桃樹黃萎病在我國首次發生報道

何蘇琴, 荊卓瓊, 白 濱, 文朝慧, 陳建軍

(1. 甘肅省農業科學院植物保護研究所，蘭州 730070；2. 甘肅省農業科學院農業質量標準與檢測技術研究所，蘭州 730070；3. 甘肅省出入境檢驗檢疫局，蘭州 730020；4. 甘肅省農業科學院林果花卉研究所，蘭州 730070)

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桃樹黃萎病在我國首次發生報道

何蘇琴1*, 荊卓瓊1, 白 濱2, 文朝慧3, 陳建軍4

(1. 甘肅省農業科學院植物保護研究所，蘭州 730070；2. 甘肅省農業科學院農業質量標準與檢測技術研究所，蘭州 730070；3. 甘肅省出入境檢驗檢疫局，蘭州 730020；4. 甘肅省農業科學院林果花卉研究所，蘭州 730070)

在甘肅省農業科學院林果所2010年建植的桃園內，自2011年以來，每年6-8月都陸續出現枯死的桃樹；嚴重年份桃樹病株率達20%。經病原菌分離培養、形態觀察和致病性測定，確認桃樹枯死是由大麗輪枝菌(Verticilliumdahliae)侵染所致。這是桃樹黃萎病在我國的首次發生報道。

桃樹；Verticilliumdahliae； 黃萎病

大麗輪枝菌(Verticilliumdahliae)是一種農田中常見、寄主范圍廣泛的植物病原菌，可以侵染數百種有經濟價值的植物，包括觀賞花卉、蔬菜、纖維作物、精油和調料作物、漿果、觀賞樹木、果樹和灌木等。易感病的果樹和灌木有：咖啡屬(CoffeaLinn.)小粒咖啡(C.arabicaLinn.)；木犀欖屬(OleaLinn.)木犀欖(O.europaeaLinn.)；鱷梨屬(PerseaMill.)鱷梨(P.americanaMill.)；黃連木屬(PistaciaLinn.)阿月渾子(P.veraLinn.)；李屬(PrunusLinn.)巴旦杏(P.amygdalusDulcis)、甜櫻桃(P.aviumLinn.)、酸櫻桃(P.cerasusLinn.)、櫻桃李(P.cerasiferaEhrhar)、歐洲李(P.domesticaLinn.)、桂櫻(P.laurocerasusLinn.)、盧李梅(P.lusitanicaLinn.)、P.pennsylvanicaLinn.;杏屬(ArmeniacaMill.)梅(A.mumeSieb.)；桃屬(AmygdalusLinn.)桃(A.persicaLinn.)、扁桃(A.communisLinn.)；櫻屬(CerasusMill.)圓葉櫻桃[C.mahaleb(Linn.) Mill.);懸鉤子屬(RubusLinn.)黑莓(R.allegheniensisPorter)、覆盆子(R.idaeusLinn.)、喜陰懸鉤子(R.occidentalisLinn.)、空心泡(R.rosae-foliusSmith)、黑樹莓(R.ursinusCham.)；可可樹屬(TheobromaLinn.)可可(T.cacaoLinn.)等。蘋果屬(MalusMill.)和梨屬(PyrusLinn.)植物不受侵染。由于歷史的原因，Verticilliumdahliae常與黑白輪枝菌(V.albo-atrum)混淆，在一些早期文獻中，許多木本植物黃萎病的病原被錯定為V.albo-atrum。這兩個種除了在形態上存在一定差別外(V.dahliae菌絲和分生孢子梗白色，產生微菌核；V.albo-atrum分生孢子梗具暗色的基部，產生暗色的休眠菌絲，不產生微菌核),其寄主范圍也存在差異：V.dahliae擁有極其廣泛的寄主范圍，而V.albo-atrum的寄主范圍很窄，主要從啤酒花(HumuluslupulusLinn.)、臭椿[Ailanthusaltissima(Mill.)Swingle]、馬鈴薯(SolanumtuberosumLinn.)和紫花苜蓿(MedicagosativaLinn.)上分離到[1-2]。

2011年以來，在甘肅省農業科學院林果花卉研究所2010年建植的桃園內(該園為桃樹品種圃，之前園內種植的是蘋果樹和棗樹)，每年的6-8月都陸續出現枯死的桃樹，嚴重年份(2011年)，病株率達20%，病害在園內呈點、片狀發生。

通過對病樹的病原分離、回接和病原菌形態學觀察，確認桃樹枯死是由大麗輪枝菌(Verticilliumdahliae)侵染引起的。經文獻檢索，這是桃樹黃萎病在我國的首次發生報道。

1 材料與方法

1.1 病害發生觀察和標樣采集

2011年7月18日和2013年6月14日，從甘肅省農業科學院林果花卉研究所的桃園內采集典型黃萎病癥狀的桃樹病枝，用枝剪剪取罹病枝條(每株病樹剪取5個枝條)，用于病原菌分離。共采集了14份標樣(其中2011年4份，2013年10份)。

在2011-2014年生長季，對桃園中罹病桃樹的病害癥狀及病害發展情況進行不定期觀察。

1.2 病原菌分離及形態學鑒定

1.2.1 培養基配方

PDA：馬鈴薯200 g，葡萄糖15 g，瓊脂粉12 g，自來水1 000 mL。

PD培養液：馬鈴薯200 g，葡萄糖15 g，自來水1 000 mL。

1.2.2 病原菌分離

以每株病樹為一個分離單位進行病原菌的分離。將病枝剪成大小約0.5 cm節段，75%乙醇表面消毒3 s，滅菌水沖洗3次，用滅菌濾紙吸干病組織表面水分，置PDA平板上，(25±2)℃下培養，長出的菌絲及時轉至PDA平板上，并通過挑取菌絲尖端進行純化，對純化菌株編號并進行顯微形態觀察。

1.2.3 Koch’s法則證病

用于接種的菌株(菌株編號桃-3-1，2011年7月18日分離)在PD培養液中25 ℃靜置培養4 d(每天搖動4次)，經4層紗布過濾并調整分生孢子濃度為1×106個/mL；自桃園采集當年生、50 cm長的健康枝條，每10條一組，共4組，將每組健康枝條分別插入盛200 mL清水(對照)和200 mL菌懸液的玻璃缸中，2次重復。4 h后所有處理補加清水200 mL。24 h后，將所有處理的菌懸浮液和清水全部倒出，重新加入500 mL清水。之后每天換清水，直至第7 天。

7 d后，取各處理桃枝1/2長處截取0.5 cm枝段，進行病原菌的重分離。分離方法同1.3.1。

1.2.4 病原菌形態特征觀察

將菌株桃-3-1在PDA平板上20 ℃下培養14 d，觀察和測量分生孢子梗、分生孢子和微菌核的形態和大小。采用Olympus BH-2生物顯微鏡觀察和測量培養物形態特征，各項目測量30次；采用DCM510拍攝顯微照片。

依據病菌分生孢子梗、分生孢子和微菌核的形態特征進行形態比對和種類鑒定。

2 結果與分析

2.1 癥狀描述

最初，桃樹部分枝條及葉片萎蔫，之后葉片黃化脫落，幼果皺縮，大多數病樹于發病1～2周后整棵樹枯死；樹齡4年的極個別病樹來年仍可存活(罹病枝枯死，無病枝仍存活)。部分病樹主干和病枝的韌皮部和木質部變黃褐色(圖1)。

2.2 病原菌分離和形態特征觀察

分離培養的14份標樣均獲得菌落形態一致的輪枝狀真菌。病菌菌絲白色、生長慢，氣生菌絲稀疏；菌落初為白色，隨著微菌核的大量產生，菌落漸呈黑色(見圖2a～d)。

顯微形態：分生孢子單細胞，無色，卵圓形、長橢圓形或桿狀，形狀和大小的變幅較大，大小為(2.44～11.35)μm× (1.22～4.89)μm，平均(5.11±2.00)μm×(2.63±1.06)μm；分生孢子梗無色，直立，單生、對生或1至多層輪生，每層輪枝上可生3～6個小梗，少數生側枝；小梗為細長的瓶梗，瓶梗大小為(12.09～29.34)μm×(1.10～2.75)μm，平均(20.68±4.94)μm×(2.00±0.54)μm；輪枝頂端的小梗長度可達30.56～71.43 μm。微菌核黑色，葚孢型，(20.90～119.40)μm×(14.93～35.82)μm，平均(54.73±24.27)μm×(25.37±5.30)μm，多個微菌核可相互連接，難分彼此(見圖2e～j)。

致病性：接種后1 h，接菌懸液的桃枝即呈萎蔫狀；接種后24 h，接菌懸液桃枝的吸水量明顯少于對照，吸水量約為對照的1/2。接種7 d后，對接種桃枝進行病原菌的重分離，原接種菌的分出率為60%，對照枝條未分出病菌。

圖1 桃樹黃萎病田間癥狀Fig.1 Field symptoms of peach trees infected by Verticillium dahliae

依照科赫氏法則及病菌形態特征比對[1-6]，將桃樹黃萎病的病原鑒定為VerticilliumdahliaeKleb.。通過查閱相關文獻確定這是我國對桃樹黃萎病的首次報道。

3 討論

黃萎病是溫帶地區作物的重要病害，病害在農灌區尤其突出。潮濕的土壤和21～27 ℃的溫度有利于黃萎病發生[7]，一旦被V.dahliae感染，土壤的侵染力可以保持10年或更長時間[1]。V.dahliae可以在超過25個屬的雙子葉雜草上定殖，產生或不產生病害癥狀[1]。V.dahliae通過羊的消化道后仍可保持致病力，羊可以作為病菌攜帶者跨區域遠距離傳播病菌[8]。寄主和非寄主植物根分泌物可刺激微菌核萌發[7]。植物病原線蟲，特別是短體線蟲屬(Pratylenchus)的線蟲可以加重黃萎病的發生[1]。良好的土壤肥力有助于提高植物的抗病能力，合適的氮磷比可以減輕黃萎病的嚴重度[7]。在生長季的早期澆水過多可導致發病率增加；控制用水量可以降低病害嚴重度[7]。無論作為保護劑或治療劑，尚沒有任何一種殺菌劑能取得令人滿意的防治效果[1]。利用抗耐病品種或砧木，選用無病苗木，無病土壤種植是避免病害發生的最好辦法[7]。

圖2 病原菌形態特征Fig.2 Morphological characteristics of the pathogen

利用蕓薹屬植物作為綠肥和進行輪作倒茬，及利用太陽暴曬進行土壤消毒等措施，在馬鈴薯、草莓、花椰菜、油橄欖等作物的黃萎病和其他土傳病害的防治中取得了較好的效果[9-14]，值得在桃樹黃萎病的防治中借鑒并開展相關的試驗研究。

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The first report of peach trees verticillium wilt caused byVerticilliumdahliaein China

He Suqin1, Jing Zhuoqiong1, Bai Bin2, Wen Zhaohui3, Chen Jianjun4

(1. Institute of Plant Protection, Gansu Academy of Agricultural Sciences, Lanzhou 730070, China;2. Institute of Agricultural Quality Standards and Testing Technology, Gansu Academy of Agricultural Sciences, Lanzhou 730070, China; 3. Gansu Entry-exit Inspection and Quarantine Bureau,Lanzhou 730020, China; 4. Institute of Fruit and Floriculture Research, Gansu Academy of Agricultural Sciences, Lanzhou 730070, China)

Wilted and defoliated peach trees were observed in June to August since 2011 in the peach garden (established by Institute of Fruit and Floriculture Research, Gansu Academy of Agricultural Sciences in 2010) in Lanzhou. The incidence reached to as high as 20% in the most serious year 2011. Following Koch’s Postulate, the pathogen was identified asVerticilliumdahliaebased on the morphological characteristics. This is the first report of verticillium wilt of peach trees caused byVerticilliumdahliaein China.

Prunuspersica；Verticilliumdahliae； verticillium wilt

2014-06-10

2014-09-12

S 436.621.1

B

10.3969/j.issn.0529-1542.2015.02.044

* 通信作者 E-mail： gshesuqin@sina.com