白頭翁提取液對潰瘍性結腸炎模型大鼠血清 TNF-α、IL-10的影響

吳 強，劉明暉*，孫 然，晉學飛，王 璞

（1．吉林大學中日聯誼醫院，長春130033；2．吉林大學臨床醫學院2013級，長春130033）

白頭翁提取液對潰瘍性結腸炎模型大鼠血清 TNF-α、IL-10的影響

吳 強1，劉明暉1*，孫 然1，晉學飛1，王 璞2

（1．吉林大學中日聯誼醫院，長春130033；2．吉林大學臨床醫學院2013級，長春130033）

目的 研究白頭翁提取液對潰瘍性結腸炎模型大鼠血清細胞因子TNF-α、IL-10的影響。方法 將Wistar大鼠48只隨機分為6組：正常對照組、模型組、中藥高、中、低劑量組、SASP組，采用TNBS法制備潰瘍性結腸炎大鼠模型，中藥高、中、低各劑量組分別按相應劑量給予白頭翁水提取液灌胃；SASP組給予SASP水溶液灌胃；正常對照組和模型組給予等量生理鹽水灌胃，各組均連續給藥15 d后觀察大鼠結腸黏膜損傷指數（CMDI）及檢測血清中TNF-α、IL-10含量。結果 與正常對照組比較，模型組大鼠CMDI評分均增加；與模型組比較，白頭翁各劑量組與SASP組CMDI評分均降低；與SASP組比較，白頭翁中劑量組顯著降低。與正常對照組相比，模型組大鼠血清中TNF-α含量顯著上升，IL-10含量顯著下降；與模型組相比，白頭翁各劑量組與SASP組大鼠血清中TNF-α含量均顯著下降，IL-10含量顯著上升。結論 白頭翁水提取液在潰瘍性結腸炎的治療中可能通過降低血漿中TNF-α水平和升高IL-10水平，起到促進潰瘍性結腸炎腸黏膜修復與潰瘍愈合的作用。

白頭翁提取液；潰瘍性結腸炎；血清細胞因子；TNF-α；IL-10

潰瘍性結腸炎（ulcerativecolitis，UC）是一種病因未明的、多因素、多層次的非特異性難治性疾病［1-3］，近年來我國發病率逐年上升［4-5］。現階段研究認為，潰瘍性結腸炎的發生與免疫異常、氧化損傷、細菌感染等多種因素有關。目前潰瘍性結腸炎的治療以氨基水楊酸類藥物為主［6］，該類藥的不良反應限制其在臨床上的應用。隨著中藥制劑在潰瘍性結腸炎治療上研究的增多，其優勢逐步得到重視，已成為治療潰瘍性結腸炎的重要手段之一。本實驗通過研究白頭翁提取液對實驗性潰瘍性結腸炎大鼠血清中TNF-α、IL-10含量的影響，探究白頭翁提取液對潰瘍性結腸炎的療效及作用機制。

1 材料

1.1 實驗動物 健康成年Wistar大鼠48只，SPF級，雌雄各半，體質量（200±20）g，由吉林大學基礎醫學院動物實驗中心提供，合格證號：SCXK（吉）20110004，通風、光照良好，自由進食與飲水。

1.2 藥品與試劑 白頭翁生藥：產地吉林，由吉林大學中日聯誼醫院中藥房提供；柳氮磺胺吡啶（SASP）：上海信誼嘉華藥業有限公司，批號：22120105；2，4，6-三硝基苯磺酸（TNBS）：美國Sigma公司生產；TNF-α、IL-10試劑盒：南京建成生物工程研究所提供，批號分別為：20120509，20120428。

1.3 儀器設備 Multiskan MK2酶標儀：北京北實縱橫科技發展有限公司；HH.B11.600電熱恒溫培養箱：上海躍進醫療器械廠；臺式高速冷凍離心機：無錫市瑞江分析儀器有限公司。

2 方法

2.1 藥物制備 將白頭翁生藥洗凈后加蒸餾水浸泡30 min，煎煮濃縮至含生藥100 mg／mL，冰箱保存備用，原濃縮液作為高劑量組給藥濃度，50 mg／mL稀釋溶液作為中劑量組給藥濃度，25 mg／mL稀釋溶液作為低劑量組給藥濃度。柳氮磺胺吡啶用無菌蒸餾水制備成30 mg／mL濃度水溶液置于4℃冰箱保存備用。

2.2 動物分組與造模 Wistar大鼠48只飼養7 d后，隨機分為6組，每組8只：正常對照組、模型組、中藥高、中、低劑量組、SASP組。采用TNBS造模法制備潰瘍性結腸炎大鼠模型［7］：除正常對照組外其余各組大鼠在造模前禁食不禁水24 h，麻醉后用TNBS腸腔內給藥造模。造模后大鼠所出現膿血便、黏液便、消瘦、懶動、拱背、扎堆、豎毛、毛色晦暗不潔、拖尾、扭體等現象，考慮為腹痛所致［8］。

2.3 給藥 造模2 d后，中藥各劑量組分別按相應濃度灌胃給藥，劑量為10 mL／kg；SASP組予SASP水溶液，10 mL／kg灌胃；正常對照組和模型組灌胃給予等量生理鹽水，各組連續給藥15 d。

2.4 標本采集與檢測 末次給藥后，各組大鼠禁食不禁水12 h，麻醉，開腹，經腹腔靜脈取血，離心分離血清后冰箱保存；血清TNF-α、IL-10含量檢測采用ELISA法，檢測步驟按試劑盒說明書操作。大鼠取血后分離結腸，剪開腸腔，對結腸黏膜損傷指數（CMDI）進行評分［9］。0分：黏膜無損傷；1分：輕度充血、水腫，黏膜表面光滑，無潰瘍及糜爛；2分：黏膜充血水腫，表面粗糙，有糜爛或黏連；3分：黏膜高度充血水腫，伴表面壞死，潰瘍最大縱徑＜1 cm，腸壁增厚；4分：在3分基礎上潰瘍最大縱徑＞1 cm，全腸壁壞死。

2.5 統計學方法 數據分析采用統計軟件SPSS 17.0，計量資料數據以均數±標準差（±s）表示；多組資料的統計采用單因素方差進行分析，組間資料的比較采用 t檢驗，以 P＜0.05為有統計學意義。

3 結果

3.1 各組大鼠CMDI評分比較 見表1。

表1 各組大鼠CMDI評分比較（±s，n＝8） 分

表1 各組大鼠CMDI評分比較（±s，n＝8） 分

注：與正常對照組比較 ，＃P＜0.05；與模型組比較 ，△P＜0.05；與SASP組比較，▲P＜0.05

評分正常對照組 0.25±0.07模型組 3.38±1.07＃白頭翁高劑量組 1.63±0.03△白頭翁中劑量組 1.50±0.54△▲白頭翁低劑量組 2.50±0.92△SASP組 2.38±0.72組 別 CMDI△

3.2 各組大鼠血清中TNF-α、IL-10含量比較 見表2。

表2 各組大鼠血清中TNF-α、IL-10含量比較（±s，n＝8）μg／L

表2 各組大鼠血清中TNF-α、IL-10含量比較（±s，n＝8）μg／L

注：與模型組比較 ，＃P＜0.05；與正常對照組比較 ，△P＜0.05

組 別 TNF-α IL-10正常對照組 0.890±0.218 65.06±3.55模型組 1.875±0.356△ 49.72±4.05△白頭翁高劑量組 1.043±0.125＃ 65.09±3.43＃白頭翁中劑量組 1.124±0.132＃ 58.33±3.52＃白頭翁低劑量組 1.324±0.133＃ 54.63±2.84 SASP組 1.293±0.138＃ 61.21±3.93＃

4 討論

TNF-α是潰瘍性結腸炎發病機制中重要的促炎性細胞因子之一［10］，通過與相關受體結合，進一步激活巨噬細胞，并加強T細胞應答，使血管內皮表達黏附分子，募集中性粒細胞至炎癥局部，促使水腫并誘導肉芽組織形成［11］。此外，TNF-α還可通過激活NF-κB通路，上調IL-6、IL-8等促炎性細胞因子的表達，使炎癥級聯反應進一步放大，導致炎癥遷延。IL-10又名細胞因子合成抑制因子，是一種抗炎性與免疫抑制性細胞因子，主要由活化的單核細胞和巨噬細胞產生，可通過抑制激活的單核細胞、巨噬細胞、粒細胞和T淋巴細胞等發揮其功能，在穩定腸道黏膜內環境中起到重要作用。研究［12］報道：剔除IL-10基因的小鼠可自發結腸炎，說明IL-10在腸道正常黏膜免疫平衡調節中發揮著重要作用。

研究［13-15］發現，白頭翁水提取物對模型大鼠結腸炎具有明顯的抑制作用，提示白頭翁可能通過抑制脂多糖刺激肝臟Kupffer細胞分泌TNF-α、IL-1等促炎細胞因子而發揮抗炎作用［16］。

本實驗通過對TNBS制備潰瘍性結腸炎大鼠模型，經過白頭翁水提取液治療后，血清中TNF-α的含量明顯下降，同時IL-10的含量明顯升高，可以得出白頭翁水提取液在潰瘍性結腸炎的治療中可能通過降低血漿中TNF-α水平和升高IL-10水平，來修復失衡的細胞因子網絡，抑制炎癥反應，減輕局部腸黏膜的炎癥損傷，從而起到促進潰瘍性結腸炎腸黏膜修復與潰瘍愈合的作用。

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Baitouweng extract on ulcerative colitis model rats serum of TNF-α，IL-10

WU Qiang1，LIU Minghui1*，SUN Ran1，JIN Xuefei1，WANG Pu2
（1．China-Japan Union Hospital of Jilin University，Changchun 130033，China；2．School of Clinical Medicine，Jilin University，Changchun 130033，China）

objective To experiment and analyze the effects of baitouweng extract on ulcerative colitis model rats serum cytokines of TNF-α，IL-10．Methods The 48 Wistar rats are randomly divided into 6 groups：normal control group，model group，high dose group，medium dose group，low dose group，SASP group，TNBS method is used to prepare model of big UC rats，high，medium and low dose groups are respectively given baitouweng water extract according to the corresponding dose for intragastric administration；SASP group is given SASP aqueous solution for intragastric administration；Normal control group and model group is given equal normal saline lavage for intragastric administration，the above groups are given continuous dosing for 15 d and then colon mucosa damage index（CMDI）and to detect the contents of serum，TNF-α，IL-10 are observed in the rat．Results Compared with normal control group，CMDI score in model group rats increased significantly；Compared with model group，CMID scores in each baitouweng dose groups and SASP group decreased significantly；Compared with SASP group，dose group is significantly reduced in baitouweng groups．Compared with normal control group，the serum content of TNF-α of model group rats considerably increased，and IL-10 content decreased significantly；Compared with modelgroup，serum content of TNF-α in each baitouweng dose group and SASP group decreased significantly，and IL-10 content increased significantly．Conclusion In the treatment of UC，baitouweng extract may promote UC intestinal mucosa repair and digestive unlcer healing through decreasing the level of TNF-α in blood plasma and increasing the level of IL-10．

baitouweng；UC；serum cell factor；TNF-α；IL-10

R285.5

A

2095-6258（2015）05-0919-03

10．13463／j．cnki．cczyy．2015．05．013

2015-01-21）

吉林省科技廳社會發展重點資助項目（20110950）；吉林省中醫藥管理局科技資助項目（2010076）。

吳 強（1959-），男，醫學碩士，副教授，主要從事中醫治療消化系統疾病的臨床研究。

*通信作者：劉明暉，醫學碩士，主治醫師，電話-（0431）84995840，電子信箱-liumh＠jlu．edu．cn