭科開唇蘭屬多年生草本植物，富含有對人體有益的氨基酸、牛磺酸、多糖類及微量元素等[1]。金線蘭自然繁殖率很低且生長十分緩慢，再加上自然環境的破壞及人為的過度采挖，其野生數量極為稀少[2]，1990年被福建省政府列為瀕危藥用植物[3]。為了緩解金線蘭市場供應的不足，組培技術逐步發展并成熟起來[4-7]。金線蘭組培苗在人工大棚種植時，由于氣候、營養條件以及栽培技術的改變導致某些病蟲害的發生與危害。已報道的病害有金線蘭莖枯病、猝倒病、軟腐病、炭疽病以及霜霉病等[8-10]。2013年以來通過對福建省多地棚栽金線蘭病蟲害的調查，發現金線蘭移栽后易出現腐爛、發霉等癥狀，經進一步的癥狀觀察、病原鑒定及致病性測定被鑒定為灰葡萄孢(BotrytiscinereaPers.exFr.)引起的金線蘭灰霉病，此病是金線蘭生長中出現的新病害。現將結果匯報如下。

1 材料與方法

1.1 病害調查與癥狀觀察

2013年3月以來作者調查了福建省福州、漳州、寧德、龍巖等地大棚中金錢蘭病蟲害，發現灰霉病是金線蘭上新出現的一種重要病害，并對該病進行了詳細的觀察與記錄。

1.2 病原菌的分離及形態鑒定

用常規的組織分離法分離病組織中的病原菌[11]，分離得到的菌株經單孢純化后接種在馬鈴薯蔗糖瓊脂培養基(potato sucrose agar，PSA)平板上并置于26～28 ℃的恒溫箱中培養，觀察其培養性狀及在光學顯微鏡下的形態特征。

1.3 病原菌的rDNA-ITS序列測定

根據武波等的SDS法提取病菌的DNA[12]。PCR擴增采用通用引物ITS1：5′-TCCGTAGGTGAACCTGCGG-3′和ITS4: 5′-TCCTCCGCTTATTGATATGC-3′。PCR反應程序為：94 ℃預變性5 min；94 ℃變性45 s，55 ℃退火45 s，72 ℃延伸1 min，35個循環；72 ℃延伸10 min。PCR產物委托上海生工生物工程技術服務有限公司測序，并將測序結果序列輸入GenBank中進行登錄及BLAST比對。

1.4 病原菌的致病性測定

將在PSA上培養10 d后的供試菌株用無菌水沖洗下表面的孢子，制成1×106個/mL的孢子懸浮液噴霧接種于移栽定植10 d后的金線蘭苗上，用塑料薄膜覆蓋置于溫室大棚內，7 d后觀察植株的癥狀表現。從接種發病后的植株中重新分離鑒定其中病原物，并與原接種菌進行比較。

2 結果與分析

2.1 病害的發生及癥狀特點

灰霉病在所調查的福建省各個地區棚栽金線蘭中均有發生，發病率為5%～20%，主要發生于移栽定植期及生長期。病菌可危害金線蘭的葉片，有時也可侵染葉柄或莖。發病時多從植株中下部葉片的葉尖或葉緣開始向葉柄方向侵染，病組織初期呈淡褐色水漬狀腐爛，而后失水干枯(圖1a)。病部逐漸向上部葉片發展，最后可導致心葉腐爛或整株死亡(圖1b)。濕度大時病組織上易產生灰色或灰白色的霉層(圖1c)。該病主要發生于高溫高濕及通氣條件較差的大棚環境中，同時組培苗長勢較弱、出苗時培養基未清洗干凈及栽培過程中造成的機械傷口或蟲傷較多時發病較重。

2.2 病原菌的培養性狀及形態特征

培養性狀：在PSA平板培養基上，菌絲初期無色透明,呈輻射狀生長，中后期菌絲顏色不斷加深，呈淺褐色或深褐色(圖1d)。菌落棉絮狀，氣生菌絲發達，5～7 d后長出分生孢子梗及分生孢子，10 d后菌落表面著生褐色菌核。

形態特征：分生孢子梗直立、細長，單生或數根叢生，具有分隔；頂端的產孢細胞膨大呈球狀，其上著生小柄，小柄上產生大量的分生孢子，似葡萄穗狀(圖1e)。分生孢子形狀多樣，多數為卵圓形、卵形或長卵圓形，(8～21)μm×(5～10)μm。菌核圓形、橢圓形或不規則形，通常散生于培養基中，菌核(0.6～4.2)mm×(0.8～3.0)mm。

根據培養性狀和形態特征，對比參考文獻[13]，將該病原菌鑒定為灰葡萄孢(B.cinerea)。

圖1 金線蘭灰霉病的癥狀和病原菌的培養性狀及形態特征Fig.1 The symptoms of gray mold on Anoectochilus roxburghii and cultural and morphologic characters of Botrytis cinerea

2.3 病原菌的分子生物學鑒定

病原菌DNA經PCR擴增后的產物經測序，獲得539 bp的rDNA-ITS序列(GenBank登錄號為KJ502656)。該序列與GenBank中核酸數據進行BLAST比對，結果表明：該菌與已報道的灰葡萄孢(B.cinerea)的有性世代富克爾核盤菌(Botryotiniafuckeliana)序列相似性最高，相似性達99%～100%。

2.4 致病性測定

接種1周后掀開塑料薄膜檢查金線蘭的生長情況，可見接種后的金線蘭表現出與自然發病相似的癥狀(圖1f)，從病組織上也可分離獲得與原接種菌一致的病原菌，由此通過柯赫氏法則確定了該病原菌的致病性。

3 討論

本文報道的金線蘭灰霉病為大棚栽培金線蘭生長中出現的一種新病害，該病的病原被鑒定為灰葡萄孢(B.cinerea)。該菌有廣泛的寄主范圍，可引起多種作物的灰霉病。病菌主要以分生孢子通過氣流進行傳播，在適宜的寄主及栽培環境條件下發病急、損失大。由于金線蘭可整株入藥或食用，故對于該病的防治應重在預防。建議采取的預防措施有：移栽前做好大棚的清潔衛生工作；選擇長勢強壯的組培苗作為移栽苗，并做好瓶苗出瓶后的介質清潔工作；保持栽培大棚中良好的通風環境，噴水時避免植株上留有水滴；栽培過程應盡量避免人工造成的機械傷口及減少害蟲的為害；發現病株立即清除，發病初期可選用50%腐霉利可濕性粉劑1 500～2 000倍，或45%噻菌靈懸浮劑800～1 200倍，或50%異菌脲可濕性粉劑1 000～1 500倍，隔7～10 d噴1次，連續噴2～3次。

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[13]張中義.中國真菌志(第26卷)葡萄孢屬柱隔孢屬[M].北京:科學出版社,2006.

A preliminary report on occurrence of gray mold onAnoectochilusroxburghii

Zhang Shuling1, Lin Guyuan2, Ou Gaozheng1

(1. Department of Horticulture and Garden, Fujian Vocational College of Agriculture, Fuzhou 350119, China;2. Fujian Entry-Exit Inspection and Quarantine Bureau, Fuzhou 350001, China)

Gray mold is a new important disease onAnoectochilusroxburghii. The symptoms of the disease were observed and its pathogen was identified asBotrytiscinereaPers. based on morphology, analysis of ribosome rDNA-ITS sequences and pathogenicity. According to the occurrence characteristics of the disease, the corresponding control measures were proposed.

Anoectochilusroxburghii; gray mold; pathogen identification; investigation of disease; control measures

2014-02-28

2014-05-13

福建農業職業技術學院2014年重點課題

S 432.4

A

10.3969/j.issn.0529-1542.2015.02.027

* 通信作者 E-mail： 345535249@qq.com